人PD-L1抗体制造技术

本发明专利技术提供全人抗PD‑L1抗体或其片段。在各种实施例中，所述抗体或其片段包括VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，其分别选自由如SEQ ID NO:35‑42、SEQID NO:43‑51、SEQ ID NO:52‑66、SEQ ID NO:67‑79、SEQ ID NO:80‑88及SEQ ID NO:89‑102所示的序列或其各自的变体组成的组。本发明专利技术还提供了使用所述抗体或其片段治疗和诊断诸如癌症和传染病等疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人PD-L1抗体
技术介绍
程序性死亡配体1(PD-L1)，也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，针对其的抗体被用于癌症治疗和其他临床应用。PD-L1是一种40kDa的1型跨膜蛋白，被认为在妊娠、组织移植、自身免疫性疾病和肝炎等疾病状态下对免疫系统起着重要的抑制作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递了一种抑制信号，这种抑制信号可减少淋巴结处CD8+T细胞的增殖，并且所述结合还能够使得PD-1通过凋亡控制淋巴结中外来抗原特异性T细胞的积聚，而凋亡通过Bcl-2基因的下调来进一步介导。除癌症治疗外，PD-L1的抑制性还有望在治疗感染性疾病中发挥作用。在胞内感染小鼠模型中，单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)能够诱导T细胞、NK细胞和巨噬细胞中PD-L1蛋白的表达。PD-L1阻断剂(例如，使用阻断抗体)能够导致被感染小鼠的死亡率增加。阻断剂减少了巨噬细胞中TNFα和一氧化氮的产生和NK细胞中颗粒酶B的产生，并降低了对单核细胞增生李斯特菌抗原特异性的CD8T细胞(而非CD4T细胞)的增殖。这些证据表明PD-L1在胞内感染中起着正性共刺激分子的作用。
技术实现思路
概述本专利技术提供一种对人PD-L1蛋白具有高亲和力的抗PD-L1抗体，并且该抗体可有效阻断PD-L1与其受体PD-1之间的相互作用。所鉴定的抗体是全人抗体，并且预期在临床应用中具有比人源化抗体更好的性能。本专利技术的一个实施方案提供一种抗PD-L1抗体或其片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VHCDR1，其含有选自如SEQIDNO:35-42所示的氨基酸序列及其具有一个或两个氨基酸取代的变体；VHCDR2，其含有选自如SEQIDNO:43-51所示的氨基酸序列及其具有一个或两个氨基酸取代的变体；VHCDR3，其含有选自如SEQIDNO:52-66所示的氨基酸序列及其具有一个或两个氨基酸取代的变体；VLCDR1，其含有选自如SEQIDNO:67-79所示的氨基酸序列及其具有一个或两个氨基酸取代的变体，VLCDR2，其含有选自如SEQIDNO:80-88所示的氨基酸序列及其具有一个或两个氨基酸取代的变体，以及包含选自如SEQIDNO:89-102所示的氨基酸序列的VLCDR3及其具有一个或两个氨基酸取代的变体。在一个实施方案中，所述VHCDR1包含如SEQIDNO:37所示的氨基酸序列，所述VHCDR2包含如SEQIDNO:46、135、136、137、142或143所示的氨基酸序列，所述VHCDR3包含如SEQIDNO:63所示的氨基酸序列，所述VLCDR1包含如SEQIDNO:76所示的氨基酸序列，所述VLCDR2包含如SEQIDNO:83所示的氨基酸序列，以及所述VLCDR3包含如SEQIDNO:97所示的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，所述VHCDR2包含如SEQIDNO:46所示的氨基酸序列。在示例抗体或片段中，VH包含如SEQIDNO:23、124、126、127、128、130、140或145所示的氨基酸序列，且所述VL包含如SEQIDNO:24或125所示的氨基酸序列，以及它们的变体。例如，所述VH包含如SEQIDNO:124所示的氨基酸序列或与SEQIDNO:124具有至少95％序列同源性的第一氨基酸序列(同时保留所述CDRs)，且所述VL包含如SEQIDNO:125所示的氨基酸序列或与SEQIDNO:125具有至少95％序列同源性的第二氨基酸序列(同时保留所述CDRs)。本专利技术还提供了一种组合物，其包含所述抗体或其片段以及药学上可接受的载体。本专利技术还提供一种或多种编码所述抗体或其片段的多核苷酸、包含一种或多种编码所述抗体或其片段的多核苷酸的分离的细胞。本专利技术还提供了治疗方法和用途。在其中一个实施方案中提供了在有需求的患者中治疗癌症或感染的方法，包括向患者施用有效剂量的本专利技术公开的抗体或其片段。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述癌症是膀胱癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲状腺癌。在一些实施方案中，所述癌症可以是膀胱癌、肝癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、结肠直肠癌、头颈癌、鳞状细胞癌、梅克尔细胞癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌和小细胞肺癌。在一些实施方案中，该方法还包括向患者施用第二种癌症治疗剂。在一些实施方案中，所述感染是病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。附图说明图1显示测试抗体与PD-L1的结合图。图2显示抗体阻断PD1/PDL1介导的NF-AT荧光素酶活性的活性。图3显示所有测试抗体在荧光素酶抑制下剂量依赖性逆转PD1/PDL1介导的NF。图4显示突变抗体的功能测试结果。图5显示B12-01与Tecentriq和阿维单抗(avelumab)的基于细胞的亲和力测试结果。图6显示B12-01对PD-L1具有亚纳摩尔级别的亲和力。图7显示B12-01与人PD-L1和食蟹猴PD-L1的结合能力相当。图8显示B12-01有效阻断PD1蛋白与细胞表面PDL1的结合。图9显示B12-01在体外显著促进人T细胞活化。图10显示B12-01抑制肿瘤生长的体内功效。专利技术详述定义应当注意的是，术语“一种”实体是指一种或多种该实体，例如“一种抗体”应当被理解为一种或多种抗体，因此，术语“一种”(或“一个”)、“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中互换使用。多聚核苷酸或多聚核苷酸区域(或多肽或多肽区域)与另一序列有具有一定百分比(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或者99％)的“序列同一性”是指当序列比对时，所比较的两个序列中该百分比的碱基(或氨基酸)相同。可以使用本领域已知的软件程序来确定该比对和同源性百分比或序列同一性，比如Ausubeletal.eds.(2007)在CurrentProtocolsinMolecularBiology中所述的软件程序。优选使用默认参数进行比对。其中一种比对程序是使用默认参数的BLAST。特别地，程序是BLASTN和BLASTP，两者使用下列默认参数：Geneticcode＝standard；filter＝none；strand＝both；cutoff＝60；expect＝10；Matrix＝BLOSUM62；Descriptions＝50sequences；sortby＝HIGHSCORE；Databases＝non-redundant；GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBankCDStranslations+SwissProtein+SPupdate+PIR。生物学上等同的多聚核苷酸是具有上述指定百分比的同源性并编码具有相同或相似生物学活性的多肽的多聚核苷酸。术语“等价的核酸或多聚核苷酸”本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段对人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白具有特异性，并且包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(VH)和含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(VL)，其中：/n所述VH CDR1包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，/n所述VH CDR2包含如SEQ ID NO:46、135、136、137、143或144所示的氨基酸序列，/n所述VH CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列，/n所述VL CDR1包含如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，/n所述VL CDR2包含如SEQ ID NO:83如的氨基酸序列，以及/n所述VL CDR3包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190426 CN PCT/CN2019/0844681.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段对人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白具有特异性，并且包含含有VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区(VH)和含有VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区(VL)，其中：
所述VHCDR1包含如SEQIDNO:37所示的氨基酸序列，
所述VHCDR2包含如SEQIDNO:46、135、136、137、143或144所示的氨基酸序列，
所述VHCDR3包含如SEQIDNO:63所示的氨基酸序列，
所述VLCDR1包含如SEQIDNO:76所示的氨基酸序列，
所述VLCDR2包含如SEQIDNO:83如的氨基酸序列，以及
所述VLCDR3包含如SEQIDNO:97所示的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，
所述VHCDR1包含如SEQIDNO:37所示的氨基酸序列，
所述VHCDR2包含如SEQIDNO:46所示的氨基酸序列，
所述VHCDR3包含如SEQIDNO:63所示的氨基酸序列，
所述VLCDR1包含如SEQIDNO:76所示的氨基酸序列，
所述VLCDR2包含如SEQIDNO:83所示的氨基酸序列，以及
所述VLCDR3包含如SEQIDNO:97所示的氨基酸序列。


3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH包含如SEQIDNO:23、124、126、127、128、130、140或145所示的氨基酸序列，且所述VL包含如SEQIDNO:24或125所示的氨基酸序列。


4.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH包含如SEQIDNO:124所示的氨基酸序列或与所述SEQIDNO:124具有至少95％序列同源性的第一氨基酸序列，且所述VL包含如SEQIDNO:125所示的氨基酸序列或与所述SEQID:125具有至少95％序列同源性的第二氨基酸序列。


5.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段对人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白具有特异性，并且包含含有VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区(VH)和含有VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区(VL)，其中：
所述VHCDR1包含如SEQIDNO:38或132所示的氨基酸序列，
所述VHCDR2包含如SEQIDNO:47、133或134所示的氨基酸序列，
所述VHCDR3包含如SEQIDNO:57所示的氨基酸序列，
所述VLCDR1包含如SEQIDNO:72所示的氨基酸序列，
所述VLCDR2包含如SEQIDNO:84所示的氨基酸序列，以及
所述VLCDR3包含如SEQIDNO:93所示的氨基酸序列。


6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH包含如SEQIDNO:11、121、122或123所示的氨基酸序列或与所述SEQIDNO:11、121、122或123具有至少95％序列同源性的第一氨基酸序列，且所述VL包含如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列或与所述SEQIDNO:12具有至少95％序列同源性的第二氨基酸序列。


7.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段对人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白具有特异性，并且包含含有VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变区(VH)和含有VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变区(VL)，其中：
所述VHCDR1包含如SEQIDNO:37所示的氨基酸序列，
所述VHCDR2包含如SEQIDNO:46、135、136、137、143或144所示的氨基酸序列，
所述VHCDR3包含如SEQIDNO:63所示的氨基酸序列，
所述VLCDR1包含如SEQIDNO:71所示的氨基酸序列，
所述VLCDR2包含如SEQIDNO:83所示的氨基酸序列，以及
所述VLCDR3包含如SEQIDNO:101、138或139所示的氨基酸序列。


8.如权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH包含如SEQIDNO:31、124、126、127、128、130、140或145所示的氨基酸序列或与所述SEQIDNO:31、124、126、127、128、130、140或145具有至少95％序列同源性的第一氨基酸序列，且所述VL包含如SEQIDNO:32、129或131所示的氨基酸序列或与所述SEQIDNO:32、129或131具有至少95％的序列同源性的第二氨基酸序列。


9.如权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其进一步包含重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或其组合。


10.如权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：方磊，杨园园，王正毅，郭炳诗，崔菲菲，
申请(专利权)人：天境生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31