DMP纳米粒在mRNA递送中的用途制造技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。针对目前mRNA递送缺乏高效安全的载体的问题，本发明专利技术提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途，为mRNA递送提供一种新的递送载体。本发明专利技术的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG‑PCL混合制备得到。本发明专利技术所述的DMP纳米粒递送mRNA细胞毒性低、转染率高，具有很好的前景。同时，本发明专利技术的DMP纳米粒与mRNA复合而成的复合物，可以在体内有效抑制结肠癌肿瘤组织的生长，为疾病治疗提供了一种新的策略。

【技术实现步骤摘要】
DMP纳米粒在mRNA递送中的用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。
技术介绍
结直肠癌的治疗包括手术切除和辅助化疗，或靶向治疗和化疗的联合治疗。此外，基因治疗也是一种潜在的治疗选择，它主要是通过载体将外源核酸导入靶细胞，改变基因表达，治疗疾病。信使RNA是一类能被翻译成细胞蛋白质的RNA分子。已有许多现有的研究发现将mRNA导入细胞可以治疗遗传性疾病或作为抗肿瘤疫苗。由于mRNA在细胞质中发挥作用，可以避免作为pDNA主要障碍的核膜，也可以避免插入诱变的风险。此外，mRNA的结构元件比质粒少，降低了递送的难度。例如，对mRNA不需要启动子依赖的基因表达调节。然而，与DNA相比，RNA的稳定性要差得多。而mRNA为单链，具有灵活的线性结构，难以通过基因传递载体形成纳米颗粒。因此，理想的mRNA传递载体除了需要具有较高的转染效率外，还应当要具有保护和压缩RNA的能力。现有的mRNA递送载体系统主要是单载体系统和双载体系统。双载体系统是由两个载体组成，分别承担mRNA的压缩和递送功能。双载体系统更加成熟，体内研究报道较多，脂质体-鱼精蛋白是经典的组合之一；鱼精蛋白作为一种聚阳离子肽，可以压缩mRNA；脂质体作为常用的阳离子载体。在实践中，鱼精蛋白必须将mRNA压缩成纳米复合物之后，脂质体再将鱼精蛋白-RNA复合物输送到细胞中。然而，鱼精蛋白的提取和制备比较困难，双载体系统的复杂成分和操作步骤也限制了基因治疗临床的应用。单载体系统是指用一种载体，简单快速地与mRNA形成载药复合物。但是目前的单一载体大多存在原料类型过多，合成复杂等问题。因此，急需开发出一种原料简单，合成方法简单的单一载体来进行mRNA的递送。DMP纳米粒，即DOTAP-mPEG-PCL纳米粒，是一种由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物混合制备得到的纳米粒，目前，还没有关于DMP纳米粒递送mRNA的相关研究。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题为：为mRNA递送提供一种高效、安全的递送载体，也为DMP纳米粒开发了一种新的用途。本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。其中，上述用途中，所述的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到。其中，上述用途中，所述DMP纳米粒的平均粒径为28.30±0.86nm，平均电位为+39.03±0.26mV。其中，上述用途中，所述的DOTAP重量份数为1份，所述两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份。其中，上述用途中，所述DMP纳米粒由以下方法中的任意一种制备得到；方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP1份；b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到DMP纳米粒溶液；方法B为微流控法，包括以下步骤：a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP1份；b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控系统并收集，得到DOTAP-mPEG-PCL纳米粒溶液。进一步的，上述用途中，所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。其中，上述DOTAP-mPEG-PCL纳米粒的制备方法中，步骤b所述的水化溶液为双蒸水、去离子水、纯水、5％葡萄糖溶液或生理盐水中的至少一种。其中，上述用途中，所述的mRNA为表达IL-22BP蛋白、Bim蛋白或IL-15蛋白的mRNA分子。本专利技术还提供了一种上述DMP纳米粒复合mRNA的纳米复合物。本专利技术还提供了一种上述纳米复合物在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。其中，所述的纳米复合物的制备方法为：取DMP纳米粒25份，mRNA1份，在室温下混合即可。进一步的，所述的肿瘤为结肠癌、肺癌或乳腺癌。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。所用的DMP纳米粒为阳离子磷脂DOTAP与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到，制备方法可采用现有的薄膜旋蒸法，也可采用微流控法。该纳米粒能通过静电相互作用结合mRNA，可以有效地将目的基因导入细胞中，其本身具有细胞毒性低、转染率高等特征，在基于mRNA的基因功能研究、基因治疗研究及临床应用中有很好的应用前景。本专利技术的DMP纳米粒可介导不同基因发挥疗效，如DMP纳米粒递送的IL-22BP、Bim或IL-15等基因的mRNA分子可以在体内有效抑制结肠癌肿瘤组织的生长。DMP纳米粒是一种相对安全且高效的mRNA分子非病毒基因递送载体，制备所得DMP/mRNA复合物为疾病治疗提供了一种新的策略。附图说明图1为本专利技术所用的DOTAP化学结构式。图2为本专利技术所用的mPEG-PCL化学结构式。图3为本专利技术试验例1中乳腺癌动物模型治疗效果图；a表示肿瘤生长曲线，b表示平均肿瘤重量。图4为本专利技术试验例2中结肠癌动物模型治疗效果图；a表示平均肿瘤重量，b表示平均肿瘤结节数。图5为本专利技术试验例3中结肠癌动物模型治疗效果图；a表示肺重，b表示平均肺肿瘤结节数。具体实施方式本专利技术提供了一种DMP纳米粒在mRNA递送中的用途，所述的DMP纳米粒是由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到的。本专利技术中所采用的两亲性阳离子物质DOTAP，化学命名为(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵；所采用的两亲性mPEG-PCL共聚物，甲氧基聚乙二醇-聚己内酯，简称mPEGPCL。甲氧基聚乙二醇-聚己内酯纳米颗粒具有两亲性、良好的生物可降解性和生物相容性、避免了吞噬细胞吞噬、增加了药物在血液中的循环时间和生物利用度，持续释放和靶向传递从而增加了药效、减小了副作用。本专利技术通过大量筛选，发现当DOTAP重量份数为1份，两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份时，得到的DMP纳米粒递送mRNA的效果更好。本专利技术的DMP纳米粒可以采用常规方法制备得到。如，本专利技术给出了两种制备DMP纳米粒的方法，方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP1份；b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到DMP纳米粒溶液。方法B为微流控法，包括以下步骤：a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.DMP纳米粒在mRNA递送中的用途。


2.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在mRNA递送中的用途中，其特征在于：所述DMP纳米粒的平均粒径为28.30±0.86nm，平均电位为+39.03±0.26mV。


3.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在mRNA递送中的用途中，其特征在于：所述的DMP纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL混合制备得到。


4.根据权利要求3所述的DMP纳米粒在mRNA递送中的用途中，其特征在于：所述的DOTAP重量份数为1份，所述两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为9份。


5.根据权利要求1所述的DMP纳米粒在mRNA递送中的用途中，其特征在于：所述DMP纳米粒由以下方法中的任意一种制备得到；
方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物9份、DOTAP1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化...

【专利技术属性】
技术研发人员：门可，段醒妹，魏于全，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51