含有二高-γ-亚麻酸的微生物油的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种含有二高‑γ‑亚麻酸的微生物油的制备方法，所述方法包括：向液体培养基中添加至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂；以及在所述液体培养基中培养具有减小的Δ5去饱和作用活性或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物以产生所述含有二高‑γ‑亚麻酸的微生物油。通过本发明专利技术的制备方法得到的含有二高‑γ‑亚麻酸的微生物油中花生四烯酸含量低于通过传统方法获得的油中的花生四烯酸含量。

【技术实现步骤摘要】
含有二高-γ-亚麻酸的微生物油的制备方法本申请是申请号：201480066445.8、申请日：2014年12月4日、专利技术名称“含有二高-γ-亚麻酸的微生物油和含有二高-γ-亚麻酸的微生物生物质”的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种含有二高-γ-亚麻酸(下文也称为DGLA)的微生物油、含有二高-γ-亚麻酸的微生物生物质，并且涉及其制备方法和用途。
技术介绍
DGLA(8,11,14-二十碳三烯酸)是鱼油、海藻等中的脂肪酸成分之一。在诸如高山被孢霉(Mortierellaalpina)的微生物中DGLA已知作为花生四烯酸(下文中也称为ARA)的前体产生。然而，在含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、磷脂和甾醇作为脂质组分的微生物中仅有少量的DGLA产生。DGLA和ARA是具有相似的化学特性的脂肪酸。因此，将DGLA从ARA分离是困难的。已经提出了用于减少微生物中ARA的生成量以便以有效的方式产生DGLA的技术。例如，日本专利申请公开号(JP-A)H5-091887公开了一种制备DGLA或含有DGLA的脂质的方法，该方法包括培养具有产生花生四烯酸的能力但具有减小的或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物以产生DGLA或含有DGLA的脂质，并且回收DGLA或含有DGLA的脂质。JP-ANo.H5-091887还公开了在Δ5去饱和酶抑制剂，例如芝麻素或类似物的存在下培养具有产生花生四烯酸的能力但具有减小的或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物。此外，WO2005/083101公开了一种制备含有长链多不饱和脂肪酸，诸如花生四烯酸和DGLA，的磷脂作为组成组分的方法。该方法包括从脱脂细胞萃取磷脂的步骤，该脱脂细胞通过从产脂质微生物的细胞萃取含甘油三酯的油/脂肪而获得，所述微生物产生含有长链多不饱和脂肪酸的脂质作为组成组分。尽管有这些现有技术公开，但由于在获得具有令人满意和实用质量的产品方面的技术难度，至今富含DGLA的微生物油的商业化生产几乎没有出现。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题对较高纯度的含DGLA的油的需求增加，并且上述技术已经无法满足这种需求。本专利技术的目的是提供能够用来有效地获得含有二高-γ-亚麻酸的油的微生物油和微生物生物质，所述含有二高-γ-亚麻酸的油的花生四烯酸含量低于通过传统方法获得的油的花生四烯酸含量，以及提供其相应的制备方法和用途。解决问题的方式本专利技术提供了以下方面。第一个方面是微生物油，其包含二高-γ-亚麻酸作为所述油的脂肪酸成分，所述微生物油具有的花生四烯酸相对于二高-γ-亚麻酸(花生四烯酸/二高-γ-亚麻酸)的重量比为小于1/13。花生四烯酸/二高-γ-亚麻酸的重量比可以小于或等于1/15，优选地小于或等于1/20。合意地，微生物油的甘油三酯含量大于或等于70％重量，更优选地大于或等于90％重量。其可以含有例如，0.1％重量-10％重量的磷脂。所述油中饱和脂肪酸的含量合意地不超过40％重量。微生物油可以是粗制油或精制油。在粗制油中，优选地甘油三酯含量大于或等于90％重量。在粗制油中花生四烯酸相对于二高-γ-亚麻酸的重量比合意地小于或等于1/15，或本文中对此比率公开的任何其他值。当微生物油是精制油时，优选地甘油三酯含量大于或等于90％重量。在精制油中花生四烯酸相对于二高-γ-亚麻酸的重量比合意地小于或等于1/20，或本文中对此比率公开的任何其他值。另一个方面是包含二高-γ-亚麻酸酯的低级醇酯组合物，或包含二高-γ-亚麻酸的游离脂肪酸组合物，所述低级醇酯组合物或所述游离脂肪酸组合物通过如下的方法产生或可通过如下的方法获得，所述方法包括使本文公开的任何微生物油分别进行酯交换反应或水解反应。另一个方面是衍生自微生物油且包含二高-γ-亚麻酸酯的低级醇酯组合物，或衍生自微生物油且包含二高-γ-亚麻酸的游离脂肪酸组合物，其中花生四烯酸相对于二高-γ-亚麻酸(花生四烯酸/二高-γ-亚麻酸)的重量比小于1/13，或小于本文中对此比率公开的任何其他值。在微生物油中，本专利技术的任一方面的低级醇酯组合物或游离脂肪酸组合物的花生四烯酸含量通常小于或等于7％重量且优选地小得多，如下所述。本专利技术的任一方面的微生物油、低级醇酯组合物或游离脂肪酸组合物可被提供用作药物，优选地作为抗过敏药或抗炎药。作为这样的药物的用途是本专利技术提议的另一个方面。本方面包括用于预防、治疗或改善炎性疾病或变应性疾病的方法，或用于这种方法中的物质，所述方法包括：将包含本专利技术的任一方面的微生物油、低级醇酯组合物或游离脂肪酸组合物，以及优选地经纯化的二高-γ-亚麻酸或二高-γ-亚麻酸的低级醇酯，或含有它的组合物的药物施用于患有炎性疾病或变应性疾病或处于罹患炎性疾病或变应性疾病的风险中的受试者。所述药物可以局部或口服施用，优选地局部施用。炎性疾病或变应性疾病可以是且不限于特应性皮炎、变应性接触性皮炎(ACD)、刺激性接触性皮炎(ICD)、光接触性皮炎、系统性接触性皮炎、风湿病、银屑病、狼疮等中的任一种。本专利技术的任一方面的微生物油、低级醇酯组合物或游离脂肪酸组合物通常可以用于制备食品、膳食补充剂、药物、化妆品或动物饲料的方法中。本专利技术的更多的方面是与微生物细胞组合的含有如本文所定义的任意微生物油的微生物生物质，以及含有这种微生物生物质的液体培养基。在这样的液体培养基中，以微生物生物质的干重计，所述微生物生物质的含量可以大于或等于2.5g/L。合意地，所述液体培养基含有0.4g/L或更高的含量的微生物油。本专利技术的另一个方面提供了制备这种微生物油的方法，以及用于其进一步加工成有用产品的方法。一个方法方面是制备含有二高-γ-亚麻酸的微生物油，诸如本文公开的任何微生物油的方法，该方法包括：向液体培养基中添加Δ5去饱和酶抑制剂，尤其是两种或多于两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂，以及在所述液体培养基中培养具有减小的Δ5去饱和作用活性或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物以产生含有二高-γ-亚麻酸的微生物油。至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂中的一个可以是芳基苯甲酰胺Δ5去饱和酶抑制剂，尤其是2-氨基-N-(3-氯苯基)苯甲酰胺。至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂中的一种，或不同于2-氨基-N-(3-氯苯基)苯甲酰胺的所述Δ5去饱和酶抑制剂可以是由式(I)所表示的二氧杂二环[3.3.0]辛烷衍生物：其中，R1、R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是氢原子或具有1-3个碳原子的烷基；或者，R1和R2、和/或R4和R5一起形成亚甲基或亚乙基，并且n、m和L表示0或1；胡椒基丁醚、姜黄素或由式(II)所表示的化合物：其中，R1表示低级烷基；R2表示羟基、烷基、烷氧基、链烯基或氧基烷基，其中在存在多个R2的情况下，所述多个R2可以是相同的或不同的，并且n是0-5的整数。在使用二氧杂二环[3.3.0]辛烷衍生物的情况下，它可以选自芝麻素、芝麻本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备含有二高-γ-亚麻酸的微生物油的方法，所述方法包括：/n向液体培养基中添加至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂，以及/n在所述液体培养基中培养具有减小的Δ5去饱和作用活性或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物以产生所述含有二高-γ-亚麻酸的微生物油。/n

【技术特征摘要】
20131204 JP 2013-2514011.一种制备含有二高-γ-亚麻酸的微生物油的方法，所述方法包括：
向液体培养基中添加至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂，以及
在所述液体培养基中培养具有减小的Δ5去饱和作用活性或丧失了Δ5去饱和作用活性的微生物以产生所述含有二高-γ-亚麻酸的微生物油。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂中的一个是2-氨基-N-(3-氯苯基)苯甲酰胺。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少两种类型的Δ5去饱和酶抑制剂中的一个是由式(I)所表示的二氧杂二环[3.3.0]辛烷衍生物：



其中，R1、R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是氢原子或具有1-3个碳原子的烷基；或者，R1和R2、和/或R4和R5一起形成亚甲基或亚乙基，并且n、m和L表示0或1；
胡椒基丁醚、姜黄素或由式(II)所表示的化合物：



其中，R1表示低级烷基；R2表示羟基、烷基、烷氧基、链烯基或氧基烷基，其中在存在多个R2的情况下，所述多个R2可以是相同的或不同的，并且n是0-5的整数。


4.根据权利要求3所述的方法，其中所述二氧杂二环[3.3.0]辛烷衍生物是芝麻素、芝麻素酚、表芝麻素、表芝麻素酚、芝麻林素、2-(3,4-亚甲基二氧基苯基)-6-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-3,7-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、2,6-双-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-3,7-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、或2-(3,4-亚甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤诚造，深江拓朗，大塚尚美，山口秀明，池田理惠，
申请(专利权)人：日本水产株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP