转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用制造技术

本发明专利技术提供转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用，属于功能基因组学和生物医药技术领域。本发明专利技术通过研究证实，ZHX2基因可以通过下调NK细胞表面重要的活化性受体NKG2D的表达，抑制NK细胞的脱颗粒能力及细胞因子的分泌，实现对NK细胞杀伤功能的抑制。因此可以用于对人类自身免疫疾病和肿瘤的基因诊断和基因治疗，还可以针对ZHX2基因进行新药设计与开发。因此具有良好的实际应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用
本专利技术属于功能基因组学和生物医药
，具体涉及转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。自然杀伤(NK)细胞是固有免疫系统的重要组成部分，作为机体抗癌、抗病毒的第一道防线。活化的NK细胞不仅可以通过杀伤功能发挥杀伤肿瘤及病毒感染细胞的功能，还可以通过分泌细胞因子等方式，调节其他免疫细胞的特异性及非特异性免疫。作为连接固有免疫与适应性免疫的桥梁，NK细胞的活化、功能，对于机体的免疫调控至关重要。NK细胞功能的发挥，依赖于表面受体活化及效应因子的表达。目前对于NK细胞受体功能的研究较多，但是至今有关于NK细胞效应分子表达调控的机制，尤其是转录因子参与NK细胞效应功能的机制尚未得到阐明。ZHX2(Zincfingersandhomeoboxes2)是一种广泛表达于脊椎动物体内的、具有多个特殊结构域的核内转录因子。已有文献报道ZHX2在B细胞早期发育过程中起到关键作用，并且参与巨噬细胞的极化过程。但是专利技术人发现，ZHX2对于NK细胞功能调控的具体功能尚未见报道，属于新的功能未知蛋白。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术提供转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用，本专利技术以NK细胞的功能实验为基础，阐述转录因子ZHX2在NK细胞中的功能。对于ZHX2具体功能的研究，不仅能揭示这个基因在NK细胞中发挥的调控功能，而且为进一步了解NK细胞发育和功能调控奠定基础，因此具有良好的实际应用之价值。具体的，本专利技术涉及以下技术方案：本专利技术的第一个方面，提供转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用。本专利技术通过研究发现，转录因子ZHX2可以通过下调NK细胞表面重要的活化性受体NKG2D的表达，抑制NK细胞的脱颗粒能力及细胞因子的分泌，从而实现对NK细胞杀伤功能的抑制作用。其中，转录因子ZHX2可以为人源或非人源，优选为人源。本专利技术的第二个方面，提供促进转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性提高的物质在如下a1)-a7)任意一种或多种中的应用：a1)抑制NK细胞细胞因子的表达或制备抑制NK细胞细胞因子表达的产品；a2)抑制NK细胞效应分子的表达或制备抑制NK细胞效应分子表达的产品；a3)抑制NK细胞表面活化受体NKG2D的表达或制备抑制NK细胞表面活化受体NKG2D表达的产品；a4)促进NK细胞表面抑制性受体NKG2A的表达或制备促进NK细胞表面抑制性受体NKG2A表达的产品；a5)抑制NK细胞的脱颗粒能力或制备抑制NK细胞脱颗粒能力的产品；a6)抑制NK细胞的杀伤能力或制备抑制NK细胞杀伤能力的产品；a7)构建NK细胞杀伤能力细胞研究模型。本专利技术的第三个方面，提供一种组合物，其活性成分包括所述促进转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性提高的物质和其他抑制NK细胞杀伤能力的物质。本专利技术的第四个方面，提供抑制转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性降低的物质在如下b1)-b7)任意一种或多种中的应用：b1)促进NK细胞细胞因子的表达或制备促进NK细胞细胞因子表达的产品；b2)促进NK细胞效应分子的表达或制备促进NK细胞效应分子表达的产品；b3)促进NK细胞表面活化受体NKG2D的表达或制备促进NK细胞表面活化受体NKG2D表达的产品；b4)抑制NK细胞表面抑制性受体NKG2A的表达或制备抑制NK细胞表面抑制性受体NKG2A表达的产品；b5)促进NK细胞的脱颗粒能力或制备促进NK细胞脱颗粒能力的产品；b6)促进NK细胞的杀伤能力或制备促进NK细胞杀伤能力的产品；b7)抗肿瘤和/或抗自身免疫病或制备抗肿瘤和/或抗自身免疫病的产品。本专利技术的第五个方面，提供一种组合物，其活性成分包括所述抑制转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性降低的物质和其他促进NK细胞杀伤能力的物质。以上一个或多个技术方案的有益技术效果：上述技术方案通过利用分子克隆方法构建ZHX2基因真核表达载体，通过电转方式将ZHX2过表达质粒转入NK细胞，建立NK-ZHX2过表达细胞株。应用MTT法、流式细胞术、Real-timePCR技术分别对NK细胞的增殖、杀伤、脱颗粒能力以及活化/抑制性受体、细胞因子和杀伤颗粒的表达水平进行检测。此外，通过ZHX2小干扰质粒电转的方式，构建干扰ZHX2表达的NK92细胞系，通过干扰ZHX2在NK细胞中的表达，反向验证ZHX2对NK细胞功能的影响。通过流式细胞术检测NK-ZHX2干扰细胞株中，NK细胞杀伤、脱颗粒能力、细胞因子和杀伤颗粒的表达水平。研究ZHX2对NK细胞功能的调节作用。通过试验研究表明，ZHX2基因可以通过下调NK细胞表面重要的活化性受体NKG2D的表达，抑制NK细胞的脱颗粒能力及细胞因子的分泌，实现对NK细胞杀伤功能的抑制。因此可以用于对人类自身免疫疾病和肿瘤的基因诊断和基因治疗，还可以针对ZHX2基因进行新药设计与开发。因此具有良好的实际应用之价值。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为本专利技术实施例中pcDNA3.0-ZHX2-HA载体构建模式图。图2为本专利技术实施例中将载体转入NK细胞系中，ZHX2基因的过表达情况。pcDNA3.0表述NK细胞转染了空载体pcDNA3.0的对照组；pcZHX2表示转染表达载体pcDNA3.0-ZHX2-HA的实验组。A.Westernblot。B.Realtime-QPCR。图3为本专利技术实施例中用CFSE法检测ZHX2过表达后，NK细胞的增殖情况。A.CFSE流式典型图。B.CFSE统计分析图。图4为本专利技术实施例中用MTT法检测ZHX2过表达后，NK细胞对靶细胞K562的杀伤能力。A.NK92细胞系对靶细胞K562杀伤。B.NKL细胞系对靶细胞K562杀伤。图5为本专利技术实施例中ZHX2过表达后，NK细胞的脱颗粒能力。A.NK92细胞系对靶细胞K562杀伤。B.NKL细胞系对靶细胞K562杀伤。图6为本专利技术实施例中流式细胞术检测ZHX2过表达后，NK92细胞表面杀伤性受体表达情况。A.NKG2D统计分析图。B.NKG2A统计分析图。图7为本专利技术实施例中Real-timePCR检测ZHX2过表达后，NK92细胞表面杀伤相关受体NKG2D、asLmRNA表达情况，其中，A.NKG2D。B.NKG2A。C.FasL。图8为本专利技术实施例中Real-timePCR检测ZHX2过表达后，NK92细胞抗肿瘤细胞因子TNF-a，IFN-γ，杀伤相关分子perforin、granzy本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.转录因子ZHX2在NK细胞调控中的应用。


2.促进转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性提高的物质在如下a1)-a7)任意一种或多种中的应用：
a1)抑制NK细胞细胞因子的表达或制备抑制NK细胞细胞因子表达的产品；
a2)抑制NK细胞效应分子的表达或制备抑制NK细胞效应分子表达的产品；
a3)抑制NK细胞表面活化受体NKG2D的表达或制备抑制NK细胞表面活化受体NKG2D表达的产品；
a4)促进NK细胞表面抑制性受体NKG2A的表达或制备促进NK细胞表面抑制性受体NKG2A表达的产品；
a5)抑制NK细胞的脱颗粒能力或制备抑制NK细胞脱颗粒能力的产品；
a6)抑制NK细胞的杀伤能力或制备抑制NK细胞杀伤能力的产品；
a7)构建NK细胞杀伤能力细胞研究模型。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，
所述a1)中，所述细胞因子包括IFN-γ和TNF-a；
所述a2)中，所述效应分子包括但不限于穿孔素和颗粒酶B。


4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，促进ZHX2基因及其表达产物和/或活性升高的物质包括提高ZHX2基因表达水平的物质，进一步包括采用基于基因特异性Mimics技术上调ZHX2基因表达和/或促进其活性的物质；更进一步包括人工合成ZHX2的短发夹RNA、上调ZHX2基因表达的启动子、过表达载体或慢病毒；也包括化合物类促进剂；
优选的，构建ZHX2基因过表达载体所需引物序列如SEQIDNO.1-SEQIDNO.2所示序列。


5.一种组合物，其特征在于，其活性成分包括所述促进转录因子ZHX2基因及其表达产物和/或活性提高的物质和其他抑制NK细胞杀伤能力的物质。


6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，促进ZHX2基因及其表达产物和/或活性升高的物质包括提高ZHX2基因表达水平的物质，进一步包括采用基于基因特异性Mimics技术上调ZHX2基因表达和/或促进其活性的物质；更进一步包括人工合成ZHX2的短发夹RNA、上调ZHX2基因表达的启动子、过表达载体或慢病毒；也包括化合物类促进剂；
优选的...

【专利技术属性】
技术研发人员：马春红，谭思雨，高丽芬，梁晓红，王体潇，郭小维，武专昌，李春阳，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37