黄杉大小蠹的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针技术

本发明专利技术提供了一种黄杉大小蠹的检测方法，经试验筛选的特异性引物(HS

【技术实现步骤摘要】
黄杉大小蠹的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针


[0001]本专利技术属于生物物种分子鉴定
，涉及一种大小蠹的实时荧光PCR检测方法，具体涉及黄杉大小蠹的检测方法及其应用；此外，本专利技术还涉及检测黄杉大小蠹的引物和探针。

技术介绍

[0002]大小蠹属Dendroctonus属于鞘翅目Coleoptera、象甲科Curculionidae、小蠹亚科Scolytinae，是一类重要的森林生态系统蛀干害虫，其主要对松属、云杉属、黄杉属等林木造成危害，该属(非中国种)已被列入我国进境植物检疫性有害生物名录。全世界大小蠹属已知共20种，其中中、北美洲分布18种，欧洲、亚洲现分布3种。黄杉大小蠹Dendroctonuspseudotsugae属于大小蠹属非中国种，分布于加拿大、美国、墨西哥等国家，其寄主包括了花旗松Pseudotsuga menziesi、P.macrocarpa、落叶松属Larix、铁杉属Tsuga等多种树木，是有害生物风险性分析中具有高度危险等级的重要潜在外来入侵种。
[0003]随着我国对外贸易的日益频繁，进口本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.黄杉大小蠹的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物和探针；(2)提取黄杉大小蠹基因组DNA；(3)采用步骤(1)中引物进行实时荧光PCR检测，根据结果区分黄杉大小蠹和其他检疫性大小蠹昆虫。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物HS
‑
F序列为：5'
‑
GGAATTGACTAGTTCCTT
‑
3'；所述下游引物HS
‑
R序列为：5'
‑
ATTGCGTAGTCAACAGAGG
‑
3'。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述探针的引物HS
‑
P序列为：5'
‑
CTACTCTTAAGAAGAATTG
‑
3'。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述探针引物的5'端连接荧光基团FAM，3'端连接非荧光猝灭基团。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)的具体实施方法为：取供试黄杉大小蠹标本足或头胸部肌肉组织，进行基因组DNA的提取。6.根据权利要求1所述的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(3)所述实时荧光PCR检测方法的反应体系组分包括：Premix Ex Taq(Probe qPCR)(2
×
)10μL、上游引物HS
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F(10μM)0.4μL、下游引...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡波，孟瑞，刘嘉欢，徐卫，敖苏，刘福秀，韩玉春，潘英文，
申请(专利权)人：海口海关热带植物隔离检疫中心，
类型：发明
国别省市：