一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术提供了一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用，属于单克隆抗体制备技术领域，本发明专利技术提供的杂交瘤细胞株5A92B12能够稳定传代，可以持续、稳定地分泌抗犬细小病毒VP2蛋白的单克隆抗体；培养到10代后，所述杂交瘤细胞株5A92B12仍然能够生长良好、稳定传代，培养液上清效价仍然可以达到1

【技术实现步骤摘要】
一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体制备
，尤其涉及一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]犬细小病毒病(Canine Parvovirus Disease)是由犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)感染引起的以出血性肠炎和非化脓性心肌炎为主要特征的传染病，主要感染幼犬，由于发病快，死亡率很高，已成为养犬行业最严重的传染病之一。
[0003]犬细小病毒属于单股负链DNA病毒，基因组大小约5kb，包括两个开放阅读框(open reading frame，ORF)，3
′
端的ORF编码非结构蛋白NS1和NS2，5
′
端的ORF编码结构蛋白VP1和VP2；在基因组的两端各有一个发卡结构，其中3
′
端折叠形成“Y”型结构，而5
′
端形成“U”型结构，对病毒的复制和转录具有重要作用。VP2基因长1755bp，编码的584个氨基酸，是构成病毒衣壳的主要蛋白。VP2蛋白也是细小病毒的主要免疫蛋白，能够刺激机体产生保护性中和抗体，是制备基因工程疫苗的首选基因；另外VP2基因在受体识别、组织嗜性过程起关键性作用，同时与病毒的致病性、血凝特性有密切关系。
[0004]由于犬细小病毒没有囊膜，衣壳蛋白结构紧密，对外界环境的抵抗力很强，一旦感染很难彻底清除。由于幼犬免疫器官尚未发育成熟，通过疫苗免疫进行幼犬的预防效果不太理想。因此，一旦幼犬感染犬细小病毒，如何治疗就显得非常重要。目前，在犬细小病毒病治疗方面主要是通过抗病毒药物和犬细小病毒的高免血清联合使用，但多数病例还是以死亡为最终归属。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用；所述交瘤细胞株产生的单克隆抗体与犬细小病毒VP2蛋白能特异性识别，具有高特异性、高敏感性的优点，同时具有抑制犬细小病毒复制的特性，能够应用于犬细小病毒病的检测和治疗，具有良好的应用前景。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一株杂交瘤细胞株5A92B12，保藏编号为CCTCC NO：C202110。
[0008]本专利技术提供了所述的杂交瘤细胞株5A92B12在制备犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体中的应用。
[0009]本专利技术提供了一种犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体，由所述的杂交瘤细胞株5A92B12产生。
[0010]优选的，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0011]本专利技术提供了所述的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体在制备犬细小病毒病检测试
剂盒中的应用。
[0012]本专利技术提供了一种犬细小病毒病检测试剂盒，包括所述的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和检测试剂。
[0013]优选的，所述犬细小病毒病检测试剂盒为ELISA检测试剂盒、Western
‑
blot检测试剂盒或免疫荧光检测试剂盒。
[0014]优选的，所述检测试剂包括犬细小病毒VP2蛋白，所述犬细小病毒VP2蛋白作为包被抗原，所述犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体作为检测竞争抗体。
[0015]本专利技术提供了所述的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体在制备治疗犬细小病毒病的药物中的应用。
[0016]优选的，所述药物中犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的浓度为0.5～1μg。
[0017]本专利技术提供了一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用；所述交瘤细胞株产生的单克隆抗体与犬细小病毒VP2蛋白能特异性识别，具有高特异性、高敏感性的优点，同时具有抑制犬细小病毒复制的特性，能够应用于犬细小病毒病的检测和治疗，具有良好的应用前景。
[0018]本专利技术提供的杂交瘤细胞株5A92B12能够稳定传代，可以持续、稳定地分泌抗犬细小病毒VP2蛋白的单克隆抗体；培养到10代后，所述杂交瘤细胞株5A92B12仍然能够生长良好、稳定传代，培养液上清效价仍然可以达到1
×
106以上。
[0019]本专利技术提供的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体可以准确检测犬细小病毒病疫苗样品中有效抗原成分或感染组织样品中VP2蛋白的含量，在疫苗和临床检测中能够得到广泛应用；所述单克隆抗体具有抑制病毒复制的能力，能够用于犬细小病毒病的治疗。
附图说明
[0020]图1是犬细小病毒VP2蛋白重组表达的SDS
‑
PAGE电泳图，Marker是蛋白分子量标准(kDa)；
[0021]图2为犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的SDS
‑
PAGE结果图，Marker是蛋白分子量标准(kDa)；
[0022]图3为犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的Westernblot结果图；
[0023]图4为间接ELISA检测犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的效价；
[0024]图5为抗犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的病毒抑制实验结果，其中1为犬细小病毒经10
‑3稀释接种F81细胞96h的情况，2为犬细小病毒10
‑3稀释接种F81细胞，同时加入0.5μg的5A92B12单克隆抗体抑制病毒生长情况，3为犬细小病毒10
‑4稀释接种F81细胞96h的情况，4为犬细小病毒10
‑4稀释接种F81细胞，同时加入0.5μg的5A92B12单克隆抗体抑制病毒生长情况；图中标尺为400nm。
[0025]生物保藏说明
[0026]本专利技术提供的杂交瘤细胞株5A92B12，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202110，保藏日期为2021年3月25日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学第一附小对面)，武汉大学保藏中心。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供了一株杂交瘤细胞株5A92B12，保藏编号为CCTCC NO：C202110。在本专利技术中，所述杂交瘤细胞株5A92B12优选的通过以VP2抗原免疫小鼠获得的脾细胞和SP2/0细胞融合、筛选获得。
[0028]在本专利技术中，以VP2抗原免疫小鼠优选的包括第一次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫和加强免疫。在本专利技术中，所述第一次免疫优选的将所述VP2抗原与弗氏完全佐剂混合乳化后注射小鼠；在本专利技术中，所述VP2抗原与弗氏完全佐剂混合的体积比例优选为1:1；所述注射的部位优选为背部，所述注射优选为皮下多点注射；所述注射的剂量优选为50μg。在本专利技术中，所述第二次免疫优选的在第一次免疫2周后进行，所述第三次免疫优选的在所述第二次免疫2周后进行，所述第四次免疫优选的在所述第三次免疫2周后进行。在本专利技术中，所述第二次免疫、第三次免疫、第四次免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株杂交瘤细胞株5A92B12，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：C202110。2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株5A92B12在制备犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体中的应用。3.一种犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株5A92B12产生。4.根据权利要求3所述的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体，其特征在于，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。5.权利要求3或4所述的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体在制备犬细小病毒病检测试剂盒中的应用。6.一种犬细小病毒病检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3或...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷相平，毛箬青，王相伟，周亚花，殷娟斌，孙跃峰，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：