生物胺类神经递质的定量分析方法技术

本发明专利技术提供了一种生物胺类神经递质的定量分析方法，涉及检测技术领域。本发明专利技术提供的生物胺类神经递质的定量分析方法，将样品进行前处理，然后采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
生物胺类神经递质的定量分析方法


[0001]本专利技术涉及检测
，尤其是涉及一种生物胺类神经递质的定量分析方法。

技术介绍

[0002]生物胺类神经递质及其代谢物在中枢神经系统发挥着重要作用，包括精神运动功能控制，运动协调性控制，处理感官输入，保持情绪稳定，调节体温，影响记忆、食欲、情绪和睡眠。与其他神经递质类似，生物胺类神经递质应答动作电位，从突触前神经末梢释放，与后突触受体结合从而引发生物反应(激活或抑制目的细胞)。神经递质在突触间隙消失，可能被隐藏于囊泡中继续作为神经递质发挥作用，也可能被代谢清除。
[0003]通过检测体液中，特别是脑脊液中生物胺及其代谢物浓度，可准确反映儿茶酚胺和5
‑
羟色胺代谢在中枢神经系统中的完整性。
[0004]目前，国内没有医疗机构或第三方医学检测机构提供脑脊液中生物胺类神经递质及其代谢物的分析服务，原因在于脑脊液中生物胺及其代谢物浓度极低(低至0.2nmol/L)，且光照和pH值均影响其稳定性。国外有多家医学检测机构可检测这一类代谢物，多数采用液相色谱
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：将样品进行前处理，然后采用液相色谱
‑
串联质谱法对样品中的生物胺类神经递质进行定量分析；所述前处理包括衍生化和添加内参；所述生物胺类神经递质包括：3
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甲氧基
‑4‑
羟基
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苯乙二醇、5
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羟色胺、多巴胺、3
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甲氧酪氨、去甲肾上腺素、肾上腺素、甲变肾上腺素、去甲变肾上腺素、同型香草酸、5
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羟基吲哚乙酸、多巴、3
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甲氧多巴、香草扁桃酸、二羟基苯乙酸、5
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羟色氨酸和香草乳酸。2.根据权利要求1所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述样品包括脑脊液、血清、尿液、组织提取液或含生物胺类神经递质的药物中的至少一种。3.根据权利要求1所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述前处理包括如下步骤：a.向样品中依次加入内参A和饱和四硼酸钠溶液；b.向a步骤得到的溶液中依次加入衍生化试剂A和衍生化试剂B进行衍生化；c.向b步骤得到的溶液中加入内参B得到混合溶液；d.将所述c步骤的混合溶液依次进行萃取、干燥、复溶、过滤和稀释得到处理样品。4.根据权利要求3所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述内参A为包含D4
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多巴胺、D4
‑3‑
甲氧酪氨、D6
‑
去甲肾上腺素、D3
‑
肾上腺素、D3
‑
甲变肾上腺素和D3
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去甲变肾上腺素的盐酸水溶液；优选地，所述内参A中D4
‑
多巴胺、D4
‑3‑
甲氧酪氨、D6
‑
去甲肾上腺素、D3
‑
肾上腺素、D3
‑
甲变肾上腺素和D3
‑
去甲变肾上腺素的浓度各自独立的为10
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30nmol/L；优选地，所述内参A中盐酸的浓度为0.4％
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0.6％；优选地，所述内参B为包含D3
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丙醇酯化的同型香草酸、D3
‑
丙醇酯化的5
‑
羟基吲哚乙酸、D3
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丙醇酯化的多巴、D3
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丙醇酯化的3
‑
甲氧多巴、D3
‑
丙醇酯化的香草扁桃酸、D3
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丙醇酯化的二羟基苯乙酸、D3
‑
丙醇酯化的5
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羟色氨酸和D3
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丙醇酯化的香草乳酸的乙酸乙酯；优选地，所述内参B中D3
‑
丙醇酯化的同型香草酸、D3
‑
丙醇酯化的5
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羟基吲哚乙酸、D3
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丙醇酯化的多巴、D3
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丙醇酯化的3
‑
甲氧多巴、D3
‑
丙醇酯化的香草扁桃酸、D3
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丙醇酯化的二羟基苯乙酸、D3
‑
丙醇酯化的5
‑
羟色氨酸和D3
‑
丙醇酯化的香草乳酸的浓度各自独立的为0.5
‑
2μmol/L。5.根据权利要求3所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述衍生化试剂A包括正丙醇和3
‑
甲基吡啶；优选地，所述衍生化试剂A中正丙醇和3
‑
甲基吡啶体积比为(70
‑
80):(20
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30)，优选为77:23；优选地，所述衍生化试剂B包括二氯甲烷、氯甲酸丙酯和异辛烷；优选地，所述衍生化试剂B中二氯甲烷、氯甲酸丙酯和异辛烷的体积比为(70
‑
75)：(15
‑
20)：(10
‑
15)，优选为71.6:17.4:11；优选地，所述a
‑
c步骤中，样品、内参A、四硼酸钠水溶液、衍生化试剂A、衍生化试剂B和内参B的体积比为(90
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110)：(5
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15)：(40
‑
60)：(50
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100)：(30
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80)：(40
‑
60)，优选为100:10:50：80：50：50。6.根据权利要求3所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，d步骤中，所述萃取的萃取剂包括乙酸乙酯；
优选地，所述复溶采用的试剂包括丙酮；优选地，所述过滤的滤膜的材质包括GHP；优选地，所述滤膜的孔径为0.22
‑
0.45μm；优选地，所述稀释为采用去离子水稀释；优选地，所述丙酮与去离子水的体积比为(90
‑
110)：(40
‑
50)。7.根据权利要求3所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述内参B的制备方法包括如下步骤：向包含同型香草酸、5
‑
羟基吲哚乙酸、多巴、3
‑
甲氧多巴、香草扁桃酸、二羟基苯乙酸、5
‑
羟色氨酸和香草乳酸的水溶液中依次加入衍生化试剂C和衍生化试剂B，混合后用乙酸乙酯萃取，萃取液即为内参B；所述衍生化试剂C包括D3
‑
丙醇和3
‑
甲基吡啶，所述衍生化试剂C中D3
‑
丙醇和3
‑
甲基吡啶的体积比为(70
‑
80):(20
‑
30)，优选为77:23。8.根据权利要求1所述的生物胺类神经递质的定量分析方法，其特征在于，所述液相色谱的色谱柱包括反向色谱柱，优选为Waters ACQUITY UPLC BEH Phenyl Column；优选地，色谱柱的柱温为25
‑
50℃，优选为40℃；优选地，流动相包括流动相A和流动相B；优选地，所述流动相A为浓度为1
‑
10mmol/L乙酸铵水溶液，包含0.05％
‑
0.2％的乙酸；优选地，所述流动相B为乙腈；优选地，流动相流速为0.1
‑
0.5mL/min，优选的0.2mL/min；优选地，洗脱程序为0
‑
2.0min 40％流动相B，2.0
‑
5.0min流动相B逐渐升至70％，5.0
‑
7...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭敏芝，刘丽，
申请(专利权)人：广州市妇女儿童医疗中心，
类型：发明
国别省市：