一种真菌菌种保存方法技术

本发明专利技术提供一种真菌菌种保存方法，将干热灭菌的变色硅胶颗粒和干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入透明或半透明的无菌微量离心管或无菌指形管中，微量离心管或指形管使用封口膜封口，存放在透明或半透明的微量离心管冷冻盒中，放置于﹣20℃冰箱保存。使用本发明专利技术的方法保存真菌菌种，菌种存活率高，保存时间长，菌种的干燥状态易于观察。此外，在稳定的低温干燥条件下，菌种处于休眠状态，菌种的生物学特性不容易发生退化，从而能够很好地保持菌种固有的性状。而且，该保存方法还具有菌种不容易被污染、查找菌种方便、菌种取用方便、设备要求简单、占用空间小、保存容量大、工作效率高、方便远距离携带及邮寄等优点。方便远距离携带及邮寄等优点。方便远距离携带及邮寄等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种真菌菌种保存方法


[0001]本专利技术属于微生物学
，具体涉及真菌菌种的保存方法。

技术介绍

[0002]真菌微生物学领域，无论是科研还是教学都离不开菌种。真菌菌种是生物学真菌研究工作正常运行的关键，菌种质量的高低决定着研究工作的成败。为使自然界分离的优质菌种能够保持原有的优良性状，最大限度地发挥作用，就需要尽可能完好地保存菌种。好的菌种保存方法不仅能够延长菌种的保存时间，还能够防止菌种功能退化，有效地保持菌种的优良性状。
[0003]真菌菌种的保存方法很多，各有优缺点。大体上可分为4类，即传代法、干燥法、低温干燥法及冷冻法。
[0004]传代法，也叫定期移植法，是将真菌菌种移植到斜面培养基上，放置室温或者放置4℃冰箱中保存。该方法操作简便，适用广泛，不需要特殊存储设备，费用低。但缺点是传代法中微生物的生长和代谢活动几乎没有受到抑制，因而保存时间较短，需要经常进行移植(三个月或者更短时间就需要移植一次)，繁琐费时。传代法最致命的缺点还是多次继代培养后菌种的生物学特性容易退化，失去菌种原有的优良性状。
[0005]干燥保存法，是将菌种干燥后放置在干燥室温环境下进行保存的方法。通常的做法是利用5％的脱脂牛奶洗涤真菌孢子，配制成高浓度的孢子悬浮液后加在无菌硅胶上，室温干燥后放在盛有硅胶的干燥器中进行保存。干燥保存法保存的菌种便于运输，保存时间长。但干燥保存法适用范围较窄，只能保存在培养基上产生孢子的真菌菌种，而且一直放置在干燥器中，保存容量有限。
[0006]低温干燥保存法，是将需要保存的真菌孢子悬浮在保护剂如脱脂牛奶中，无菌分装后置于冷冻液中，加干燥剂(如硅胶等)抽真空进行干燥，然后封口放低温冰箱中保存。低温干燥保存法保存的菌种存活率高、保存时间长、菌种稳定性高；但操作繁琐，需专用设备，而且同样只能保存产生孢子的菌种。
[0007]冷冻法保存，是将菌种保存于﹣80℃的超低温冰箱，或者超低温冷冻保存在液氮(﹣196℃)中，冷冻法保存的菌种保存时间长，菌种不易退化。但冷冻法操作复杂，需特殊设备，液氮还需要定期添加，费用高昂。
[0008]此外还有很多改进后的保存方法。如矿物油保存法，即传代法利用培养基斜面保存菌种时，在培养基上面加一层灭菌石蜡油，加的量应该超过斜面顶部1cm，然后放置室温保存或者放置冰箱中冷藏保存。矿物油保存法简便，而且保存时间比较长，而且不需专用设备。有实验证明，矿物油保存法保存的一种半知菌在保存45年后依然存活。但矿物油容易污染环境，占用空间大而且有异味，且矿物油保存法保存的菌种恢复时生长缓慢且外观带粘性，一般需要多移植1～2次才能恢复正常。
[0009]此外还有Richards保存法，是将菌种培养在Richards培养液中，然后收集孢子平摊在滤纸上，干燥24h后于4℃中冰箱保存。
[0010]此外还有滤纸低温保存法。滤纸低温保存法是将真菌孢子收集在滤纸上，或将滤纸放置在真菌菌落上让孢子生长到滤纸上，或者将滤纸与菌种共培养，让真菌菌丝和(或)孢子长到滤纸上，然后将滤纸干燥后放置于﹣20℃冰箱中保存。比较起来，滤纸低温干燥保存菌种是最为经济有效的方法。
[0011]专利申请ZL 201710976139.5公开了一种真菌保存方法，是将干燥的带菌滤纸放入硫酸纸袋中，再将硫酸纸袋密封后装入信封内，在信封内添加干燥剂变色硅胶，最后再将信封装入塑料密封袋中保存。该方法中，硫酸纸袋、信封和塑料密封袋的密封性都不强，不能保证菌种处于良好的干燥环境，因而需要定期更换干燥剂，费力费时。而且三层袋子包裹菌种并且不透明，所以查找菌种、活化菌种、检测或更换硅胶干燥剂的过程中都需要一层层打开袋子，费时费力，工作效率低下，此外，还增加了冷冻材料放置室温的时间及频率。此外，更换硅胶不及时以及更换硅胶的过程中都容易造成菌种污染。另外，一个菌种套三个袋子，占用空间较大，导致保存容量小。
[0012]因此，如何提高菌种保存效果，降低污染，节约空间；如何快速从数千份保存菌种中迅速找出目标菌种；如何快速检查数千份菌种保存环境的干燥程度；如何减少更换干燥剂的频率、提高工作效率、缩短冷冻材料放置室温的时间，就成为真菌菌种保存中亟待解决的问题。

技术实现思路

[0013]本专利技术从以上几个方面进行改进，以延长菌种保存时间、提高工作效率、减少污染、节约空间。
[0014]本专利技术的目的是提供一种保存真菌菌种的方法，用小滤纸片作为真菌菌种保存的载体，将干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入装有无菌变色硅胶颗粒的无菌微量离心管或无菌指形管中，用封口膜将微量离心管或指形管封口，在低温环境下进行菌种的长期保存。
[0015]在本专利技术中，将干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片简称为真菌滤纸片。
[0016]本专利技术提供一种保存真菌菌种的方法，将干热灭菌的变色硅胶颗粒和干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入透明或半透明的无菌微量离心管或无菌指形管中，微量离心管或指形管使用封口膜封口，存放在透明或半透明的微量离心管冷冻盒中，放置于﹣20℃冰箱保存。
[0017]进一步地，变色硅胶颗粒的灭菌条件为160℃干热灭菌2小时。
[0018]进一步地，变色硅胶颗粒在干燥状态下呈现蓝色，潮湿的状态下为粉红色。在真菌滤纸片保存过程中，可以通过变色硅胶颗粒的颜色来观察微量离心管内的干燥状态。
[0019]进一步地，真菌滤纸片的干燥条件可以为，在底部盛有干燥变色硅胶的干燥器中室温干燥5天以上。
[0020]进一步地，微量离心管可以是尖底微量离心管或圆底微量离心管。例如可以是1.5ml尖底微量离心管、2ml圆底微量离心管等。
[0021]进一步地，微量离心管或指形管优选透明的微量离心管或指形管。
[0022]进一步地，封口膜可以为PARAFILM封口膜，也可以为透明保鲜膜。
[0023]进一步地，微量离心管冷冻盒优选透明的微量离心管冷冻盒。
[0024]本专利技术的真菌菌种保存方法包括以下步骤：
[0025]1)在无菌环境中，将真菌菌种移植到无菌固体培养基上，在移植点周围放置数片无菌小滤纸片；
[0026]2)培养，直至真菌菌丝和/或真菌孢子长满小滤纸片；
[0027]3)在无菌环境中，将长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片取出放在无菌培养皿中；
[0028]4)将步骤3)中的培养皿放在底部盛有干燥硅胶的干燥器中室温干燥；
[0029]5)在无菌环境中，将干热灭菌并冷却后的无菌变色硅胶颗粒放入透明或半透明的无菌微量离心管或无菌指形管中，再将干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入微量离心管或指形管中，用封口膜将微量离心管或指形管封口；
[0030]6)将步骤5)中的微量离心管或指形管放入透明或半透明的微量离心管冷冻盒内，将冷冻盒放置于﹣20℃冰箱保存。
[0031]进一步地，步骤1)的固体培养基可以为马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即PDA(Potato Dext本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种真菌菌种保存方法，其特征在于：将干热灭菌的变色硅胶颗粒和干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入透明或半透明的无菌微量离心管或无菌指形管中，微量离心管或指形管使用封口膜封口，存放在透明或半透明的微量离心管冷冻盒中，放置于﹣20℃冰箱保存。2.根据权利要求1所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述变色硅胶颗粒的灭菌条件为160℃干热灭菌2小时。3.根据权利要求1所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片的干燥条件为，在底部盛有干燥硅胶的干燥器中室温干燥5天。4.根据权利要求1所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述微量离心管为尖底微量离心管或圆底微量离心管。5.根据权利要求1所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述封口膜为PARAFILM封口膜或透明保鲜膜。6.根据权利要求2所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片的干燥条件为，在底部盛有干燥硅胶的干燥器中室温干燥5天。7.根据权利要求6所述的真菌菌种保存方法，其特征在于：所述封口膜为PARAFILM封口膜或透明保鲜膜。8.根据权利要求1至7中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹良芬，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：