一种判断女性原发不孕的标记TRIP13基因及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体为用于检测女性原发不孕的TRIP13基因突变的试剂盒。本发明专利技术涉及的人类TRIP13基因，它的突变是导致因卵子不成熟致女性不孕的原因。通过检测TRIP13基因的突变可作为判断因卵子不成熟致女性不孕的标记基因。利用本发明专利技术提供的TRIP13基因突变可用于评价或制备因卵子不成熟致女性不孕的筛查试剂盒。利用本发明专利技术提供的TRIP13基因突变与否，可用于指导临床相应患者是否合适进行试管婴儿术。

【技术实现步骤摘要】
一种判断女性原发不孕的标记TRIP13基因及其检测试剂盒
本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种判断女性原发不孕的标记及其检测试剂盒。
技术介绍
正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有ZP-1，Stag3，FSHR等基因被发现与女性不孕症密切相关（HuangHLetal,MutantZP1infamilialinfertility.NEnglJMed.2014370(13):1220-6;deRouxNetal,Afamilywithhypogonadotropichypogonadismandmutationsinthegonadotropin-releasinghormonereceptor.NEnglJMed.1997337(22):1597-602;CaburetSetal,Mutantcohesioninprematureovarianfailure.NEnglJMed.2014370(10):943-9）。但是，均未在临床中应用。导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述（Rudaketal,fertilityandsterility,199054:292-296;HumanReproduction,199510:2343-2349;fertilityandsterility199971:567-570;HumanReproduction200116(10):2136-2138;HumanReproduction200217(6):1604-1609;HumanReproduction200217(10):2556-2559）。这些病人通过反复进行授精-胚胎移植术（试管婴儿），均因未能获取到成熟卵细胞，而无法完成成功的体外授精操作。如果能发现相关致病基因，则对疾病临床诊断及分型都具有重要意义。最近我们发现了导致人类卵子成熟障碍的致病基因TUBB8(NEnglJMed.2016Jan21;374(3):223-32)、PATL2（AmJHumGenet.2017Oct5;101(4):609-615）。但是，此两个基因仅能解释部分患者的原因，相当多患者的原因依然未知。经对现有技术文献的检索发现，仅发现少数几篇围绕TRIP13基因功能的研究文章。这些研究报道了此基因在小鼠卵子减数分裂过程中起着重要作用，敲除导致雌鼠不孕，以及TRIP13基因截短突变导致Wilms肿瘤的发生，但未发现其与女性不孕症相关的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作方便、效果明确的用于判断女性原发不孕的标记及其检测试剂盒。本专利技术中，用于检测女性原发不孕的TRIP13基因，其核酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还涉及筛查因卵子不成熟而致原发性不孕的方法，就是通过检测TRIP13基因是否发生突变来判断病人是否为卵子不成熟而导致的原发性不孕。患者携带TRIP13基因突变表现为不孕，表现为卵子始终无法成熟及试管婴儿失败。可见，TRIP13基因是否发生突变可作为判断因卵子不成熟致女性不孕的标记。检测TRIP13基因是否发生突变方法，具体可从患者的外周血中提取DNA后，用PCR（多聚酶链式反应）法结合DNA测序，来检测TRIP13基因是否发生了突变。其中，检测的样本是DNA，该DNA样本来自于待检人群的外周血。或者，检测的样本是RNA、蛋白、细胞或者血清样本，该样本来自于待检人群的外周血。本专利技术涉及检测TRIP13基因是否发生突变的引物。TRIP13基因有13个外显子，用于检测第1外显子的PCR扩增引物对为：5’-TTCCGGGTCAGGAGGTGG-3’（SEQIDNO.2）5’-GGGTTCGGTCGCATCAGAAT-3’（SEQIDNO.3）测序引物对同上；用于检测第2号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GGGAGCTGAGGCACAGCTTCTTCA-3’（SEQIDNO.4）5’-TCAGGGCTACTTCCTACTCCCAGC-3’（SEQIDNO.5）测序引物对同上；用于检测第3号外显子的PCR扩增引物对为：5’-TCATCTAATCTGAGAACTAGCTTTG-3’（SEQIDNO.6）5’-TGATATACTTTCCATTTCATAAGA-3’（SEQIDNO.7）测序引物对同上；用于检测第4，5号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GCAGAATTTATACTTTCCTGTAAT-3’（SEQIDNO.8）5’-ACTGCACTCCAGCCTGGTCGACAGC-3’（SEQIDNO.9）测序引物对同上；用于检测第6号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GTAGCACTGACTTAAAAATATATT-3’（SEQIDNO.10）5’-CATGTGCTGGCAATCAAGTAAGT-3’（SEQIDNO.11）测序引物对同上；用于检测第7号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GATACAGTCTAGAACTACTGATTG-3’（SEQIDNO.12）5’-GATTGTCCTGTCCCACCCAGTCAC-3’（SEQIDNO.13）测序引物对同上；用于检测第8,9号外显子的PCR扩增引物对为：5’-CCCATGCTGCCCTAGCTTCTCTGAT-3’（SEQIDNO.14）5’-AGGAGTCGATACTCAATGCCAAAT-3’（SEQIDNO.15）测序引物对同上；用于检测第10号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GGCCATCGTCCTGCCAACCTCCTTG-3’（SEQIDNO.16）5’-CCTCAAATAATGAACAATGATGAC-3’（SEQIDNO.17）测序引物对同上；用于检测第11号外显子的PCR扩增引物对为：5’-AGTGCAGCTGTGCATCTTGAGTCG-3’（SEQIDNO.18）5’-AGCAAGGGTTACATCTCCTTTGG-3’（SEQIDNO.19）测序引物对同上；用于检测第12号外显子的PCR扩增引物对为：5’-ACGCCTCGGCTTGTGTTCCCAG-3’（SEQIDNO.20）5’-CCTGTGTTTCGGTGCCAAGGTC-3’（SEQIDNO.21）测序引物对同上；用于检测第13号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GACGTGTGTGGTGCGCACTCACTG-3’（SEQIDNO.22）5’-TTATGAAAGAACACTTTACCGACC-3’（SEQIDNO.23）测序引物对同上。本专利技术还涉及检测TRIP13基因是否发生突变的方法，具体如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种判断女性原发不孕的标记，其特征在于为TRIP13基因，其核酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述女性原发不孕是指因卵子不成熟、受精及胚胎异常导致的女性不孕。/n

【技术特征摘要】
1.一种判断女性原发不孕的标记，其特征在于为TRIP13基因，其核酸序列如SEQIDNO.1所示，所述女性原发不孕是指因卵子不成熟、受精及胚胎异常导致的女性不孕。


2.一种筛查女性原发不孕的方法，其特征在于，通过检测TRIP13基因是否发生突变来判断病人是否为卵子不成熟、受精及胚胎异常而导致的原发性不孕，所述TRIP13基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.用于检测TRIP13基因是否发生突变的引物，其特征在于，对于TRIP13基因的13个外显子，检测用的PCR扩增引物对依次为：SEQIDNO.2、SEQIDNO.3，SEQIDNO.4、SEQIDNO.5，SEQIDNO.6、SEQIDNO.7，SEQIDNO.8、SEQIDNO.9，SEQIDNO.10、SEQIDNO.11，SEQIDNO.12、SEQIDNO.13，SEQIDNO.14、SEQIDNO.15，SEQIDNO.16、SEQIDNO.17，SEQIDNO.18、SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，桑庆，张治华，
申请(专利权)人：复旦大学，珠海复旦创新研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31