一种判断女性原发不孕的标记CDC20基因及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体为一种判断女性原发不孕的标记及其检测试剂盒。本发明专利技术涉及的标记为人类CDC20基因，它的突变是导致因卵子不成熟、受精及胚胎异常致女性不孕的原因。本发明专利技术还提供检测CDC20基因是否发生突变的的引物：SEQ ID NO.2‑SEQ ID NO.17；以及检测CDC20基因发生突变筛查试剂盒。本发明专利技术可用于指导临床相应患者是否合适进行试管婴儿术。

【技术实现步骤摘要】
一种判断女性原发不孕的标记CDC20基因及其检测试剂盒
本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种检测女性原发不孕的标记及其检测试剂盒。
技术介绍
正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有ZP-1，Stag3，FSHR等基因被发现与女性不孕症密切相关（HuangHLetal,MutantZP1infamilialinfertility.NEnglJMed.2014370(13):1220-6;deRouxNetal,Afamilywithhypogonadotropichypogonadismandmutationsinthegonadotropin-releasinghormonereceptor.NEnglJMed.1997337(22):1597-602;CaburetSetal,Mutantcohesioninprematureovarianfailure.NEnglJMed.2014370(10):943-9）。但是，均未在临床中应用。导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述（Rudaketal,fertilityandsterility,199054:292-296;HumanReproduction,199510:2343-2349;fertilityandsterility199971:567-570;HumanReproduction200116(10):2136-2138;HumanReproduction200217(6):1604-1609;HumanReproduction200217(10):2556-2559）。这些病人通过反复进行受精-胚胎移植术（试管婴儿），均因未能获取到成熟卵细胞，而无法完成成功的体外受精操作。如果能发现相关致病基因，则对疾病临床诊断及分型都具有重要意义。最近我们发现了导致人类卵子成熟障碍的第一个致病基因TUBB8(NEnglJMed.2016Jan21;374(3):223-32)。但是，此基因仅能解释部分患者的原因，相当多患者的原因依然未知。经对现有技术文献的检索发现，仅发现少数几篇围绕CDC20基因功能的研究文章。这些研究报道了此基因在小鼠卵子减数分裂过程中起着重要作用，敲除导致雌鼠不孕。但是，至今未见关于CDC20基因突变与人类疾病之间关系的任何报道。也未发现其与女性不孕症相关的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作方便、效果明确的用于判断女性原发不孕的标记及其检测试剂盒。本专利技术中，用于检测女性原发不孕的CDC20基因，其核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述女性原发不孕是指因卵子不成熟、受精及胚胎异常导致的女性不孕。本专利技术还涉及筛查因卵子不成熟、受精及胚胎异常致原发性不孕的方法，就是通过检测CDC20基因是否发生突变来判断病人是否为卵子不成熟、受精及胚胎异常而导致的原发性不孕。患者携带CDC20基因突变表现为不孕，表现为卵子始终无法成熟、受精及胚胎异常、试管婴儿失败。可见，CDC20基因是否发生突变可作为判断因卵子不成熟、受精及胚胎异常致女性不孕的标记。检测CDC20基因是否发生突变方法，具体可从患者的外周血中提取DNA后，用PCR（多聚酶链式反应）法结合DNA测序，来检测CDC20基因是否发生了突变。其中，检测的样本是DNA，该DNA样本来自于待检人群的外周血。或者，检测的样本是RNA、蛋白、细胞或者血清样本，该样本来自于待检人群的外周血。本专利技术涉及检测CDC20基因是否发生突变的引物。CDC20基因有10个外显子，用于检测第1外显子的PCR扩增引物对为：5’-CAGGCGTGTTAAAGCCGGT-3’（SEQIDNO.2）5’-ATGAAGGCTGCTCTCACTCAG-3’（SEQIDNO.3）测序引物对同上；用于检测第2、3号外显子的PCR扩增引物对为：5’-TCAGTGAGGTGCCAAAGGAA-3’（SEQIDNO.4）5’-AAATCAACACCTCCCTTGCCC-3’（SEQIDNO.5）测序引物对同上；用于检测第4号外显子的PCR扩增引物对为：5’-AAGACCCGAAGTTCCTGGTTC-3’（SEQIDNO.6）5’-GCTTGCACTCCACAGGTACA-3’（SEQIDNO.7）测序引物对同上；用于检测第5号外显子的PCR扩增引物对为：5’-CGGAAGACCTGCCGTTACAT-3’（SEQIDNO.8）5’-GGACTGGTGAGAATGACAGCA-3’（SEQIDNO.9）测序引物对同上；用于检测第6、7号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GAGACGTGTCCAGTGCTGTC-3’（SEQIDNO.10）5’-AGCCCAACCCTACTCACCTT-3’（SEQIDNO.11）测序引物对同上；用于检测第8号外显子的PCR扩增引物对为：5’-CAAGGTGAGTAGGGTTGGGC-3’（SEQIDNO.12）5’-GGGACAGATCAAGGTGGTGG-3’（SEQIDNO.13）测序引物对同上；用于检测第9号外显子的PCR扩增引物对为：5’-GAGTCTGGAGCATGTGGCA-3’（SEQIDNO.14）5’-GCACTGGGCCACCCAC-3’（SEQIDNO.15）测序引物对同上；用于检测第10号外显子的PCR扩增引物对为：5’-TGGCTGCATCAGCATTCGTA-3’（SEQIDNO.16）5’-GAAGGCTGCTGGGACATAGG-3’（SEQIDNO.17）测序引物对同上。本专利技术还涉及检测CDC20基因是否发生突变的方法，具体如下：对其中1号外显子，利用引物对：SEQIDNO.2、SEQIDNO.3，进行PCR扩增（扩增条件：92℃2分钟，92℃30秒，57℃1分钟，72℃3秒（此三步重复35个循环），72℃10分钟），然后利用相同的引物进行测序，将测序结果与UCSC中CDC20的标准序列（SEQIDNO.1）进行比对，从而发现突变；与上述条件相似，CDC20的第2-10号外显子，由相应的引物进行扩增（SEQIDNO.4-NO.17）；进行测序，再与UCSC中CDC20的标准序列（SEQIDNO.1）进行比对，从而发现突变；通过PCR及一代测序，及与标准序列的比对，来检测CDC20基因是否发生突变。本专利技术还提供检测CDC20基因是否发生突变的试剂盒。此试剂盒可以指导医生对疾病病因的判断、对疾病进行正确分类，从而告知患者采用IVF法还是ICSI法进行试管婴儿操作，以及是否适合继续施行体外受精-胚胎移植术（IVF）或单精子注射术（ICSI）（试管婴儿）本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种判断女性原发不孕的标记，其特征在于为CDC20基因，其核酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述女性原发不孕是指因卵子不成熟、受精及胚胎异常导致的女性不孕。/n

【技术特征摘要】
1.一种判断女性原发不孕的标记，其特征在于为CDC20基因，其核酸序列如SEQIDNO.1所示，所述女性原发不孕是指因卵子不成熟、受精及胚胎异常导致的女性不孕。


2.一种筛查女性原发不孕的方法，其特征在于，通过检测CDC20基因是否发生突变来判断病人是否为卵子不成熟、受精及胚胎异常而导致的原发性不孕，所述CDC20基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.用于检测CDC20基因是否发生突变的引物，其特征在于，对于CDC20基因的10个外显子，检测用的PCR扩增引物对依次为：SEQIDNO.2、SEQIDNO.3，SEQIDNO.4、SEQIDNO.5，SEQIDNO.6、SEQIDNO.7，SEQIDNO.8、SEQIDNO.9，SEQIDNO.10、SEQIDNO.11，SEQIDNO.12、SEQIDNO.13，SEQIDNO.14、SEQIDNO.15，SEQIDNO.16、SEQIDNO.17；所述CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，桑庆，赵琳，
申请(专利权)人：复旦大学，珠海复旦创新研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31