一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒制造技术

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒及检测方法，所述引物探针组分为两组，A组为检测ApoE 388T>C和526C>T的引物对、野生型探针和突变型探针；B组为检测SLCO1B1 388A>G和521T>C的引物对、野生型探针和突变型探针；所述试剂盒包括含有扩增反应试剂A的检测管、含有扩增反应试剂B的检测管、缓冲液、醋酸镁、阳性对照、阴性对照。

【技术实现步骤摘要】
一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒
本申请属于生物检测
，具体为一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的试剂盒。
技术介绍
血脂异常是多种心脑血管疾病的危险因素，降低胆固醇是预防心脑血管不良事情的基石。他汀类药物具有良好的降脂作用，但往往患者的服用效果并不相同，而ApoE和SLCO1B1基因是影响他汀降脂疗效主要的遗传因素。载脂蛋白E(apolipoproteinE，APOE)是血浆中重要的载脂蛋白之一。ApoE主要在肝脏合成、分泌和代谢，参与脂质的运输、储存及排泄，有修复组织、抑制血小板聚集、免疫调节等作用。流行病学资料表明载脂蛋白E的基因多态性对血脂浓度有明显的影响。该基因有两个功能性SNP位点：rs429358(c.388T>C)和rs7412(c.526C>T)，可以形成ε2、ε3、ε4三个等位基因，共构成ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε4/3、ε4/4六种基因型。近年来研究发现，ApoE基因多态性与冠心病、老年痴呆、高胆固醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组分为两组，A组为检测ApoE 388T>C和526C>T的引物对、野生型探针和突变型探针；B组为检测SLCO1B1388A>G和521T>C的引物对、野生型探针和突变型探针，其中，A组的ApoE 388T>C引物和探针序列为：/n上游引物：5’-AGACGCGGGCACGGCTGTCCAAGGAGCTGCA-3’；/n下游引物：5’-TCGGTGCTCTGGCCGAGCATGGCCTGCACCT-3’；/n野生型探针：/n5’-AGGCCCGGCTGGGC...

【技术特征摘要】
1.一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组分为两组，A组为检测ApoE388T>C和526C>T的引物对、野生型探针和突变型探针；B组为检测SLCO1B1388A>G和521T>C的引物对、野生型探针和突变型探针，其中，A组的ApoE388T>C引物和探针序列为：
上游引物：5’-AGACGCGGGCACGGCTGTCCAAGGAGCTGCA-3’；
下游引物：5’-TCGGTGCTCTGGCCGAGCATGGCCTGCACCT-3’；
野生型探针：
5’-AGGCCCGGCTGGGCGCGGACATGGAGGACG(FAM-dT)GTGCGGCCGCC(THF)GG(BHQ-dT)GCA(C3spacer)-3’；
突变型探针：
5’-AGGCCCGGCTGGGCGCGGACATGGAGGACG(ROX-dT)GCGCGGCCGCC(THF)GG(BHQ-dT)GCA(C3spacer)-3’；
A组的ApoE526C>T引物和探针序列为：
上游引物：5’-AGGCCATGCTCGGCCAGAGCACCGAGGAGCT-3’；
下游向引物：5’-TTGGCGCGCACCTCCGCCACCTGCTCCTTCA-3’；
野生型探针：
5’-TCCTCCGCGATGCCGATGACC(HEX-dT)GCAGAAGCGCC(THF)GGCAG(BHQ-dT)GTACCAG(C3spacer)-3’；
突变型探针：
5’-TCCTCCGCGATGCCGATGACC(CY5-dT)GCAGAAGTGCC(THF)GGCAG(BHQ-dT)GTACCAG(C3spacer)-3’。
B组的SLCO1B1388A>G引物和探针序列为：
上游引物：5’-TGCTGGGAAATTGACAGAAAGTACTCTGGTAA-3’；
下游引物：5’-AACCTGTGTTGTTAATGGGCGAACTGTGTATA-3’；
野生型探针：
5’-AGTTACAGGTATTCTAAAGAAACTAATA(FAM-dT)CAA(THF)(BHQ-dT)CATCAGAAAATTCA(C3spacer)-3’；
突变型探针：
5’-AGTTACAGGTATTCTAAAGAAACTAATA(ROX-dT)CGA(THF)(BHQ-dT)CATCAGAAAATTCA(C3spacer)-3’；
B组的SLCO1B1521T>C引物和探针序列为：
上游引物：5’-CAGCCATGAGGAACTATGAGTCCATTAGACC-3’；
下游引物：5’-ATGGTACTATGGGAGTCTCCCCTATTCCAC-3’；
野生型探针：
5’-AGGAATCTGGGTCATACATGTGGATATA(HEX-dT)GTG(THF)(BHQ-dT)CATGGGTAATATGCT(C3spacer)-3’；
突变型探针：
5’-AGGAATCTGGGTCATACATGTGGATATA(CY5-dT)GCG(THF)(BHQ-dT)CATGGGTAATATGCT(C3spacer)-3’。


2.如权利要求1所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述探针上修饰有荧光基团和猝灭基团，所述猝灭基团修饰在THF3’端的T碱基上，荧光基团修饰在SNP位点的5’端T碱基上或SNP位点互补碱基的5’端T碱基上。


3.如权利要求2所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测ApoE和SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团用FAM、HEX、ROX或CY5修饰，所述淬灭基团用BHQ修饰。
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈大为，陈龙，张瑶，
申请(专利权)人：济南国益生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37