一种鸡原代软骨细胞分离培养及鉴定的方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡原代软骨细胞分离培养及鉴定的方法，其中，所述分离培养方法包括以下步骤：将鸡胚分离出软骨，将软骨组织剪碎后进行离心处理，弃上清液；在软骨组织碎片中加入胰蛋白酶进行消化处理，然后加入纯胎牛血清终止消化，离心后弃上清，再加入Ⅱ型胶原酶，水浴消化至组织块呈悬浊状；将上述悬浊液用细胞筛网过滤，将过滤后的滤液离心处理后弃去上清液，加入完全培养液，巴氏吸管轻轻吹打使细胞均匀重悬利用，得到软骨细胞；将分离的软骨细胞接种于细胞培养皿中，在37℃、5％CO

【技术实现步骤摘要】
一种鸡原代软骨细胞分离培养及鉴定的方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种鸡原代软骨细胞分离培养及鉴定的方法。
技术介绍
软骨是由软骨细胞和细胞外基质组成的无血管组织，软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞类型，其主要功能是通过分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖等保持关节软骨的功能，在正常生理条件下，软骨细胞的合成和分解代谢维持着动态平衡。而软骨细胞主要依靠关节的运动和挤压吸收营养物质，无血液供应，细胞代谢缓慢，所以软骨损伤后自我修复能力比较弱。因此，本专利技术研发出一种软骨细胞的培养方法，能够促进软骨细胞的增殖，提高软骨细胞的数量，用于解决现有技术中增殖速度较慢并伴随细胞退化的技术缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鸡原代软骨细胞分离培养及鉴定的方法，其首次建立了一种简单、可操作性强、重复性好的鸡软骨细胞分离培养及鉴定的方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，包括以下步骤：(1)将鸡胚用75％酒精消毒后，用镊子敲碎气室端蛋壳，挑出整个鸡胚置于装有37℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将鸡胚用75％酒精消毒后，用镊子敲碎气室端蛋壳，挑出整个鸡胚置于装有37℃的不含钙镁的PBS溶液的无菌培养皿中冲洗干净，然后分离腿部转移至干净的培养皿中，用镊子和手术剪剪去除软骨外的肌肉和骨膜，分离出软骨，将软骨组织剪碎后进行离心处理，弃上清液；/n(2)在剪碎的软骨组织碎片中加入胰蛋白酶，在37℃水浴中进行消化处理，期间每隔10min轻摇离心管几次，然后加入纯胎牛血清终止消化，离心后弃上清，再加入Ⅱ型胶原酶，水浴消化至组织块呈悬浊状，期间每隔10min轻颠离心管几次；/n(3)将上述悬浊液用细胞筛网过滤，将过滤后的滤液...

【技术特征摘要】
1.一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将鸡胚用75％酒精消毒后，用镊子敲碎气室端蛋壳，挑出整个鸡胚置于装有37℃的不含钙镁的PBS溶液的无菌培养皿中冲洗干净，然后分离腿部转移至干净的培养皿中，用镊子和手术剪剪去除软骨外的肌肉和骨膜，分离出软骨，将软骨组织剪碎后进行离心处理，弃上清液；
(2)在剪碎的软骨组织碎片中加入胰蛋白酶，在37℃水浴中进行消化处理，期间每隔10min轻摇离心管几次，然后加入纯胎牛血清终止消化，离心后弃上清，再加入Ⅱ型胶原酶，水浴消化至组织块呈悬浊状，期间每隔10min轻颠离心管几次；
(3)将上述悬浊液用细胞筛网过滤，将过滤后的滤液离心处理后弃去上清液，加入完全培养液，巴氏吸管轻轻吹打使细胞均匀重悬利用，得到软骨细胞；
(4)将分离的软骨细胞接种于细胞培养皿中，在37℃、5％CO2的培养箱中培养。


2.根据权利要求1所述的一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的鸡胚的胚龄为15天，离心转速为1000r/min，离心时间为5min。


3.根据权利要求1所述的一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的胰蛋白酶的质量浓度为0.25％，Ⅱ型胶原酶的质量浓度为0.2％，消化时间均为30-40min。


4.根据权利要求1所述的一种鸡原代软骨细胞分离培养的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的细胞筛网的目数为200目，离心转速为800-1000r/min，离心时间为4-6min。

【专利技术属性】
技术研发人员：金四华，何培莉，邱桂如，耿照玉，夏晶晶，朱一笑，税斐，贾羽晴，江洪峰，郑书丽，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34