【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用嵌合抗原受体基因组编辑和转导T细胞以用于治疗T和B细胞恶性肿瘤的方法本申请要求于2018年5月31日提交的美国临时申请号62/678,886的权益，所述申请的公开内容据此以引用方式整体并入。本文公开了基因组编辑和转导T细胞的方法以及使用所述T细胞的免疫治疗方法。具体地，本公开涉及工程改造的携带嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR-T)以及使用所述T细胞治疗T和B细胞恶性肿瘤的方法。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法日渐为人们所熟知。对T细胞进行基因修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体是由抗原识别部分和T细胞激活结构域组成的融合蛋白。CAR被设计成识别在癌细胞上过表达的抗原。CAR-T表现出针对B细胞恶性肿瘤的卓越临床功效，并且FDA近期批准了两种疗法：KymriahTM(tisagenlecleucel,Novartis)和YescartaTM(axicabtageneciloleucel,Kite/Gilead)。这些疗法中的每一种都涉及将CAR转导到每个患者自己的T细胞中，并且将靶向疾病的自体CAR-T细...
【技术保护点】
1.一种制备基因组编辑的免疫效应细胞群的方法，其包括以下步骤：/na.编辑携带T细胞受体(TCR)的免疫效应细胞群的基因组；/nb.激活所述免疫效应细胞群；以及/nc.扩增所述基因组编辑的免疫效应细胞群。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180531 US 62/6788861.一种制备基因组编辑的免疫效应细胞群的方法，其包括以下步骤：
a.编辑携带T细胞受体(TCR)的免疫效应细胞群的基因组；
b.激活所述免疫效应细胞群；以及
c.扩增所述基因组编辑的免疫效应细胞群。
2.如权利要求1所述的方法，其中用识别一种或多种蛋白质的至少一种嵌合抗原受体(CAR)转导所述携带T细胞受体(TCR)的免疫效应细胞。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述基因组编辑步骤(a)包括用所述一种或多种CAR转导所述免疫效应细胞群。
4.如权利要求2所述的方法，其中包括待在步骤(b)与(c)之间执行的用所述一种或多种CAR转导所述免疫效应细胞群的附加步骤。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述方法是一种制备基因组编辑的携带嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞群的方法，其包括以下步骤：
a.编辑携带T细胞受体(TCR)的免疫效应细胞群的基因组；
b.激活所述免疫效应细胞群；
c.用识别一种或多种蛋白质的至少一种嵌合抗原受体(CAR)转导所述免疫效应细胞群；以及
d.扩增所述基因组编辑的携带嵌合抗原受体的免疫效应细胞群。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述免疫效应细胞是纯化的。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述免疫效应细胞是T细胞。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)识别的所述一种或多种蛋白质选自抗原和细胞表面蛋白。
9.如权利要求8所述的方法，其中基因组是使用CRISPR相关蛋白(Cas-CRISPR)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)或锌指核酸酶(ZFN)编辑的。
10.如权利要求9所述的方法，其中基因组是使用Cas-CRISPR编辑的。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述基因组是使用Cas9-CRISPR编辑的。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述Cas9作为mRNA或蛋白质递送到所述细胞中。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述Cas9作为mRNA递送到所述细胞中。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述Cas9作为蛋白质递送到所述细胞中。
15.如权利要求12所述的方法，其中靶向待编辑的所述基因的指导RNA(gRNA)与所述Cas9同时递送。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述递送是通过电穿孔进行的。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述基因组编辑包括使一种或多种抗原、细胞表面蛋白或可分泌蛋白的表达缺失或受抑制。
18.如权利要求17所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白是主要组织相容性复合物I(MHCI)或其亚基。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述亚基是β2微球蛋白(B2M)。
20.如权利要求17所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白是T细胞受体(TCR)或其亚基。
21.如权利要求20所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白选自TRAC(TCR-α)、TCR-β、CD3ε、CD3ζ、CD3δ和CD3γ。
22.如权利要求21所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白是TRAC。
23.如权利要求17所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白是防止T细胞耗竭的蛋白质。
24.如权利要求23所述的方法，其中防止T细胞耗竭的细胞表面蛋白是T细胞上的免疫检查点。
25.如权利要求24所述的方法，其中防止T细胞耗竭的所述表面蛋白选自PD-1、LAG-3、Tim-3和CTLA-4。
26.如权利要求16所述的方法，其中所述基因组编辑包括使一种或多种可分泌蛋白的表达缺失或受抑制。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述可分泌蛋白是细胞因子。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述细胞因子选自MCP1(CCL2)、MCP-2、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、Il-4和IFNγ。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述细胞因子是GM-CSF。
30.如权利要求26所述的方法，其中所述可分泌蛋白是转录因子。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述转录因子选自AHR、BCL6、FOXP3、GATA3、MAF、RORC、SPI1、TBX21。
32.如权利要求17所述的方法，其中缺失/抑制的细胞表面蛋白或抗原是所述CAR的靶标。
33.如权利要求1所述的方法，其中在编辑之后使所述细胞静息持续最多至48小时，之后进行激活。
34.如权利要求1所述的方法，其中在编辑之后使所述细胞静息持续最多至24小时，之后进行激活。
35.如权利要求1所述的方法，其中在编辑之后使所述细胞静息持续最多至8小时，之后进行激活。
36.如权利要求1所述的方法，其中在编辑之后使所述细胞静息持续最多至4小时，之后进行激活。
37.如权利要求1所述的方法，其中在编辑之后使所述细胞静息持续介于24小时与48小时之间的时间，之后进行激活。
38.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞在基因组编辑之后立即激活。
39.如权利要求37所述的方法，其中所述免疫效应细胞的所述激活是通过将所述细胞群暴露于抗CD3抗体和抗CD28抗体，或上述抗体中的任一者的功能片段进行的。
40.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫效应细胞的所述激活是通过将所述细胞群暴露于抗CD3抗体、抗CD28抗体和抗CD2抗体，或上述抗体中的任一者的功能片段进行的。
41.如权利要求39所述的方法，其中所述抗体附连于珠粒。
42.如权利要求39所述的方法，其中对所述基因组编辑的细胞进行激活持续最多至五天。
43.如权利要求39所述的方法，其中对所述基因组编辑的细胞进行激活持续最多至两天。
44.如权利要求39所...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·库珀，J·F·迪珀西奥，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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