牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，包括分别由SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.5、SEQ.ID.NO.8和SEQ.ID.NO.13以及SEQ.ID.NO.15和SEQ.ID.NO.18所示核苷酸序列组成的牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒以及牛轮状病毒的RPA检测引物组。所述试剂盒基于重组酶聚合酶扩增法，以利用RNA反转录形成的cDNA为模板进行扩增反应，利用核酸凝胶电泳获得检测结果。本发明专利技术可用于同时对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒进行检测，操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为牛腹泻病毒的现场筛查提供了快速检测试剂。

【技术实现步骤摘要】
牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒
本专利技术涉及病毒核酸检测领域，具体涉及一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测引物组、试剂盒及检测方法。
技术介绍
腹泻是牛常见的一类疾病。引起牛腹泻发生的原因有很多种，其中病毒感染是主要原因。随着养牛规模的扩大，犊牛腹泻的发病率呈上升趋势，危害最为严重。就目前情况来看，引起牛腹泻的病毒主要包括牛病毒性腹泻病毒(Bovineviraldiarrheavirus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovinecoronavirus,BCoV)和牛轮状病毒(Bovinerotavirus,BRV)。BVDV属于黄病毒科、瘟病毒属，其基因组为单股正链RNA，BVDV的天然宿主包括猪和牛、羊等多种反刍动物，可引起发热、黏膜糜烂、腹泻，也可以引起母牛繁殖障碍。牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是由BVDV引起的牛接触性传染病。BCoV属于套式病毒目、冠状病毒科、β病毒属、β冠状病毒属A进化群，其基因组为单股正链RNA，编码5种结构蛋白。BCoV能引起的疾病包括犊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测引物组，其特征在于：该RPA检测引物组包括牛病毒性腹泻病毒反转录本扩增引物对P1、牛冠状病毒反转录本扩增引物对P2以及牛轮状病毒反转录本扩增引物对P3；/n所述引物对P1的核苷酸序列为：/n上游引物Fv1：5'-GGTGAGTTCGTTGGATGGCTGAAGCCCTGAGTACA-3'/n下游引物Rv2：5'-GATTTTTAGTAGCAATACAGTGGGCCTCTGCAGCA-3'；/n所述引物对P2的核苷酸序列为：/n上游引物Fc1：5'-CAGCGTGTTGATGAGAACGGTGATAAATTAG-3'/n下游引物Rc...

【技术特征摘要】
1.一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测引物组，其特征在于：该RPA检测引物组包括牛病毒性腹泻病毒反转录本扩增引物对P1、牛冠状病毒反转录本扩增引物对P2以及牛轮状病毒反转录本扩增引物对P3；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物Fv1：5'-GGTGAGTTCGTTGGATGGCTGAAGCCCTGAGTACA-3'
下游引物Rv2：5'-GATTTTTAGTAGCAATACAGTGGGCCTCTGCAGCA-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物Fc1：5'-CAGCGTGTTGATGAGAACGGTGATAAATTAG-3'
下游引物Rc2：5'-GCCTACTAAGCCTACCTCCACCAATTTGTCTGC-3'；
所述引物对P3的核苷酸序列为：
上游引物Fr2：5'-CCAAACATTTTCCCTTACTCAGCGTCATTCAC-3'
下游引物Rr3：5'-CCAGCGACCTGAATTTCTGATCCCGCATTGAGCC-3'。


2.一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括RPA检测引物组，所述RPA检测引物组包括牛病毒性腹泻病毒反转录本扩增引物对P1、牛冠状病毒反转录本扩增引物对P2以及牛轮状病毒反转录本扩增引物对P3；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物Fv1：5'-GGTGAGTTCGTTGGATGGCTGAAGCCCTGAGTACA-3'
下游引物Rv2：5'-GATTTTTAGTAGCAATACAGTGGGCCTCTGCAGCA-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物Fc1：5'-CAGCGTGTTGATGAGAACGGTGATAAATTAG-3'
下游引物Rc2：5'-GCCTACTAAGCCTACCTCCACCAATTTGTCTGC-3'；
所述引物对P3的核苷酸序列为：
上游引物Fr2：5'-CCAAACATTTTCCCTTACTCAGCGTCATTCAC-3'
下游引物Rr3：5'-CCAGCGACCTGAATTTCTGATCCCGCATTGAGCC-3'。


3.根据权利要求2所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，各引物的工作浓度均为5～20μM。


4.根据权利要求3所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，根据引物对扩增片段的大小差异，扩增片段最小的引物对P3在建立的RPA扩增反应体系中的含量大于扩增片段较大的引物对P1和P2在该反应体系中的含量；扩增片段较小的引物对P1在所建立的RPA扩增反应体系中的含量大于扩增片段最大的引物对P2并且小于扩增片段最小的引物对P3在该反应体系中的含量。


5.根据权利要求3所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，Fv1:Rv2:Fc1:Rc...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓民，童德文，王凯丽，刘志豪，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61