一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法技术

本发明专利技术提供一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法，以家蚕作为载体，利用粒子枪将家蚕转基因质粒注射到家蚕卵的前胚层胚胎中，在25℃的温度下孵育成转基因家蚕，并获得蚕茧。将蚕茧放置于胰蛋白酶中，混合、震荡、离心，去除丝胶后，用硫氰酸胍和β‑巯基乙醇溶解形成混合溶液；利用透析袋对混合溶液透析，将透析后混合溶液中倒入(NH4)2SO4水溶液，离心，得可溶性蛋白，再经过AKTA层析系统和Superdex200分析柱纯化，得目标物。该工艺简单，蛋白表达水平高，生长速度快，蛋白折叠有效，广泛的翻译后修饰，糖基化与哺乳动物细胞类似，无内毒素；产量高、收率高、纯度高，能达到完全脱色目的，获得单一的、纯的重组人源Ⅲ型胶原蛋白，适用于工业化大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法。
技术介绍
胶原蛋白是人体中最主要的结构性蛋白，占人体蛋白质总量的30％以上、占细胞外基质的70％-80％，在人体中发挥着支撑、信号调控、维系细胞生存的微环境等多种功能。人体目前已发现28种不同型别的胶原蛋白，分别分布于皮肤、粘膜、血管、骨骼、肌腱、内脏器官等人体的各个部位，发挥着各自不同的生理功能。人体皮肤及粘膜中，胶原蛋白占干重的70％至80％，I型和III型胶原蛋白是关系人体皮肤损伤后修复和修复质量的关键因素，在人体中分布广泛。I型胶原蛋白主要存在与成人的皮肤、肌腱及骨组织上，III型胶原蛋白主要存在与婴儿的皮肤或血管内膜、肠道上及成人软骨、玻璃体、椎间盘等上。其中，III型胶原蛋白的合成能力很强，能够在创伤修复中将来源于骨髓的干细胞分化成帮助修复的纤维细胞。但III型人源胶原蛋白会随着年龄的增长而逐渐流失，在婴幼儿时期，存在于皮肤或血管内膜、肠道的III型人源胶原蛋白大概比I型人源胶原蛋白高出80％，当婴幼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤S1：载体的筛选/n以家蚕作为载体；/n步骤S2：转基因载体的制备/n在家蚕卵被产出后的2～8小时内，利用粒子枪取20nL的家蚕转基因质粒溶液，注射到家蚕卵的前胚层胚胎中，注射后的家蚕卵即为转基因载体；/n步骤S3：转基因载体的培育/n转基因载体在25℃的温度条件下孵育成转基因家蚕，并获得转基因蚕茧；/n步骤S4：转基因蚕茧丝胶的去除/n取50mg的转基因蚕茧，放置于5mL 1mg/mL的胰蛋白酶中，混合、以100rpm的转速进行震荡、以10000rpm的转速进行离心，去除转基因蚕茧中的丝胶；/n步骤S5：重组...

【技术特征摘要】
1.一种转基因家蚕生产重组人源Ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：载体的筛选
以家蚕作为载体；
步骤S2：转基因载体的制备
在家蚕卵被产出后的2～8小时内，利用粒子枪取20nL的家蚕转基因质粒溶液，注射到家蚕卵的前胚层胚胎中，注射后的家蚕卵即为转基因载体；
步骤S3：转基因载体的培育
转基因载体在25℃的温度条件下孵育成转基因家蚕，并获得转基因蚕茧；
步骤S4：转基因蚕茧丝胶的去除
取50mg的转基因蚕茧，放置于5mL1mg/mL的胰蛋白酶中，混合、以100rpm的转速进行震荡、以10000rpm的转速进行离心，去除转基因蚕茧中的丝胶；
步骤S5：重组人源Ⅲ型胶原蛋白的提取
步骤S51：混合溶液的制备
将去除丝胶后的转基因蚕茧，用...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东跃，
申请(专利权)人：吉林省国大生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22