质粒载体及其在靶向猪COL1A1位点定点整合外源基因中的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及质粒载体及其在靶向猪COL1A1基因下游序列(以下简称为：COL1A1位点)定点整合外源基因中的应用。本发明专利技术提供的质粒载体包括：COL1A1位点同源左臂，外源基因和COL1A1位点同源右臂，该载体是依托CRISPR/Cas9打靶系统所设计，它能够将外源基因精确的引入到猪的COL1A1位点中，以解决传统转基因技术效率低下，外源基因随机整合，不同个体表达量差异大，整合位置检测难度大的问题。

【技术实现步骤摘要】
质粒载体及其在靶向猪COL1A1位点定点整合外源基因中的应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及质粒载体及其在靶向猪COL1A1位点定点整合外源基因中的应用。
技术介绍
转基因猪在农业与医学研究中发挥着重要的作用。一方面猪作为一种重要的畜牧用物种，另一方面，猪与人相对于人与小鼠等其他动物更为接近，医学研究上也发挥着不小的作用，比如猪与人的器官大小接近，这一点使异种移植成为了可能，再者猪与人的各器官的结构与血液生理生化指标相似，转基因猪成为更好的动物模型。转基因猪在很多领域已经得到应用，然而却依然受到一定的限制，转基因的效率与整合位点的不确定性是主要原因。CRISPR/Cas系统，广泛存在于真细菌和古生菌中,是一个用来保护宿主不受病毒二次侵害的获得性免疫系统。该系统由CRISPR体系转录出的RNA和Cas体系翻译出的蛋白相结合来发挥切割DNA的作用。目前在基因组编辑领域应用最为广泛的CRISPR/Cas系统是II型的SpCas9系统，它使用crRNAs与tracrRNAs嵌合形成的引导RNA与核酸酶Cas9组成复合体来识别、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.质粒载体，其包括：COL1A1位点同源左臂，外源基因和COL1A1位点同源右臂；/n所述同源左臂的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；/n所述同源右臂的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.质粒载体，其包括：COL1A1位点同源左臂，外源基因和COL1A1位点同源右臂；
所述同源左臂的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；
所述同源右臂的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。


2.根据权利要求1所述的质粒载体，其特征在于，包括顺序连接的：COL1A1位点同源左臂，猪ICAM2启动子，外源基因、polyA-1和COL1A1位点同源右臂。


3.根据权利要求1或2所述的质粒载体，其特征在于，包括顺序连接的：COL1A1位点同源左臂，猪ICAM2启动子，外源基因、polyA-1、COL1A1位点同源右臂、PGK启动子、HSV-TK和polyA-2。


4.根据权利要求1或2所述的质粒载体，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


5.根据权利要求4所述的质粒载体，其特征在于，所述外源基因为TM基因，其构建方式利用O...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘登科，杜嘉祥，王永，
申请(专利权)人：成都中科奥格生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51