一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法，包括以下步骤：选用40只产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡，设处理，分别为对照组和4个攻毒处理组；攻毒处理组为球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组，分别于试验开始后每天早上9：00先灌服球虫疫苗，半小时以后再灌服产气荚膜梭菌菌液；最后一次灌服后48h进行采样；试验期为7天，饲粮为玉米‑豆粕型基础饲粮，饲养管理按常规饲养管理进行。本发明专利技术能够探究营养和饲料因素以及应激等因素引起蛋鸡生产性能下降的具体机制。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法
本专利技术属于动物营养学和毒理学
，具体地说，涉及一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法。
技术介绍
动物的小肠是营养物质消化吸收的重要部位，同时也是机体最大的免疫器官。大量研究表明，鸡的肠道疾病问题，会影响营养物质的消化和吸收，造成生产性能和饲料转化效率的下降，严重会导致鸡的死亡，严重制约家禽产业发展。鸡肠炎是现代化家禽集约化养殖生产中最为突出的肠道疾病之一，给家禽产业带来了巨大的经济损失。已有的数据表明，生产上由于肠炎问题给家禽产业造成的经济损失从2000年的20亿美元上升到2015年的60亿美元。另外，尽管药物性饲料添加剂(主要为抗生素)对肠炎有较为显著的治疗效果，但由于抗生素耐药性和其本身的安全性等问题，随着饲用抗生素在我国的全面禁止(2020年7月)，动物肠道健康问题，更为突出，亟待寻求更安全，更有效的方式防止肠炎的发生。生产上造成肠炎的因素有许多，其中以产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)和球虫造成的肠炎较为常见。此外，霉菌毒素，饲粮动物蛋白浓度过高，环境冷热及高密度应激等因素也易诱导肠炎的发生。分析已有的文献表明，大部分肠炎模型均为肉鸡上的研究，尚未见蛋鸡小肠肠炎模型建立的标准方法，构建难度大，且其导致蛋鸡繁殖性能的影响尚不清楚。因此，鉴于上述原因，为了进一步探究由于应激因素导致的肠炎以及消化道功能损伤从而降低产蛋性能的具体机制，有必要建立一种蛋鸡小肠肠炎模型。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对缺乏蛋鸡小肠肠炎模型的问题，提供了一种蛋鸡小肠肠炎模型构建的方法，能够探究营养和饲料因素以及应激等因素引起蛋鸡生产性能下降的具体机制。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1、选用50只产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设处理，每个处理10个重复，每个重复1只鸡，分别为对照组和4个攻毒处理组；步骤2、4个攻毒处理组为：球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组，将球虫疫苗溶解于生理盐水中，配成球虫疫苗溶液，将A型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐水中，配成A型产气荚膜梭菌菌液，分别于试验开始后每天早上9：00先灌服球虫疫苗溶液，半小时以后再灌服A型产气荚膜梭菌菌液；最后一次灌服后48h进行采样；步骤3、试验期为7天，饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮，根据NRC(1994)和中国鸡饲养标准配制，饲喂方式为定量饲喂；饲养管理按常规饲养管理进行，每周进行严格消毒，室温保持在20～22℃，注意通风换气；试验开始预饲2周，前通过观察记录蛋鸡产蛋率，保持初始产蛋率无统计学差异以后，开始正式试验；步骤4、将各个处理组的饲料按照每天110g～120g、或者按其对应周自由采食量的90％，分两次：上午5点30和下午3点30，饲养过程中蛋鸡自由饮水。可选地，所述产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡为28周龄罗曼粉蛋鸡；对照组灌胃10mL生理盐水。可选地，球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组为：球虫疫苗+1mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+2mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+3mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+4mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗的具体的制备方法如下：将10克球虫疫苗溶解于10mL生理盐水中；不同梯度的A型产气荚膜梭菌菌液的具体的制备方法如下：分别将称量好的1mL、2mL、3mL和4mLA型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐水中，最终配成10mLA型产气荚膜梭菌菌液。可选地，所述的攻毒处理组为球虫疫苗+3mLA型产气荚膜梭菌处理组。可选地，所述的球虫疫苗为200倍弱毒性球虫四价疫苗，含有球虫孢子数为220000个，包括质量比为5：3：2：1的柔嫩艾美耳球虫PTMZ株、毒害艾美耳球虫PNHZ株、巨型艾美耳球虫PMHY株、堆型艾美耳球虫PAHY株，每羽份中含有卵囊1100个±10％个。可选地，所述的产气荚膜梭菌菌液中含有A型产气荚膜梭菌(CVCC2050，购自中国国家兽医微生物菌种保藏管理中心)的浓度为4×109CFU/mL。可选地，所述的饲粮按照质量份包括玉米55.15份，小麦麸5.00份，大豆油3.00份，CP43％豆粕25.25份，粒状石粉4.50份，粉状石粉4.50份，磷酸氢钙1.30份，氯化钠0.30份，70％L-赖氨酸硫酸盐0.13份，99％DL-蛋氨酸0.20份，L-苏氨酸0.09份，60％氯化胆碱CC0.10份，多维0.03份，矿添0.45份。可选地，所述步骤4中的鸡舍温度在22℃，相对湿度低于75％。本专利技术还公开了一种用于蛋鸡小肠肠炎模型的饲粮，按照质量份包括玉米55.15份，小麦麸5.00份，大豆油3.00份，CP43％豆粕25.25份，粒状石粉4.50份，粉状石粉4.50份，磷酸氢钙1.30份，氯化钠0.30份，质量分数为70％L-赖氨酸硫酸盐0.13份，质量分数为99％DL-蛋氨酸0.20份，L-苏氨酸0.09份，质量分数为60％氯化胆碱CC0.10份，多维0.03份，矿添0.45份。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：本专利技术的模型可以诱导蛋鸡小肠肠炎，破坏肠道物理和化学屏障功能，导致肠道炎症，降低蛋鸡产蛋率、采食量和饲料转化效率。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术试验设计图；图2是本专利技术模型对肠道病变情况的影响；图3是本专利技术模型对肠道物理屏障相关基因的影响(P<0.05)；图4是本专利技术模型对肠道化学屏障相关基因的影响(P<0.05)；图5是本专利技术模型对肠道促炎因子相关基因的影响(P<0.05)。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本专利技术的实施方式，藉此对本专利技术如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。实施例1一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1、选用50只产蛋高峰期(28周龄)罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设处理，每个处理10个重复，每个重复1只鸡，分别为灌胃10mL生理盐水(对照组，CON)和4个10mL攻毒处理组(图1)。其中，攻毒处理组的具体操作方法为，球虫疫苗(200倍弱毒性球虫四价疫苗，含有球虫孢子数为220000个)+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组，不同梯度的A型产气荚膜梭菌的灌服剂量分别为：1mL(T1)、2mL(T2)、3mL菌液(T3)和4mL菌液(T4)。试验期为7天，分别于试验开始后每天早上9：00先灌服200倍球虫疫苗(10克溶解于10mL生理盐水中)，半小时以后再灌服产气荚膜梭菌菌液(分别将称量好的1mL、2mL、3mL和4mLA型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1、选用50只产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设处理，每个处理10个重复，每个重复1只鸡，分别为对照组和4个攻毒处理组；/n步骤2、4个攻毒处理组为：球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组，将球虫疫苗溶解于生理盐水中，配成球虫疫苗溶液，将A型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐水中，配成A型产气荚膜梭菌菌液，分别于试验开始后每天早上9：00先灌服球虫疫苗溶液，半小时以后再灌服A型产气荚膜梭菌菌液；最后一次灌服后48h进行采样；/n步骤3、试验期为7天，饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮，根据NRC（1994）和中国鸡饲养标准配制，饲喂方式为定量饲喂；饲养管理按常规饲养管理进行，每周进行严格消毒，室温保持在20~22℃，注意通风换气；试验开始预饲2周，前通过观察记录蛋鸡产蛋率，保持初始产蛋率无统计学差异以后，开始正式试验；/n步骤4、将各个处理组的饲料按照每天110g~120g、或者按其对应周自由采食量的90%，分两次：上午5点30和下午3点30，饲养过程中蛋鸡自由饮水。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛋鸡小肠肠炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、选用50只产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设处理，每个处理10个重复，每个重复1只鸡，分别为对照组和4个攻毒处理组；
步骤2、4个攻毒处理组为：球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组，将球虫疫苗溶解于生理盐水中，配成球虫疫苗溶液，将A型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐水中，配成A型产气荚膜梭菌菌液，分别于试验开始后每天早上9：00先灌服球虫疫苗溶液，半小时以后再灌服A型产气荚膜梭菌菌液；最后一次灌服后48h进行采样；
步骤3、试验期为7天，饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮，根据NRC（1994）和中国鸡饲养标准配制，饲喂方式为定量饲喂；饲养管理按常规饲养管理进行，每周进行严格消毒，室温保持在20~22℃，注意通风换气；试验开始预饲2周，前通过观察记录蛋鸡产蛋率，保持初始产蛋率无统计学差异以后，开始正式试验；
步骤4、将各个处理组的饲料按照每天110g~120g、或者按其对应周自由采食量的90%，分两次：上午5点30和下午3点30，饲养过程中蛋鸡自由饮水。


2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡为28周龄罗曼粉蛋鸡；对照组灌胃10mL生理盐水。


3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，球虫疫苗+不同梯度的A型产气荚膜梭菌处理组为：球虫疫苗+1mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+2mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+3mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗+4mLA型产气荚膜梭菌处理组；球虫疫苗的具体的制备方法如下：将10克球虫疫苗溶解于10mL生理盐水中；不同梯度的A型产气荚膜梭菌菌液的具体的制备方法如下：分别将称量好的1mL、2mL、3mL和4mLA型产气荚膜梭菌菌液溶解于生理盐水中，最终配成10mLA型产...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建萍，张红叶，晏磊，毛湘冰，尹华东，白世平，张克英，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51