一种标准品载体及其在测定重组腺相关病毒滴度中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于测定重组腺相关病毒滴度的标准品载体，所述标准品载体含有常用BGHpA和SV40pA元件，且两个ITR外侧分别具有一个MlyI酶切位点，能酶切产生ITR平末端，当用MlyI酶切标准品载体骨架后，回收的线性化rAAV标准品片段中仅包含转基因表达框及两侧ITR序列，该标准品不包含任何的骨架序列，在最大程度上模拟了野生型AAV病毒的ITR结构，保证了rAAV病毒滴度测定的准确性，具有高效、准确、重复性好的特点，克服了现阶段AAV标准品制备不合格引起的qPCR检测结果不准确的问题。合格引起的qPCR检测结果不准确的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种标准品载体及其在测定重组腺相关病毒滴度中的应用


[0001]本专利技术属于慢病毒病毒滴度检测
，具体涉及一种标准品载体及其在测定重组腺相关病毒滴度中的应用。

技术介绍

[0002]重组腺相关病毒(recombinant adeno
‑
associated virus,rAAV)因其非整合、无致病性、携带的治疗基因表达时间长、靶向性好等特点被广泛应用于基础研究和临床基因治疗中。目前，针对不同疾病已进行了接近200例rAAV临床试验，且有许多研究性新药正处于FDA和EMA的不同审查阶段，首个基于rAAV的基因治疗药物Glybera已于2012年被欧盟批准用于治疗脂蛋白脂肪酶缺乏症(LPLD)。尽管rAAV的临床试验已证明其良好的疗效及高度的安全性，但rAAV剂量缺乏统一有效的标准化测定方法仍然是阻碍其商业化的限制因素。因此，建立合适的质量控制方法以精确测定rAAV的准确剂量显得至关重要。
[0003]病毒滴度(vg/ml)是rAAV临床治疗中衡量rAAV病毒剂量的重要指标。目前应用最广泛的rAAV病毒滴度测定方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组腺相关病毒的标准品载体，含有第一ITR和第二ITR，所述第一ITR位于第二ITR的上游，其特征在于，所述第一ITR的上游和第二ITR的下游分别具有一个Type IIS限制性内切酶的酶切位点。2.根据权利要求1所述的标准品载体，其特征在于，所述酶切位点能酶切产生AAV2野生型ITR平末端。3.根据权利要求1所述的所述标准品载体，其特征在于，所述Type IIS限制性内切酶为MlyI酶。4.根据权利要求3所述的标准品载体，其特征在于，所述酶切位点的序列为：5
’‑
GAGTCNNNNN
‑3’
(SEQ ID NO.1)；3
’‑
CTCAGNNNNN
‑5’
...

【专利技术属性】
技术研发人员：施金秀，罗燕，陈艺彬，林映君，叶知晟，
申请(专利权)人：云舟生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：