一种慢病毒滴度检测引物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种慢病毒滴度检测引物、试剂盒及检测方法，该检测试剂盒含有SIN载体上特异性扩增引物，该引物仅能够检测出整合到宿主基因组中的慢病毒基因组拷贝数，从而消除了残留质粒DNA的干扰，最终建立了一种高效、准确、重复性好的慢病毒功能滴度测定方法，准确地确认慢病毒载体的整合拷贝数。

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒滴度检测引物、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及病毒分子生物学领域，具体为一种慢病毒滴度检测引物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
慢病毒载体是一种来源于I型人类免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus,HIV)的逆转录病毒载体，具有宿主范围广、免疫原性低、转染效率高、目的基因稳定高效表达、可感染分裂和非分裂细胞等优点，已被广泛应用于基础研究和临床基因治疗中。慢病毒在宿主基因组中的随机整合可诱发整合位点附近基因表达上调，甚至激活原癌基因，导致肿瘤的发生。为了解决这个潜在的安全问题，目前已开发出第三代自失活(SIN)慢病毒载体系统，与第二代慢病毒载体相比，SIN载体具有以下特点：1)缺失5’LTR及3’LTR中具有启动子/增强子活性的U3区，并将5’LTR的U3区替换为RSV启动子，以补偿其转录活性；2)删除病毒复制所必需的tat基因；3)将rev基因在单独的载体上表达。这不仅进一步提高了慢病毒的生物安全性，降低了复制型慢病毒(RCL)产生的可能性，而且大大扩展了慢病毒载体在基因治疗领域的应用范围。基于慢病毒载体的基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种引物，包含上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物在SIN载体的3’LTR中的U3区设计，所述下游引物在SIN载体的5’LTR下游的慢病毒骨架设计。/n

【技术特征摘要】
1.一种引物，包含上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物在SIN载体的3’LTR中的U3区设计，所述下游引物在SIN载体的5’LTR下游的慢病毒骨架设计。


2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物用于扩增序列如SEQIDNO.1所示的片段、或包括序列与SEQIDNO.1所示序列互补的序列片段、或包括序列与SEQIDNO.1所示序列或其互补序列至少一个碱基插入、缺失或替换的序列。


3.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物的序列为：
上游引物U3-F：AGGGCTAATTCACTCCCAACG(SEQIDNO.2)；
下游引物LV-R：CGCTTTCAAGTCCCTGTTCG(SEQIDNO.3)。


4.权利要求1～3任一项所述引物在慢病毒滴度检测中的应用。


5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1～3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：施金秀，罗燕，蔡育宜，
申请(专利权)人：云舟生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44