一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，包括以下步骤：S1、原材料采集：选择玫瑰茄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉的玫瑰茄叶片，将收集到的玫瑰茄叶片洗净、晾干，避光保存；S2、原料预处理：取玫瑰茄叶片，机械粉碎，加入20‑22倍量的乙醇，浸提3天，取出后过滤，旋蒸浓缩至浸膏状，再冷冻干燥，用乙酸乙酯萃取3次，再次旋蒸浓缩、冷冻干燥后称重，得到白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物。本发明专利技术采用乙醇提取、多步色谱纯化等工艺，首次从玫瑰茄中提取得到白藜芦醇，且提取高效、所获产品产率高，绿色环保，易于回收。

【技术实现步骤摘要】
一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺
本专利技术涉及植物中成分提取
，尤其涉及一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺。
技术介绍
白藜芦醇(3，4'，5-三羟基二苯乙烯；resveratrol)是一种活性多酚化合物，也是天然抗氧化剂。白藜芦醇对人体具有抗肿瘤、降血脂、抑制血小板聚集、调节脂蛋白代谢、保肝、抗氧化、抑菌等多种药理作用，是极具开发价值的天然物质。玫瑰茄(学名：HibiscussabdariffaLinn)又名洛神花，锦奎科木槿属一年生草本植物，原产非洲，广泛分布于世界热带及亚热带地区。玫瑰茄花萼富含有机酸和花色素类、黄酮类、木脂素类、还原糖类成分，具有抑菌和促进胆汁分泌功能，对心血管疾病、高血压、动脉硬化等有预防和治疗作用，玫瑰茄的营养和保健价值使其具有广阔的应用开发前景。根据已有报道，白藜芦醇广泛存在于虎杖、葡萄、花生、朝鲜槐等植物中，但在玫瑰茄中，尚未有报道分离到白藜芦醇。目前对玫瑰茄资源的开发研究集中于其花萼深加工中，但对玫瑰茄叶的利用严重不足，导致农业资源的浪费。研究和开发玫瑰茄叶中的有效成分对综合利用玫瑰茄植物资源，提高玫瑰茄的经济价值具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的对玫瑰茄叶的利用严重不足，导致农业资源的浪费的缺点，而提出的一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺。一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，包括以下步骤：S1、原材料采集：选择玫瑰茄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉的玫瑰茄叶片，将收集到的玫瑰茄叶片洗净、晾干，避光保存；S2、原料预处理：取玫瑰茄叶片，机械粉碎，加入20-22倍量的乙醇，浸提3天，取出后过滤，旋蒸浓缩至浸膏状，再冷冻干燥，用乙酸乙酯萃取3次，再次旋蒸浓缩、冷冻干燥后称重，得到白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物；S3、将白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物经300目正相硅胶吸附及柱层析梯度洗脱，然后用全自动快速层析系统纯化，经液质联用确认，得到白藜芦醇。优选的，所述S2中，原料预处理：取玫瑰茄叶片，机械粉碎，加入20倍量的乙醇，浸提3天，取出后过滤，旋蒸浓缩至浸膏状，再冷冻干燥，用乙酸乙酯萃取3次，再次旋蒸浓缩、冷冻干燥后称重，得到白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物。优选的，所述S3中，柱层析梯度洗脱的条件为：以乙酸乙酯/正己烷为洗脱剂除去大部分杂质，再以活性碳和闪式层析柱层析进一步除去叶绿素杂质。优选的，所述S3中，全自动快速层析系统纯化的条件为：以乙酸乙酯溶解，加活性碳除去叶绿素杂质，过滤浓缩后，浓缩物以硅胶拌样后取出一半干法上样。本专利技术对玫瑰茄叶进行开发研究中采用乙醇提取、多步色谱纯化等工艺，经液质联用确认，首次从中提取得到白藜芦醇。该工艺的特点是：1、本工艺采用乙醇为提取溶剂是因为白藜芦醇在乙醇中溶解度较好，且乙醇属于绿色溶剂，毒性低、易于回收循环使用；2、提取工艺采用常温渗漉法是由于玫瑰茄叶中含有大量叶绿素，常温或低温渗漉可以尽量避免叶绿素杂质的溶出，从而简化后期纯化工艺；3、经过小试，少量的活性炭能对色素有较好吸附消除作用，大量或过量则会导致白藜芦醇的损失；4、工艺采用全自动快速层析系统纯化白藜芦醇，过程高效，所获产品产率高；5、将液质联用技术应用于玫瑰茄叶中白藜芦醇的鉴定，测量精准，保证了结果的可靠性。附图说明图1为本专利技术的提取工艺流程图；图2为快速层析纯化过程中的梯度层析图；图3为白藜芦醇标准溶液母离子负离子模式下的扫描图；图4玫瑰茄叶提取液母离子负离子模式下的扫描图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例参照图1，本专利技术提出的一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，包括以下步骤：S1、原材料采集：选择玫瑰茄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉叶片；将收集到的玫瑰茄叶洗净，避光保存；S2、原料预处理：取玫瑰茄叶1公斤，机械粉碎，加入20升乙醇，浸渍3天。过滤后，旋蒸浓缩至浸膏状，冷冻干燥称重为90.3g。以乙酸乙酯200毫升萃取3次，旋蒸浓缩冷冻干燥后称重为80.4g。S3、初步纯化：将白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物80克以300目正相硅胶65克拌样，400克硅胶柱层析，乙酸乙酯/正己烷梯度洗脱(40/60至90/10)，其中乙酸乙酯/正己烷(70/30至80/20)流分合并浓缩至3.8克。层析梯度如下表1：试剂(ml)乙酸乙酯(％)正己烷(％)对应试管号20001001-720040608-14200505015-21200604022-28200703029-35200802036-42200901043-49表1S4、二次纯化：将3.8克浓缩物以25克硅胶拌样，100克硅胶闪式柱层析，乙酸乙酯/正己烷梯度洗脱(50/50至60/40)，其中乙酸乙酯/正己烷(50/50至55/45)流分合并浓缩至1.1克。层析梯度如下表2：试剂(ml)乙酸乙(％)正己烷(％)对应试管号20001001-11300505012-28200554529-40200584241-52表2S5、快速层析纯化：以乙酸乙酯30毫升溶解，加500毫克活性碳除叶绿素杂质，过滤浓缩至1.0克。浓缩物再以4g硅胶拌样后取出2g干法上样，全自动快速层析系统纯化，分离方法条件：25克正相预制柱，乙酸乙酯/正己烷梯度洗脱，DAD检测器，由TLC检测得29-32管内含有白藜芦醇，进行合并回收，称重为21mg。层析梯度如图2；S6、产物鉴定：经液质联用确认，得到白藜芦醇。本专利技术中，液质提取方法：称取样品1.00克加入甲醇10毫升，超声30分钟，并浸泡24小时。取5毫升提取液，加入PSA+活性炭净化，震荡2分钟，离心5分钟，取上清液1毫升，加入甲醇定容至2毫升，过膜后使用UPLC-MS/MS进行测定。UPLC-MS/MS工作条件：使用质谱直接进样，ESI负离子模式，仪器型号为AB4000+。质谱条件：母离子(m/z)为227.1，子离子(m/z)为142.7和184.5。检测结果：在玫瑰茄叶样品中检测到母离子(m/z)为227.1的白藜芦醇，其浓度约为17mg/kg，如下图3、图4。以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、原材料采集：选择玫瑰茄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉的玫瑰茄叶片，将收集到的玫瑰茄叶片洗净、晾干，避光保存；/nS2、原料预处理：取玫瑰茄叶片，机械粉碎，加入20-22倍量的乙醇，浸提3天，取出后过滤，旋蒸浓缩至浸膏状，再冷冻干燥，用乙酸乙酯萃取3次，再次旋蒸浓缩、冷冻干燥后称重，得到白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物；/nS3、将白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物经300目正相硅胶吸附及柱层析梯度洗脱，然后用全自动快速层析系统纯化，经液质联用确认，得到白藜芦醇。/n

【技术特征摘要】
1.一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1、原材料采集：选择玫瑰茄生产过程中自然脱落及种植期间人工打掉的玫瑰茄叶片，将收集到的玫瑰茄叶片洗净、晾干，避光保存；
S2、原料预处理：取玫瑰茄叶片，机械粉碎，加入20-22倍量的乙醇，浸提3天，取出后过滤，旋蒸浓缩至浸膏状，再冷冻干燥，用乙酸乙酯萃取3次，再次旋蒸浓缩、冷冻干燥后称重，得到白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物；
S3、将白藜芦醇叶乙酸乙酯萃取物经300目正相硅胶吸附及柱层析梯度洗脱，然后用全自动快速层析系统纯化，经液质联用确认，得到白藜芦醇。


2.根据权利要求1所述的一种玫瑰茄叶中白藜芦醇的提取工艺，其特征在于，所述S...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨路，王台虎，赵万洲，郭永峰，
申请(专利权)人：赵万洲，王台虎，郭永峰，
类型：发明
国别省市：江苏;32