Actinaphthoran A及B的制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及新化合物Actinaphthoran A及Actinaphthoran B的化学结构、制备方法，以及在抗肿瘤及抗菌新药研发中的应用。化合物Actinaphthoran A及Actinaphthoran B是本发明专利技术申请人从海洋放线菌Streptomyces griseus sp.KCB‑132的次生代谢产物中发现的新化合物，药理活性研究发现，2个新化合物对多种细菌及真菌具有较好的生长抑制作用，同时，化合物Actinaphthoran B对人结肠癌LS180肿瘤细胞具有显著的生长抑制作用，具有研发成为新型抗菌及抗肿瘤药物的潜力。

【技术实现步骤摘要】
ActinaphthoranA及B的制备和应用
本专利技术涉及新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的结构、制备方法，以及在抗菌和抗肿瘤新药研发中的前景。
技术介绍
当今，肿瘤等重大疾病不但严重威胁着我国人民健康及生命安全，同时也对国民经济带来了沉重的负担。因此，研发新型、高效低毒且作用机制独特的抗肿瘤新药具有重要的社会及经济意义。创新药物研发经验表明，从天然产物中寻找活性先导物进而创制新药是最有效途径之一，天然产物特有的化学结构复杂性和生物活性多样性，奠定了从天然产物中发现活性先导物进而创制新药的成功几率。海洋放线菌是一类重要的药源微生物，生活在大洋中的放线菌，因其生理生化和16SrRNA等分子生物学特征与陆生放线菌有明显差别，致使其次生代谢产物结构类型更加新颖、生物活性更加显著，因此，从海洋放线菌中寻找新型先导化合物进而研发抗炎及抗肿瘤新药具有巨大的潜力。本专利技术所涉及的化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB为新化合物，是专利技术申请人从海洋活性放线菌Streptomycesgriseussp.KCB-132的次生代谢产物中分离纯化得到的新结构化合物。药理活性实验发现，2个新化合物对多种肿瘤细胞的生长显示抑制作用，其中ActinaphthoranB对人结肠癌LS180肿瘤细胞具有显著的生长抑制作用，其半数抑制浓度IC50为1.9μM；同时，2个新化合物对多种病菌的生长具有抑制作用，尤其ActinaphthoranB对蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)及黄瓜炭疽病菌(Colletotrichumlagenarium)显示良好的生长抑制作用，其MIC分别为2μg/mL及2μg/mL。因此，2个新化合物，尤其新ActinaphthoranB具有开发成新型抗菌及抗肿瘤药物的潜力。新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的化学结构、制备方法及工艺、抗菌和抗肿瘤活性研究均为首次公开，因此具有突出的实质性特点。
技术实现思路
本专利技术提供新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的制备方法，以及在抗肿瘤及抗菌新药研发中的应用。本专利技术所涉及的用于抗肿瘤及抗菌新药研发的2个新化合物为新骨架化合物，分别命名为ActinaphthoranA及ActinaphthoranB，其分子式分别为C20H18O4及C20H16O4，化学结构式分别如下：本专利技术所涉及的新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的制备方法为：将海洋活性放线菌Streptomycesgriseussp.KCB-132划线接种于固体培养基上，于28℃培养3-4天，直至长出白色的孢子，然后将孢子接种到液体培养基，在28℃及150-220转/分钟条件下，摇床培养8-12天，收获发酵物。过滤发酵物获得发酵液和菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂柱吸附、洗脱及浓缩，菌丝体经丙酮破碎提取，减压浓缩提取物；合并浓缩物，利用有机溶剂萃取，减压浓缩得总浸膏。总浸膏通过硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，二氯甲烷洗脱组分先进行ODS反相柱层析，再通过HPLC分离，甲醇-水梯度洗脱，即得到纯度达98％以上的ActinaphthoranB。硅胶柱的二氯甲烷-甲醇(98:2，V/V)洗脱部分，先进行ODS反相柱层析，再通过HPLC，甲醇-水梯度洗脱，即得到纯度达98％以上的ActinaphthoranA。本制备工艺中所涉及的培养基，为半海水ISP2培养基、纯海水ISP2培养基的一种,优选为半海水ISP2培养基。本制备工艺中所涉及的用作提取溶剂的有机醇，为甲醇、乙醇中的一种，优选为乙醇作为提取剂。本制备工艺中所涉及的大孔吸附树脂柱，为弱极性或非极性的大孔吸附树脂，优选弱极性型号的大孔吸附树脂。本制备工艺中所涉及的萃取剂，为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇中的一种，优选为乙酸乙酯作为萃取剂。本制备工艺中所涉及的重结晶溶剂，为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等溶剂中的一种或几种，优选甲醇作为重结晶溶剂。本制备工艺中所涉及的用于分离新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的HPLC条件为PhenomenexLuna，C18，21.2mm×250mm，5μm。本专利技术还提供了新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的抗肿瘤及抗菌实验方法、结果及新药研发中的应用前景。本专利技术涉及的新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB，其化学结构、制备方法及其抗菌或抗肿瘤活性研究，均为首次公开，不存在通过其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，且有望用于一种新型抗菌或抗肿瘤药物的开发。附图说明图1、新化合物ActinaphthoranA的核磁共振氢谱图2、新化合物ActinaphthoranA的核磁共振碳谱图3、新化合物ActinaphthoranA的DEPT-135图谱图4、新化合物ActinaphthoranA的氢-氢相关图谱图5、新化合物ActinaphthoranA的HSQC图谱图6、新化合物ActinaphthoranA的HMBC图谱图7、新化合物ActinaphthoranA的NOESY图谱图8、新化合物ActinaphthoranA的高分辨质谱图9、新化合物ActinaphthoranA的单晶X-射线衍射图图10、新化合物ActinaphthoranA的紫外吸收图谱图11、新化合物ActinaphthoranA的CD图谱图12、新化合物ActinaphthoranB的核磁共振氢谱图13、新化合物ActinaphthoranB的核磁共振碳谱图14、新化合物ActinaphthoranB的DEPT-135图谱图15、新化合物ActinaphthoranB的氢-氢相关图谱图16、新化合物ActinaphthoranB的HSQC图谱图17、新化合物ActinaphthoranB的HMBC图谱图18、新化合物ActinaphthoranB的NOESY图谱图19、新化合物ActinaphthoranB的高分辨质谱图20、新化合物ActinaphthoranB的紫外吸收图谱图21、新化合物ActinaphthoranB的CD图谱具体实施方式下面的实施例用以解释本专利技术，但是并非对本专利技术实质内容的限制。实施例1、新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的制备将海洋放线菌Streptomycesgriseussp.KCB-132划线接种于ISP2半海水固体培养基上，28℃条件下培养3天后，取1cm2菌苔接种到ISP2半海水ISP2液体培养基中，于28℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.新化合物Actinaphthoran A及Actinaphthoran B的化学结构如下图所示：/n

【技术特征摘要】
1.新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的化学结构如下图所示：





2.权利要求1所述的2个新化合物的制备方法，其特征为：将海洋放线菌Streptomycesgriseussp.KCB-132划线接种于固体培养基上，于28℃培养3-4天，直至长出白色的孢子，接种到液体培养基，于28℃及150-220转/分钟条件下，摇床培养8-12天收获发酵物；发酵液通过大孔吸附树脂柱层析吸附、洗脱、减压浓缩，菌丝体经丙酮破碎、提取、减压浓缩，浓缩物合并得总浸膏；总浸膏通过硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，二氯甲烷洗脱组分先进行ODS反相柱层析，再通过HPLC分离，甲醇-水梯度洗脱，即得到纯度达98％以上的ActinaphthoranB；硅胶柱的二氯甲烷-甲醇(98:2，V/V)洗脱部分，先进行ODS反相柱层析，再通过HPLC，甲醇-水梯度洗脱，即得到纯度达98％以上的ActinaphthoranA。


3.根据权利要求2所述的新化合物ActinaphthoranA及ActinaphthoranB的制备方法，其特征为：工艺中所用涉及的培养基，为半海水ISP2培养基、纯海水ISP2培养基的一种,优选为半海水ISP2培养基。


4.根据权利要求2所述的新化合物Actinaph...

【专利技术属性】
技术研发人员：张淑敏，张露，谢则平，李诚博，宫世周，戴胜军，申胜标，
申请(专利权)人：烟台蓝创生物技术有限公司，山东国际生物科技园发展有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37