一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，本发明专利技术在对细胞的溶液进行破碎后，添加同位素内标的标准品，得到第一混合液；再在第一混合液内加入两种提取液，涡旋混合后静置；静置后离心取上层有机相，干燥后用复溶溶液混合复溶，得到样品；再用超高效液相色谱‑质谱仪器对样品进行脂质组学数据采集；利用软件进行数据分析，得到分析结果；本发明专利技术可以检测标记细胞脂质组分及其质量同位素异构体；还可以根据细胞中脂质化合物的种类和数量比较不同类型的细胞特性，并且实现对相同脂质来源的同位素异构体的精确匹配。

【技术实现步骤摘要】
一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法
本专利技术涉及一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，属于细胞脂质组学分析方法

技术介绍
细胞是生物体结构和功能的基本单位，体形极微，形状多种多样；细胞主要由细胞核与细胞质构成，表面有细胞膜，高等植物细胞膜外还有细胞壁。组成细胞的化学物质分为无机物和有机物，细胞中有机物达几千种之多，约占细胞干重的90％以上，有机物中主要有四大类分子组成，即蛋白质、核酸、脂质和糖类。目前已有的检测方法只针对个别种类的细胞，而对于更多种类的细胞中脂质存在情况的了解尚不清楚，并且也无法去检测标记检测细胞脂质组分及其质量同位素异构体。
技术实现思路
针对所述存在的技术问题，本专利技术的目的是：提出了一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，可以检测标记检测细胞脂质组分及其质量同位素异构体。本专利技术的技术解决方案是这样实现的：一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，包括下列步骤：步骤一：提取待检测细胞，调整待检测细胞的浓度，得到准备溶液；步骤二：对所述准备溶液进行超声破碎，得到细胞悬液；步骤三：在所述细胞悬液内添加同位素内标的标准品，涡旋混合，得到第一混合液；步骤四：在所述第一混合液中加入第一提取液，涡旋混合，得到第二混合液；步骤五：在所述第二混合液中加入第二提取液，涡旋混合，得到第三混合液；步骤六：对所述第三混合液进行室温静置，离心取上层有机相，干燥后用复溶溶液混合复溶，得到样品；步骤七：对所述样品用分析仪器进行脂质组学数据采集；将属于同一个标记脂质同位素异构体归属到同一个标记脂质分子，将同位素异构体进行质量同位素异构体分布分析；步骤八：利用软件对步骤七中采集的数据进行分析，得到分析结果。在本专利技术的一个实施方案中，所述步骤六中复溶溶液为甲醇、异丙醇或乙腈。在本专利技术的一个实施方案中，所述步骤六中的干燥的方法为恒温蒸法发或惰性气体吹干法。在本专利技术的一个实施方案中，所述步骤七中分析仪器为超高效液相色谱-质谱仪器或色谱组合型四级杆-轨道阱质谱。在本专利技术的一个实施方案中，所述步骤四中第一提取液为甲醇。在本专利技术的一个实施方案中，所述步骤五中第二提取液为甲基叔丁基醚或二氯甲烷。由于所述技术方案的运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：本专利技术的一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，可以检测标记细胞脂质组分及其质量同位素异构体；还可以根据细胞中脂质化合物的种类和数量比较不同类型的细胞特性，并且实现对相同脂质来源的同位素异构体的精确匹配。附图说明下面结合附图对本专利技术技术方案作进一步说明：附图1为本专利技术的一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法的步骤图。具体实施方式下面结合附图来说明本专利技术。请参考图1，实施例一：一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，包括下列步骤：步骤一：提取待检测细胞，调整待检测细胞的浓度，得到准备溶液；步骤二：对所述准备溶液进行超声破碎，得到细胞悬液；步骤三：在所述细胞悬液内添加同位素内标的标准品，涡旋混合，得到第一混合液；同位素内标为CA-d5，DCA-d5，LCA-d4，GLCA-d4，TCA-d4，TLCA-d5，TCDCA-d5和TUDCA-d5中的一种或多种；步骤四：在所述第一混合液中加入甲醇，涡旋混合，得到第二混合液；步骤五：在所述第二混合液中加入甲基叔丁基醚，涡旋混合，得到第三混合液；步骤六：对所述第三混合液进行室温静置，离心取上层有机相，利用恒温蒸法干燥后用甲醇混合复溶，得到样品；步骤七：对所述样品用超高效液相色谱-质谱仪器进行脂质组学数据采集；将属于同一个标记脂质同位素异构体归属到同一个标记脂质分子，将同位素异构体进行质量同位素异构体分布分析；其中色谱条件为：色谱柱：SynergiPolar-RP(2.0×50mm,5μm)；柱温：50℃；流速：800μL/min；流动相A：0.1%的甲酸的水溶液；流动相B：0.1%的甲酸的甲醇溶液。其中质谱条件为：离子源参数为CurtainGas(CUR)20、CollisionGas(CAD)9、ionsprayvoltage-4500V、sourcetemperature600℃、CUR25.0、GS160.0和GS265.0。步骤八：利用软件对步骤七中采集的数据进行分析，得到分析结果。请参考图1，实施例二：一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，包括下列步骤：步骤一：提取待检测细胞，调整待检测细胞的浓度，得到准备溶液；步骤二：对所述准备溶液进行超声破碎，得到细胞悬液；步骤三：在所述细胞悬液内添加同位素内标的标准品，涡旋混合，得到第一混合液；所述同位素内标为正十九酸甲酯；同位素内标为CA-d5，DCA-d5，LCA-d4，GLCA-d4，TCA-d4，TLCA-d5，TCDCA-d5和TUDCA-d5中的一种或多种；步骤四：在所述第一混合液中加入甲醇，涡旋混合，得到第二混合液；正十九酸甲酯的浓度为1.5mg/mL；步骤五：在所述第二混合液中加入二氯甲烷，涡旋混合，得到第三混合液；步骤六：对所述第三混合液进行室温静置，离心取上层有机相，利用氦气吹干后用异丙醇混合复溶，得到样品；步骤七：对所述样品用色谱组合型四级杆-轨道阱质谱进行脂质组学数据采集；将属于同一个标记脂质同位素异构体归属到同一个标记脂质分子，将同位素异构体进行质量同位素异构体分布分析；其中色谱条件为：色谱柱:WatersUPLCHSST3(2.1mm*50mm,1.8μm)+在线过滤器；柱温：55℃；进样量：10μL；流速为0.8mL/min；流动相A：甲酸+乙酸铵+纯水；流动相B：甲酸+乙酸铵+甲醇；其中质谱条件为：ESI源，正离子模式，加热温度：300℃,鞘气流速)：45arb,辅助气流速：20arb,吹扫气流速：1arb，喷雾电压：3.5KV,离子传输管的温度：400℃；一级扫描范围:200-2000；步骤八：利用软件对步骤七中采集的数据进行分析，得到分析结果。本专利技术的一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，可以检测标记细胞脂质组分及其质量同位素异构体；还可以根据细胞中脂质化合物的种类和数量比较不同类型的细胞特性，并且实现对相同脂质来源的同位素异构体的精确匹配。所述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并加以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围，凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，其特征在于，包括下列步骤：/n步骤一：提取待检测细胞，调整待检测细胞的浓度，得到准备溶液；/n步骤二：对所述准备溶液进行超声破碎，得到细胞悬液；/n步骤三：在所述细胞悬液内添加同位素内标的标准品，涡旋混合，得到第一混合液；/n步骤四：在所述第一混合液中加入第一提取液，涡旋混合，得到第二混合液；/n步骤五：在所述第二混合液中加入第二提取液，涡旋混合，得到第三混合液；/n步骤六：对所述第三混合液进行室温静置，离心取上层有机相，干燥后用复溶溶液混合复溶，得到样品；/n步骤七：对所述样品用分析仪器进行脂质组学数据采集；将属于同一个标记脂质同位素异构体归属到同一个标记脂质分子，将同位素异构体进行质量同位素异构体分布分析；/n步骤八：利用软件对步骤七中采集的数据进行分析，得到分析结果。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于液相色谱串联质谱的细胞脂质组学分析方法，其特征在于，包括下列步骤：
步骤一：提取待检测细胞，调整待检测细胞的浓度，得到准备溶液；
步骤二：对所述准备溶液进行超声破碎，得到细胞悬液；
步骤三：在所述细胞悬液内添加同位素内标的标准品，涡旋混合，得到第一混合液；
步骤四：在所述第一混合液中加入第一提取液，涡旋混合，得到第二混合液；
步骤五：在所述第二混合液中加入第二提取液，涡旋混合，得到第三混合液；
步骤六：对所述第三混合液进行室温静置，离心取上层有机相，干燥后用复溶溶液混合复溶，得到样品；
步骤七：对所述样品用分析仪器进行脂质组学数据采集；将属于同一个标记脂质同位素异构体归属到同一个标记脂质分子，将同位素异构体进行质量同位素异构体分布分析；
步骤八：利用软件对步骤七中采集的数据进行分析，得到分析结果。
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴元方，
申请(专利权)人：苏州苏研药物分析测试科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32