一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的疫苗及其制备方法，属于生物制品制备技术领域。本发明专利技术提供的制备方法，包括将至少含有5型肺炎链球菌的各血清型的荚膜多糖分别进行降解；活化；冻干或沉淀；将活化肺炎链球菌荚膜多糖复溶或溶解，并与载体蛋白结合；纯化结合疫苗原液。上述方法制得的疫苗原液中抗原特异性表位没有丢失，保持了抗原的完整性，最大限度地确保了多糖‑蛋白结合物制备过程中的免疫原性不降低，同时避免了蛋白自聚物的产生。本发明专利技术方法制得的肺炎链球菌荚膜多糖‑蛋白结合疫苗原液可用于制备肺炎链球菌荚膜多糖单价、多价结合疫苗，也可用于制备含有肺炎链球菌荚膜多糖的联合疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的疫苗及其制备方法
本专利技术属于生物制品制备
，具体地说，涉及一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的疫苗及其制备方法。
技术介绍
肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)可引起脑膜炎、肺炎等侵入性疾病和中耳炎等非侵入性疾病。目前，针对肺炎链球菌的主要防御手段为多糖疫苗和结合疫苗，已经证实了前者在成年人中的保护效果，对于肺炎链球菌的主要易感人群，婴儿和幼儿中的保护力却很弱。结合疫苗因其可以在婴幼儿中引起有效保护和免疫记忆，自2000年首次问世以来，在全世界许多国家被纳入免疫计划或批准上市，并且最近已经推荐用于成人。目前已经获批上市的多价肺炎球菌结合疫苗主要有辉瑞(惠氏)生产的7价肺炎球菌结合疫苗(商品名沛儿，Prevnar)以及升级产品13价肺炎球菌结合疫苗(商品名沛儿13，Prevnar13)和GSK生产的11价肺炎球菌结合疫苗(商品名Synflorix)。多糖-蛋白结合物的免疫原性取决于多糖的分子量大小、活化与结合工艺、载体蛋白种类、结合物纯化方法、结合物的质量控制标准以及佐剂等多重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗原液的制备方法，其特征在于，包括将至少含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的各血清型肺炎链球菌荚膜多糖分别进行：(1)降解；(2)活化；(3)冻干或沉淀；(4)将冻干的或沉淀的活化肺炎链球菌荚膜多糖复溶后与载体蛋白结合并封闭；(5)纯化结合疫苗原液。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有5型肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗原液的制备方法，其特征在于，包括将至少含有5型肺炎链球菌荚膜多糖的各血清型肺炎链球菌荚膜多糖分别进行：(1)降解；(2)活化；(3)冻干或沉淀；(4)将冻干的或沉淀的活化肺炎链球菌荚膜多糖复溶后与载体蛋白结合并封闭；(5)纯化结合疫苗原液。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述降解是将肺炎链球菌荚膜多糖降解为分子量100-850kDa的多糖，优选150-650kDa。


3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述降解是采用温和的酸或物理方法使肺炎链球菌荚膜多糖降解；所述酸包括但不限于乙酸、柠檬酸或碳酸；所述物理方法包括但不限于高压均相或超声破碎。


4.如权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述活化是在步骤(1)获得的降解后的肺炎链球菌荚膜多糖原液中加入缓冲液和注射用水，再加入氧化剂进行活化；所述氧化剂能将邻二羟基氧化为醛。


5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述氧化剂为高碘酸钠、高碘酸钾或高碘酸。


6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸缓冲液，HEPES，MOPS或醋酸-醋酸钠缓冲液；所述缓冲液的浓度为10-100mM，pH值为3-7。


7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，加入缓冲液和注射用水后，肺炎链球菌荚膜多糖的终浓度为1-3g/L。


8.如权利要求4-7任一所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述活化是向加入缓冲液和注射用水后的肺炎链球菌荚膜多糖溶液中加入0.1-0.5摩尔当量的氧化剂。


9.如权利要求4-8任一所述的制备方法，其特征在于，所述加入氧化剂进行活化的条件为：温度2-8℃，4-24小时，pH值为3.0-7.2。


10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述加入氧化剂进行活化的条件为：温度2-8℃，4-16小时。


11.如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述加入氧化剂进行活化的条件为：温度2-8℃，4-8小时，pH值为4.0-6.5。


12.如权利要求4-10任一所述的制备方法，其特征在于，活化后的多糖其活化度为1-25，优选5-15。


13.如权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)活化结束后，经超滤、除菌过滤后得到纯化了的活化后的肺炎链球菌荚膜多糖。


14.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)的冻干为将活化后的肺炎链球菌荚膜多糖与赋形剂按照质量比1:10-50混合后冻干，所述赋形剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇等非还原性中性化学物质。


15.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)将冻干后的活化肺炎链球菌荚膜多糖用有机溶剂复溶，载体蛋白用相同的有机溶剂复溶或溶解；所述有机溶剂为DMF、DMSO；复溶前有机溶剂的浓度50％-100％。


16.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)制得的活化后的肺炎链球菌荚膜多糖使用乙醇沉淀制备活化多糖沉淀物，用有机溶剂溶解活化的多糖沉淀物，可直接进入步骤(4)，与载体蛋白结合并封闭。


17.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于，复溶的肺炎链球菌荚膜多糖与复溶或溶解后的载体蛋白按照质量比1:2-2:1混合，彻底溶解后，加入1.0-1.5摩尔当量氰基硼氢化钠起始结合，并在23±2℃孵育12-48小时。


18.如权利要求17所述的制备方法，其特征在于，结合反应体系中，肺炎链球菌荚膜多糖的终浓度为0.5-4g/L。


19.如权利要求17所述的制备方法，其特征在于，结合反应通过添加1.0-1.5摩尔当量氰基硼氢化钠以封闭未反应的醛基而终止，此封闭反应继续在23±2℃持续18±6...

【专利技术属性】
技术研发人员：王新立，韩振，王治伟，吕哲，林纪胜，高强，王见冬，韩星，雷永红，郭德乾，隋晓斌，
申请(专利权)人：北京科兴中维生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11