一种青春双歧杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescents)菌株ZJ2，该菌株是从健康百岁长寿老人粪便中分离筛选而得，且已于2019年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.18901。该菌株对酸和胆盐具有良好的耐受作用，培养原液以及5倍浓缩液对小鼠无毒性作用，青春双歧杆菌ZJ2对外源加入的0.1mg/ml胆固醇孵育48h后胆固醇的降解率29.15％，对大肠杆菌ATCC33849、沙门氏菌ATCC14028、绿脓杆菌ATCC9027、肺炎克雷伯杆菌ATCC700603、金黄色葡萄球菌NCTC8325、单增李斯特菌ATCC19115均有一定的抑制效果以及对菌株ZJ2对万古霉素(Van)、红霉素(Ery)以及四环素(Tet)敏感，同时青春双歧杆菌菌株ZJ2具有良好的抗氧化能力。

【技术实现步骤摘要】
一种青春双歧杆菌菌株及其应用
本专利技术属于益生菌
，具体涉及一种青春双歧杆菌菌株。
技术介绍
肠道作为人体最庞大、最复杂的微生态系统，在维持机体正常免疫防御功能中发挥着极其重要的作用，肠道菌群本身及其代谢产物越来越受到科学家们的重视。人体肠道中定植着大量的微生物。肠道微生物与人体健康与疾病之间存在着十分密切的关系。肠道微生物可分为有益菌、中性菌和有害菌3大类。有益菌，主要以各种双歧杆菌、乳酸杆菌为代表的益生菌群体，是人体健康不可缺少的要素，可以合成各种维生素，发挥着参与食物的消化，促进肠道蠕动，抑制致病菌群的生长，分解有害、有毒物质等重要作用。有害菌，即能够产生致癌物等有害物质，或者影响免疫系统的功能的致病菌。中性菌，即具有双重作用的细菌，如大肠杆菌、肠球菌等，在正常情况下对健康有益，一旦肠道内的益生菌屏障受到破坏，肠道通透性增加，中性菌就会加入有害菌的大军，威胁人体健康。益生菌是一类可以改善人体肠内微生态的平衡，并对机体有正面效益的活性微生物，能够定植于人体肠道、生殖系统内，具有缓解不耐乳糖症状、预防生殖系统感染、增强人体免疫力、降胆固醇、帮助吸收营养成分、增强植物新陈代谢等有益作用。人体内常见的益生菌主要有嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、酪酸梭菌、酵母菌和放线菌等，其中双歧杆菌是一种专性厌氧的革兰氏阳性细菌，不运动，形态多变，呈现弯曲杆状、L、V或Y形等多种形态。细胞呈杆状，其末端分叉，故命名为双歧杆菌。双歧杆菌主要寄居在人体的胃肠道内，分布在胃肠的数量及种类会随年龄阶段的增长而减少，分布最多的是母乳婴儿时期，是健康者肠道内的优势菌种，其种类和数量随年龄呈动态变化，而且其改变与机体内许多生理病理变化关系密切。随着年龄增加，有害菌的数量增多，产生的毒素加速肠道老化和免疫力下降等因素，正常老年人肠道有益菌(如双歧杆菌)的丰度降低。然而有文章报道发现健康百岁老人肠道内的双歧杆菌种类丰富，研究者对这些百岁老人进行体检发现：他们体内的双歧杆菌等有益菌占比率明显高于普通老人，相当于青少年水平。通过多年考察，研究者们认为这些百岁老人与其所在的良好的自然生态环境和生活习惯密不可分。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种青春双歧杆菌菌株，克服了现有技术的不足，在长寿老人的粪便中分离筛选出了青春双歧杆菌菌株ZJ2，并对该菌株的环境耐受情况、抑菌作用、自由基的清除能力和还原力大小进行试验。为解决上述问题，本专利技术所采取的技术方案如下：一种青春双歧杆菌菌株，所述菌株由健康百岁长寿老人的粪便中分离筛选得到的，命名为青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.18901。本专利技术还保护了一种活性成分中含有上述青春双歧杆菌菌株ZJ2的菌剂。本专利技术还保护了一种成分中含有上述青春双歧杆菌菌株ZJ2的菌剂的组合物。本专利技术还保护了上述组合物或者菌剂在食品中的应用。本专利技术还保护了上述组合物或者菌剂在保健产品中的应用。本专利技术最后还保护了上述组合物或者菌剂在抑制胃肠道致病菌药物中的应用。青春双歧杆菌ZJ2菌株在pH3.0环境中孵育2h后仍能存活，对0.3％胆盐环境也有一定的耐受；对青春双歧杆菌ZJ2对大肠杆菌ATCC33849、沙门氏菌ATCC14028、绿脓杆菌ATCC9027、肺炎克雷伯杆菌ATCC700603、金黄色葡萄球菌NCTC8325、单增李斯特菌ATCC19115均有抑制效果；对外源加入0.1mg/ml胆固醇孵育48h后胆固醇的降解率为29.15％；且对DPPH自由基和ABTS+自由基有良好的清除能力，有良好的还原力并对亚麻酸过氧化有一定抑制作用。本专利技术与现有技术相比较，具有以下有益效果：本专利技术在长寿老人的粪便中分离筛选出了青春双歧杆菌菌株ZJ2，并对该菌株的环境耐受情况、抑菌作用、自由基的清除能力和还原力大小进行试验；经过试验发现，该菌株对胃肠道内的致病菌具有一定的抑制作用，有助于恢复胃肠道微生物菌群的稳定和协调。附图说明图1为青春双歧杆菌ZJ2菌株菌落示意图。图2为青春双歧杆菌ZJ2菌株与相关种的16SrDNA序列系统发育树。图3为青春双歧杆菌ZJ2菌株对酸的耐受情况的柱状统计图。图4为青春双歧杆菌ZJ2菌株对胆盐的耐受情况的柱状统计图。图5为青春双歧杆菌ZJ2菌株对几种病原菌的抑菌作用效果图。图6为青春双歧杆菌ZJ2菌株对DPPH自由基的清除能力的柱状统计图。图7为青春双歧杆菌ZJ2菌株的还原力大小的柱状统计图。图8为青春双歧杆菌ZJ2菌株对亚麻酸过氧化的抑制作用的柱状统计图。图9为青春双歧杆菌ZJ2菌株对ABTS+自由基的清除能力的柱状统计图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1分离筛选鉴定在厌氧工作站里，取安徽省亳州市谯城区的健康百岁长寿老人的粪便样品2g，用无菌生理盐水进行梯度稀释，分别涂布于BL、BBL、BS、TPY及MRS-L等固体培养基，于37℃厌氧培养24-48h后选取菌落数量适中的平板，挑取乳白色圆形菌落进行划线分离2-3次，得到纯化的单菌落。将分离得到的菌株分别进行液体培养，所得到的菌体用于抽取菌株的基因组DNA，利用设计的引物扩增其基因片段，将扩增的16SrDNA基因片段测序，测序结果经NCBI数据库Blast比对，初步判断菌株的种属分类。根据《益生菌类保健食品申报与审评规定(试行)》，判定分离筛选出的菌株属于益生菌类保健品的菌株，将筛选纯化后的菌株接种于TPY肉汤中，菌液与50％的甘油(生理盐水配置)等体积混合，保存于-80℃冰箱备用。⑴定性鉴定按照《伯杰细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》，并结合之前观察的菌株形态特征和生理生化特性，对分离得到的ZJ2菌株进行初步鉴定，可初步判断该菌株归属于双歧杆菌。该菌株为厌氧的革兰氏阳性细菌，菌株细胞长而稍弯曲，有多种形态，如Y型、V型、长杆状、弯曲弧状。该菌株菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂白色、具有柔软的质地，如图1所示。该菌株的生理生化特征如表1所示。表1ZJ2菌株API20鉴定结果符号说明：“+”，阳性；“-”，阴性。使用细菌基因组提取试剂盒提取基因组DNA，PCR扩增目标序列后进行测序，将测序结果在数据库中进行序列比对，获得与其相似性较高的其他菌株的基因序列，详见序列表。使用MEGA7.0软件构建系统发育树，如图2所示，确定该菌的种属分类地位，由进化树图可看出ZJ2菌株定位在青春双岐杆菌。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青春双歧杆菌菌株，其特征在于：所述菌株由健康百岁长寿老人的粪便中分离筛选得到的，命名为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.18901。/n

【技术特征摘要】
1.一种青春双歧杆菌菌株，其特征在于：所述菌株由健康百岁长寿老人的粪便中分离筛选得到的，命名为青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCCNO.18901。


2.一种菌剂，其特征在于：所述菌剂的活性成分中含有权利要求1所述青春双歧...

【专利技术属性】
技术研发人员：李威，张丁，王玮，金泽宇，孙宝林，郭建，
申请(专利权)人：卓源健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34