抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术公开的抗体包括SEQ ID NO.1所示的重链可变区和SEQ IDNO.2所示的轻链可变区。该抗体能够特异性结合人穹窿体蛋白，具有良好的特异性和较高的亲和力，可以用于诊断以穹窿体蛋白为标志物的相关疾病以及用于检测人穹窿体蛋白。

【技术实现步骤摘要】
抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用。
技术介绍
肿瘤多药耐药(MDR)是近年来肿瘤治疗研究的困扰之一，其产生机制非常错综复杂。随着对非P-糖蛋白介导MDR机制研究的不断深入，肺耐药相关蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)被证实在DMR中发挥着重要作用，有望成为一种新的治疗靶点。LRP基因已由Scheper等克隆成功，其基因与褐鼠MVP氨基酸87％的序列相同，由此推断LRP为人的穹窿体蛋白。穹窿体蛋白，又称MVP。经研究在一种人非小细胞肺癌的细胞株中筛选出耐药细胞株，其氨基酸系列有87.7％与穹窿体蛋白(majorvaμltprotein，MVP)具有同源，所以MVP又称为肺耐药相关蛋白。穹窿是一种重要的细胞器，广泛分布于多物种，在真核生物中高度保守，大多位于胞质，5％位于核孔附近与核膜相连。通过聚焦显微镜观察到不同细胞类型中LRP独特的定位于胞浆内，呈粗糙颗粒状或囊泡状，核膜孔复合体内并未见。肿瘤的多药耐药(Mμlti-drugresistance，MDR)现象是困扰临床治疗的一大难题，在肺耐药蛋白被证实为MVP后，穹窿体与MDR的关系被广泛研究。很多研究证明，MDR细胞中MVP的表达强度与耐药程度呈正相关，MVP的蛋白水平有不同程度的上调。同时通过对86例急性淋巴细胞白血病的统计，MVP在复发者中高表达，阳性率为85.7％。因为LRP与肿瘤细胞多药耐药的相关性，国内外研究均报道了通过分析MVP的表达与肿瘤患者的生物学行为和预后指标的关系，将MVP作为治疗和预后评判指标。肺耐药相关蛋白主要通过阻止药物进入胞核或使入胞质的药物进入运输囊泡，以胞吐方式排出到胞外以降低细胞内药物浓度而产生耐药。MVP若高表达则提示预后不良。抗MVP单克隆抗体将有利于癌症治疗和预后的诊断并使癌症的诊断独立于病因学之外，因此更加简便。但目前，缺乏针对MVP的单克隆抗体。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用，本专利技术提供的抗人穹窿体蛋白的抗体能够特异性结合人穹窿体蛋白，具有良好的特异性和较高的亲和力，可以用于诊断以穹窿体蛋白为标志物的相关疾病以及用于检测人穹窿体蛋白。本专利技术是这样实现的：一方面，本专利技术提供一种抗人穹窿体蛋白的抗体或其抗原结合片段，该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术提供的抗人穹窿体蛋白的抗体具有如上所述氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区，该抗人穹窿体蛋白的抗体可特异性识别人穹窿体蛋白，不仅可用于检测人穹窿体蛋白，还作为诊断试剂，用于诊断以穹窿体蛋白为标志物的相关疾病例如肿瘤等，该抗体对人穹窿体蛋白具有较高的特异性和亲和力。如本专利技术所用术语“抗体”，是指能够经由至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点特异性结合到标靶的免疫球蛋白分子。本专利技术所使用的“抗体”不仅包括完整的(即全长的)抗体，而且还包括其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、其变异体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及任何其他包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的修改配置，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体及共价修饰的抗体等。通常，完整或全长的抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链含有重链可变区(VH)和第一、第二及第三恒定区(CH1、CH2及CH3)。每个轻链含有轻链可变区(VL)和恒定区(CL)。全长的抗体可以是任何种类的抗体，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或上述的子类)，但抗体不需要属于任何特定的类别。根据重链的恒定区的抗体氨基酸序列，可以将抗体分为不同的类别。通常，抗体有五种主要的类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，而且这些类别中有几个可以再被进一步区分成子类(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同抗体类别的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ、以及μ。不同类别的抗体的子单元结构和三维结构是公知的。可选的，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗原结合片段选自所述抗体的Fab’、Fab、F(ab’)2、scFv和Fv中的任意一种。如本专利技术所用术语“抗原结合片段”，是指负责结合抗原(如人穹窿体蛋白或含有人穹窿体蛋白的复合物)的完整抗体分子的一部分或区域。其可以包含重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)或上述两者，通常为Fab’、Fab、F(ab’)2、scFv和Fv等结构形式，这些结构对本领域技术人员来说是公知的。可选的，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体的恒定区选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区。可选的，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体的恒定区的种属来源为小鼠、大鼠、牛、马、养、兔或狗。可选的，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体的恒定区的种属来源为小鼠。需要说明的是，本领域技术人员可以根据需要对本专利技术提供的抗体进行各种改造例如人源化改造，亲和力改造等，无论何种形式的改造，只要一本专利技术提供的抗体为基础进行改造得到的抗体只要具有本专利技术前述的可变区序列或其中的互补决定区即属于本专利技术的保护范围。另一方面，本专利技术还提供如上所述的抗体或其抗原结合片段在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤的诊断标志物为人穹窿体蛋白。以人穹窿体蛋白为标志物的肿瘤包括：肺腺癌、乳腺癌等。另一方面，本专利技术还提供含有如上所述的抗体或其抗原结合片段的免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。另一方面，本专利技术还提供一种检测试剂盒，所述试剂盒含有如上所述的抗体或其抗原结合片段。可选的，本专利技术的一些实施方案中，当本专利技术提供的抗体或其抗原结合片段作为检测试剂检测人穹窿体蛋白时，该抗体或其抗原结合片段具有可被检测的检测标记。检测标记可选自酶、荧光材料、配体、发光材料、微粒、氧化还原分子和放射性同位素，但不限于此。当酶用作检测标记时，该酶包括但不限于β-葡萄糖醛酸酶、β-D-葡糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶、己糖激酶、鸟苷二磷酸酶(GDPase)、核糖核酸酶、葡萄糖氧化酶、荧光素酶、磷酸果糖激酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸转氨酶、磷酸烯醇丙酮酸脱羧酶和β-内酰胺酶等。当荧光材料用作检测标记时，该荧光材料包括但不限于荧光素、异硫氰酸酯、罗丹明、藻红蛋白、藻青蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛和荧光胺等。当配体用作检测标记时，该配体包括但不限于生物素衍生物等。当发光材料用作检测标记时，该发光材料包括但不限于吖啶酯、萤光素和萤光素酶等。当微粒用作检测标记时，该微粒包括但不限于胶体金、有色乳胶等。当氧化还原分子用作检测标记时，该氧化还原分子包括但不限于二茂铁、钌络合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗人穹窿体蛋白的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗人穹窿体蛋白的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，所述抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自所述抗体的Fab’、Fab、F(ab’)2、scFv和Fv中的任意一种；
优选地，所述抗体的恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区；
优选地，所述抗体的恒定区的种属来源为小鼠、大鼠、牛、马、养、兔或狗。


3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的恒定区的种属来源为小鼠。


4.权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述肿瘤的诊断标志物为...

【专利技术属性】
技术研发人员：付康，赵逸堃，李胡丹，
申请(专利权)人：生工生物工程上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31