一种含Poly结构序列的测序方法技术

本发明专利技术提供一种含Poly结构序列的测序方法，属于基因治疗测序技术领域。所述测序方法包括：根据目标序列确定特异性引物；基于特异性引物对目标序列进行PCR扩增；采用凝胶电泳确定PCR扩增结果后，通过割胶纯化并截取特异性片段；对特异性片段基于测序程序进行测序并得到测序数据；其中扩增循环内解旋时间为30秒。本发明专利技术所提供的测序方法在不把目的基因载入质粒的情况下通过改变测序扩增梯度扩增程序来降低测序产生的滑移现象，从而提高一代测序结果的准确性，相比与现有方法操作更加便捷，降低实验成本和时间，对于短片段串联重复序列的Sanger测序研究，质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于braf基因测序，尤其涉及一种含poly结构序列的测序方法。

技术介绍

1、sanger测序又称第一代dna测序技术，其原理是将被荧光标记的ddntp掺入到dntp中，由于ddntp随机掺入，pcr产物从引物之后的第一个碱基开始，每一个位置都有可能是ddntp。由于ddntp缺乏链延伸所需要的3'oh，链的延伸就选择性地在g、a、t或c处终止。这种pcr产物与普通pcr产物不同，不能形成一条电泳带，而是一组长度相差一个碱基的成百上千种片段。它们具有共同的起始点，终止在不同的核苷酸上，每一个碱基都有相同的概率被终止。将不同大小的片段进行毛细管电泳，通过对荧光信号的采集和拼接，最终获得目的片段的序列。

2、复制滑动机制，是目前研究比较多的短片段串联重复序列产生机制。在dna复制过程中，滑动复制滞后链的复制会先形成冈崎片段，缺口再连接。经历dna聚合酶的去组装与再组装。期间新合成的dna链与模板链会随dna聚合酶脱离，此时模板链或滞后链形成一个loop环，就会导致短片段串联重复序列拷贝数的减少或增加。

3、复制滑动机制在生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含Poly结构序列的测序方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述含Poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述Poly结构包括G/Crich、G/C Cluster、Poly A、Poly T和Poly C中的任意一种或几种。

3.如权利要求1所述含Poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述特异性引物在靶位点与所述Poly结构之间的距离为150dp-200dp。

4.如权利要求1所述含Poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述扩增程序包括：

5.如权利要求1所述含Poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述PCR扩增采用的...

【技术特征摘要】

1.一种含poly结构序列的测序方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述含poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述poly结构包括g/crich、g/c cluster、poly a、poly t和poly c中的任意一种或几种。

3.如权利要求1所述含poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述特异性引物在靶位点与所述poly结构之间的距离为150dp-200dp。

4.如权利要求1所述含poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述扩增程序包括：

5.如权利要求1所述含poly结构序列的测序方法，其特征在于，所述pcr扩增采用的反应体系包括：

6.如权利要求5所述含...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永琦，曹帅领，
申请(专利权)人：生工生物工程上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：