多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用。该多肽能够特异性地与SARS‑CoV‑2的刺突蛋白结合，且多肽与刺突蛋白的特异性结合能够被SARS‑CoV‑2的中和抗体竞争性抑制。尤其是SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：5所示的多肽，与SARS‑CoV‑2的刺突蛋白的结合能够被中和抗体竞争性地降低或抑制，从而能够用于检测和表征待测样本中是否存在目标抗体。

【技术实现步骤摘要】
多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用
本专利技术涉及抗体筛选领域，具体而言，涉及一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用。
技术介绍
为控制或阻断新型冠状病毒“SARS-CoV-2”(SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2)传播，急需要开发出相应的遏制新冠病毒传播的药物或检测相关试剂，尤其是多肽类的相关产品。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用，为遏制新冠病毒提供新的检测手段。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种多肽，该多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，且多肽与刺突蛋白的结合能够被SARS-CoV-2的中和抗体竞争性抑制。进一步地，多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合。进一步地，多肽选自SEQIDNO：1至SEQIDNO：5中的任意一条或多条；优选地，多肽为修饰后的肽段；优选地，修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；优选地，化学基团修饰为PEG修饰；优选地，PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；优选地，PEG修饰的位点选自多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；优选地，PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；优选地，亲水性氨基酸修饰为在多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；优选地，半胱氨酸修饰为在多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；更优选地，在肽链中间添加半胱氨酸包括在肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于肽链的中间。根据本专利技术的第二个方面，提供了一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂，该试剂包括上述多肽。根据本专利技术的第三个方面，提供了一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒，该试剂盒包括检测试剂或检测芯片，检测试剂包括上述任一种多肽，或者检测芯片上设置有上述任一种多肽。根据本专利技术的第四个方面，提供了一种多肽产品，多肽产品包括上述任一种多肽。进一步地，多肽产品还包括多肽稳定剂；优选地，多肽稳定剂包括150～180mMNaCl、100～140mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。根据本专利技术的第五个方面，提供了一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，试剂盒包括检测试剂或检测芯片，检测试剂包括上述任一种多肽，或者检测芯片上设置有上述任一种多肽。根据本专利技术的第六个方面，提供了上述任一种在制备检测SARS-CoV-2或SARS-CoV-2的中和抗体的试剂盒中的应用。根据本专利技术的第七个方面，提供了一种检测SARS-CoV-2的中和抗体的方法，该方法包括：将待测样本与荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白进行共孵育预处理，得到预处理样本；将预处理样本、荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白分别与上述任一种多肽进行孵育；检测并判断预处理样本的多肽的荧光信号强度与荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白的多肽的荧光信号强度之间的差值是否满足预设阈值；输出判断结果。进一步地，预设阈值通过以下方法计算得到：计算上述任一种多肽，优选SEQIDNO：1和SEQIDNO:4所示的两种多肽对应特征的荧光信号强度在各阴性处理样本中和在荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白中的差值，并计算差值的平均值，记为差异均值；选择所有阴性处理样本对应的差异均值中的最大值作为判断阈值；其中，阴性处理样本为阴性样本与荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白进行共孵育预处理后的样本；优选地，待测样本和阴性样本均为血清样本；优选地，在计算差值之前，将多肽对应特征的荧光信号强度转换为对数值，更优选转换为log10值进行计算。进一步地，在最佳样本浓度下进行共孵育预处理；优选地，最佳样本浓度通过如下方式确定：采用多个不同浓度的阴性样本和多个不同浓度的阳性样本分别与荧光标记的SARS-CoV-2的刺突蛋白进行共孵育预处理，得到不同浓度下的阴性处理样本和阳性处理样本；利用多肽芯片技术对阴性处理样本和阳性处理样本进行检测，获得在不同浓度下的检测结果；选择不同浓度下的检测结果中，荧光信号强度在阴性处理样本和阳性处理样本中的差异最显著的多肽所对应的浓度，即为最佳样本浓度；优选地，在最佳样本浓度下计算判断阈值；更优选，将荧光信号强度在阴性处理样本和阳性处理样本中的差异最显著的多肽记为最佳多肽，在最佳样本浓度下利用最佳多肽计算得到判断阈值；进一步优选，最佳样本浓度为1:5000的稀释倍数，最佳多肽为SEQIDNO：1和SEQIDNO:4所示的多肽。进一步地，上述多肽设置在多肽芯片上。应用本专利技术的技术方案，本申请中所筛选的多肽均能与S蛋白的特异性结合，尤其是SEQIDNO：1至SEQIDNO：5所示的多肽，且这种结合能够被中和抗体竞争性地降低或抑制，从而能够用于检测和表征待测样本中是否存在目标抗体。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1示出了本申请优选实施例中所提供的用于检测新冠病毒S-RBD抗体的肽段的筛选方法的流程示意图；图2示出了根据本专利技术的实施例3中FDLFYVEKG肽段在新冠中和抗体阳性样和阴性样本检测结果中存在的信号值差异；图3示出了根据本专利技术的实施例3中的PFGDLFYLG肽段在新冠中和抗体阳性样本和阴性样本检测结果中存在的信号值差异。图4示出了根据本专利技术的实施例3中的GANEVFVLF肽段在新冠中和抗体阳性样本和阴性样本检测结果中存在的信号值差异。具体实施方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。新冠肺炎由新型冠状病毒(本申请中指SARS-CoV-2)引起。新型冠状病毒属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，直径60～140nm。具有5个必需基因，分别针对核蛋白(N)、病毒包膜(E)、基质蛋白(M)和刺突蛋白(S)4种结构蛋白及RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)。核蛋白(N)包裹RNA基因组构成核衣壳，外面围绕着病毒包膜(E)，病毒包膜包埋有基质蛋白(M)和刺突蛋白(S)等蛋白。刺突蛋白通过结合血管紧张素转化酶2(ACE-2)进入细胞。体外分离培养时，新型冠状病毒96个小时左右即可在人呼吸道上皮细胞内发现，而在VeroE6和Huh-7细胞系中分离培养约需4～6天。冠状病毒对紫外线和热敏感，56℃30分钟、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒，氯己定不能有效灭本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，且所述多肽与所述刺突蛋白的结合能够被SARS-CoV-2的中和抗体竞争性抑制。/n

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，且所述多肽与所述刺突蛋白的结合能够被SARS-CoV-2的中和抗体竞争性抑制。


2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合。


3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽选自SEQIDNO：1至SEQIDNO：5中的任意一条或多条；
优选地，所述多肽为修饰后的肽段；
优选地，所述修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；
优选地，所述化学基团修饰为PEG修饰；
优选地，所述PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；
优选地，所述PEG修饰的位点选自所述多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；
优选地，所述PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；
优选地，所述氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；
优选地，所述亲水性氨基酸修饰为在所述多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，所述亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，所述1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；
优选地，所述半胱氨酸修饰为在所述多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；
更优选地，在所述肽链中间添加半胱氨酸包括在所述肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于所述肽链的中间。


4.一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂，其特征在于，所述试剂包括权利要求1至3中任一项所述的多肽。


5.一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测试剂或检测芯片，所述检测试剂包括权利要求1至3中任一项所述的多肽，或者所述检测芯片上设置有权利要求1至3中任一项所述的多肽。


6.一种多肽产品，其特征在于，所述多肽产品包括权利要求1至3中任一项所述的多肽。


7.根据权利要求6所述的多肽产品，其特征在于，所述多肽产品还包括多肽稳定剂；
优选地，所述多肽稳定剂包括150～180mMNaCl、100～140mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。


8.一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测试剂或检测芯片，所述检测试剂包括权利要求1至3中任一项所述的多肽，或者所述检测芯片上设置有权利要求1至3中任一项所述的多肽。

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【专利技术属性】
技术研发人员：王晖，郭宝森，刘颖，郑汉城，李丹妮，贡卓琳，
申请(专利权)人：珠海碳云智能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44