一种甜叶菊的分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种甜叶菊的分离纯化方法，用于提取甜叶菊基础物质。所述甜叶菊的分离纯化方法是对甜叶菊进行反相色谱、超临界流体色谱分离纯化，以提取所述化合物。

【技术实现步骤摘要】
一种甜叶菊的分离纯化方法
本专利技术涉及天然产物分离纯化领域，尤其涉及从一种甜叶菊的分离纯化方法及获得的甜叶菊基础物质。
技术介绍
甜叶菊(SteviarebaudianaBertoni，S.rebaudiana)，又名甜菊叶，系菊科甜叶菊属多年生植物。甜叶菊原产于南美巴拉圭的东北高地，1977年，我国从日本引进甜叶菊并进行大规模种植。由于甜叶菊中的二萜糖苷类物质具有高甜度、不易被吸收，低热量的特点，所以甜叶菊是一种理想的甜味剂，可用于预防肥胖症和糖尿病。除了作为甜味剂，药理研究表明甜叶菊具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血压、抑菌和抗病毒等诸多活性。为了进一步阐明甜叶菊的药理作用，对其物质基础进行研究至关重要。甜叶菊物质基础研究主要基于对其化学成分的分离，目前，已知的甜叶菊中的化学成分包括甜菊糖苷类、黄酮类、酚酸类和挥发油等。由于甜叶菊组成复杂，不同种类成分含量差别大，同类成分结构相似，增大了分离难度。基于现代分离技术开展系统的分离纯化工作，对于进一步了解甜叶菊的化学组成，开发利用甜叶菊资源有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种甜叶菊的分离纯化方法，用于分离提取甜叶菊中的化合物，以为甜叶菊的开发提供基础。通过本申请所述分离纯化方法获得了4种新的化合物，可以用于甜叶菊的物质基础研，进而期待在在食品行业或医药行业中获得应用。根据本专利技术的一方面，提供一种甜叶菊的分离纯化方法。所述甜叶菊的分离纯化方法是对甜叶菊进行反相色谱、超临界流体色谱分离纯化，以提取甜叶菊基础物质。<br>在一些实施例中，所述甜叶菊的分离纯化方法包括步骤：以重结晶法处理甜叶菊母液糖，获得母液糖粗品；对所述母液糖粗品进行反相色谱分离，以获得多个粗组分；对粗组分进行超临界流体色谱分离，以获得多个精细组分；以及，对精细组分进行反相色谱分离，以获得甜叶菊基础物质。在一些实施例中，在所述重结晶处理甜叶菊母液糖的步骤中，以无水甲醇作为溶剂对所述甜叶菊母液糖进行重结晶。在一些实施例中，所述甜叶菊母液糖与所述无水甲醇的料液比为：每1升无水甲醇中加入120g甜叶菊母液糖。在一些实施例中，在所述反相色谱分离步骤中，采用十八烷基键合固定相进行分离；流动相为甲醇与水，或者乙腈与水。在一些实施例中，在对粗组分进行超临界流体色谱分离的步骤中，固定相为C4，流动相为超临界CO2，甲醇为改性剂，梯度洗脱。在一些实施例中，所述甜叶菊基础物质具有以下式i-1至i-4所示的结构：其中，上述化合物的命名为：式i-1：2,7,10,10-tetramethyl-1-oxaspiro[4.5]deca-3,6-dien-8-one；式i-2：(E)-4-(7-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-1a,2a,5-trimethyldecahydronaphtho[2,3-b]oxiren-2-yl)but-3-en-2-one；式i-3：5-((4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-((3,4,5,6-tetrahydroxytetrahydro-2H-pyran-2-yl)methoxy)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)oxy)-5,7,7-trimethyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-inden-1-one；式i-4：6-(4-allyl-2-methoxyphenoxy)-5-amino-2-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4-diol(i-4)在一些实施例中，所述甜叶菊中化合分离纯化方法具体包括以下步骤：步骤1采取重结晶法处理甜叶菊母液糖，称取甜叶菊母液糖置于干燥洁净的容器，加入无水甲醇，超声搅拌溶解，室温下静置24h，过滤后得母液糖粗品。步骤2将母液糖粗品用纯水溶解，采用反相色谱法，使用C18固定相分离，甲醇和水为流动相，台阶梯度条件洗脱，收集三段组分，依次记作Fr.1-Fr.3。步骤3将Fr.1以纯甲醇溶解，采用超临界流体色谱分离，固定相为C4，流动相为超临界CO2，甲醇为改性剂，梯度洗脱。按峰收集，得到5个组分，记作Fr.1-1～Fr.1-5。步骤4将Fr.1-1用纯水溶解，采用反相色谱法，使用C18固定相分离，流动相是甲醇和水，30％甲醇等度洗脱，得到化合物i-1。步骤5将Fr.1-2用纯水溶解，采用反相色谱法，使用C18固定相分离，流动相是甲醇和水，45％甲醇等度洗脱，得到化合物i-2和Fr.1-2-1。步骤6将Fr.1-3用纯水溶解，采用反相色谱法，使用C18固定相分离，流动相是乙腈和水，18％乙腈等度洗脱，得到化合物i-3。步骤7将Fr.1-2-1用纯水溶解，采用反相色谱法，使用C18固定相分离，流动相是乙腈和水，28％乙腈等度洗脱，得到化合物i-4。甜叶菊作为甜味剂被广泛用于饮品、奶制品、糕点和糖果等食品行业。同时，甜叶菊具有多种药理活性，在新药开发方面有一定的前景。因此，基于本申请的分离纯化方法发现的甜叶菊中的上述新化合物，能够对深入了解甜叶菊化学组成，开发利用甜叶菊资源有重要意义。在本专利技术中，对经重结晶的甜叶菊母液进行反相色谱分离纯化，以获得了4种未记载的化合物，并进一步采用1HNMR、13CNMR、二维核磁谱、高分辨质谱对获得的化合物，进行结构鉴定，推导出了化合物的分子结构，为甜叶菊的质量控制和商业开发提供一定的物质基础。附图说明图1母液糖粗品的反相制备色谱分离；图2Fr.1的超临界流体色谱制备图；图3Fr.1-1～Fr.1-3反相制备图；图4化合物i-1的1HNMR图；图5化合物i-1的13CNMR图；图6化合物i-1的COSY图；图7化合物i-1的HMQC图；图8化合物i-1的HMBC图；图9化合物i-2的1HNMR图；图10化合物i-2的13CNMR图；图11化合物i-2的COSY图；图12化合物i-2的HMQC图；图13化合物i-2的HMBC图；图14化合物i-2的NOESY图图15化合物i-3的1HNMR图；图16化合物i-3的13CNMR图；图17化合物i-3的COSY图；图18化合物i-3的HMQC图；图19化合物i-3的HMBC图1(化学位移δ1.0～7.6)；图20化合物i-3的HMBC图2(化学位移δ3.1～4.6)；图21化合物i-3的HMBC图3(化学位移δ0.9～2.6)；图22化合物i-4的1HNMR图；图23化合物i-4的13CNMR图；图24化合物i-4的COSY图；图25化合物i-4的HMQC图；图26化合物i-4的HMBC图1(化学位移δ3.0～7.4)；图27化合物i-4的HMBC图2(化学位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甜叶菊的分离纯化方法，用于提取甜叶菊基础物质，其特征在于，所述甜叶菊的分离纯化方法是对甜叶菊进行反相色谱、超临界流体色谱分离纯化，以提取所述甜叶菊基础物质。/n

【技术特征摘要】
1.一种甜叶菊的分离纯化方法，用于提取甜叶菊基础物质，其特征在于，所述甜叶菊的分离纯化方法是对甜叶菊进行反相色谱、超临界流体色谱分离纯化，以提取所述甜叶菊基础物质。


2.如权利要求1所述的甜叶菊的分离纯化方法，其特征在于，所述甜叶菊的分离纯化方法包括步骤：
以重结晶法处理甜叶菊母液糖，获得母液糖粗品；
对所述母液糖粗品进行反相色谱分离，以获得多个粗组分；
对粗组分进行超临界流体色谱分离，以获得多个精细组分；以及，
对精细组分进行反相色谱分离，以获得甜叶菊基础物质。


3.如权利要求2所述的甜叶菊的分离纯化方法，其特征在于，在所述重结晶处理甜叶菊母液糖的步骤中，以无水甲醇作为溶剂对所述甜叶菊母液糖进行重结晶。


4.如权利要求3所述的甜叶菊的分...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅青，金郁，柯燕雄，张欢欢，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31