一种苯磷硫胺的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种苯磷硫胺的检测方法，该检测方法包含以下步骤：(1)配制对照品和供试品溶液；(2)检测：采用高效液相色谱法，流动相A为0.01％～1％的酸性缓冲液，流动相B为有机溶剂，洗脱梯度流动相A以体积比计，0分钟：15％

【技术实现步骤摘要】
一种苯磷硫胺的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种苯磷硫胺的检测方法，尤其涉及一种可以准确检测苯磷硫胺纯度的检测方法。

技术介绍

[0002]苯磷硫胺的化学名称为：S
‑
{(Z)
‑2‑
[(4
‑
氨基
‑2‑
甲基嘧啶
‑5‑
基)甲基
‑
甲酰基氨基]‑5‑
膦酰氧基戊
‑2‑
烯
‑3‑
基}苯甲酸硫代酯；分子式为：C
19
H
23
N4O6PS；分子量为：466.45；结构式如下所示：
[0003][0004]由于苯磷硫胺具有酸碱两性性质，且极性较大，目前对苯磷硫胺质量控制均使用离子对液相体系，在使用离子对试剂后，由于基线难以平衡且具有较多梯度峰，使样品的纯度与真实值相比不一致，存在峰型、基线、鬼峰，杂质无法在LC
‑
MS上进行确证等问题，均不利于质量控制，严重影响苯磷硫胺的质量和服用安全。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术旨在提供一种专属性、灵敏度、准确度及重复性均良好的苯磷硫胺的检测方法。
[0006]技术方案：本专利技术的苯磷硫胺的检测方法，其特征在于，所述检测方法包含以下步骤：
[0007](1)配制对照品和供试品溶液；
[0008](2)检测：采用高效液相色谱法，流动相A为0.01％～1％的酸性缓冲液，流动相B为有机溶剂，洗脱梯度中流动相A以体积比计，0分钟：15％
→
15％，0～12分钟：15％
→
15％，12～35分钟：15％
→
37％，35～50分钟：37％
→
37％，50～60分钟：37％
→
15％；
[0009](3)计算步骤(2)的检测图谱中苯磷硫胺的纯度。
[0010]本专利技术采用反反相模式的反相高效液相色谱法进行检测，检测器选用二极管阵列检测器(DAD)，可以有效分离供试品中10个相关物质色谱峰。
[0011]进一步地，步骤(1)中所述供试品溶液的浓度为1～2mg/ml。具体配制方法为：称取苯磷硫胺供试品用浓度为50％的乙腈
‑
水溶解并稀释，得到浓度为1～2mg/ml的供试品溶液。
[0012]进一步地，步骤(2)中所述流动相A为磷酸水溶液，所述流动相B为乙腈。其中，流动相A优选为0.5％磷酸水溶液。
[0013]进一步地，步骤(2)中检测使用酰胺基硅胶键合色谱柱。
[0014]进一步地，步骤(2)中检测柱温为20～50℃；更进一步地，检测柱温为30～50℃；其中，检测柱温优选为30℃、40℃或50℃，更优选为40℃。
[0015]进一步地，步骤(2)中检测进样量为5～100μl，流速为1～1.5ml/min。其中，进样量优选为20μl，流速优选为1.2ml/min。
[0016]进一步地，所述色谱柱柱长为100～250mm，色谱柱填料粒度为3.0～5.0μm，色谱柱直径为3.0～5.0mm。其中，色谱柱优选为Ascentis RP
‑
Amide、Accucore 150
‑
Amide
‑
HILIC、Waters Xbridge amide中的一种，色谱柱直径优选为3.5mm，色谱柱长度优选为250mm，色谱柱填料粒度优选为3.5μm。
[0017]进一步地，步骤(3)中所述苯磷硫胺的纯度按照面积归一化法计算。
[0018]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：
[0019](1)建立了特有的苯磷硫胺的检测方法，可以准确、有效地反映苯磷硫胺的质量状况，从而有效控制其后续相关产品的质量；
[0020](2)检测方法操作简便，可以准确检测苯磷硫胺的纯度，检测时间短，专属性(各杂质与主成分之间分离度均不小于1.5)、灵敏度(检测限为0.1μg/ml，定量限为0.3μg/ml)、准确度(线性相关系数r值大于0.999)及重复性(杂质含量波动在
±
0.01％内)均良好；
[0021](3)检测方法适应性强，可用于苯磷硫胺制备全过程的质量控制，同时也可用于苯磷硫胺及其相关产品的质量控制。
附图说明
[0022]图1为本申请系统适用性的HPLC色谱图；
[0023]图2为本申请供试品的HPLC色谱图；
[0024]其中，图1中各标记色谱峰：1、杂质a，2、杂质b，3、杂质c，4、苯磷硫胺，5、杂质d，6、杂质e，7、杂质f，8、杂质g，9、杂质h，10、杂质i。
具体实施方式
[0025]下面结合实施例和附图对本专利技术的技术方案作进一步说明。
[0026]试剂：
[0027][0028][0029]色谱柱：Waters Xbridge amide；色谱柱的规格：内径为3.5mm，长度为250mm，填料粒径为3.5μm；
[0030]设备：高效液相色谱仪(Thermo U3000，赛默飞)，电子天平(MS105，梅特勒)。
[0031]实施例1：专属性试验
[0032]1、供试品溶液配制
[0033](1)各破坏条件下供试品溶液配制
[0034]储备液配制：精密称取苯磷硫胺供试品适量，用浓度为50％的乙腈溶解并稀释，制成每1ml约含5mg的溶液，作为样品储备液。
[0035]酸破坏：取储备液2ml置于10ml量瓶中，加1mol/L HCl 1ml，65℃水浴加热5分钟，放冷，再加1mol/L NaOH 1ml中和，稀释剂定容，摇匀；空白溶剂同法操作。
[0036]碱破坏：取储备液2ml置于10ml量瓶中，加1mol/L NaOH1ml，90℃水浴加热30分钟，放冷，再加1mol/L HCl 1ml中和，稀释剂定容，摇匀；空白溶剂同法操作。
[0037]氧化破坏：取储备液2ml置于10ml量瓶中，加6％双氧水1ml，室温放置2小时，稀释剂定容，摇匀；空白溶剂同法操作。
[0038]高温破坏：取储备液2ml置于10ml量瓶中，90℃水浴加热2小时，放冷，定容，摇匀。空白溶剂同法操作。
[0039]光照破坏：取储备液2ml置于10ml量瓶中，在日光(4500
±
500Lux)和紫外光(83uv)下照射24小时，稀释剂定容，摇匀；空白溶剂同法操作。
[0040](2)供试品溶液配制
[0041]称取苯磷硫胺供试品适量，用浓度为50％的乙腈溶解并稀释，得到浓度为1.5mg/ml的供试品溶液；
[0042]制备空白溶剂：50％的乙腈溶液；
[0043]制备系统适用性溶液：称取苯磷硫胺供试品及各杂质适量用浓度为50％的乙腈溶解并稀释，得到供试品浓度为1.5mg/ml，其他杂质为15μg/ml的系统测试液；
[0044]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苯磷硫胺的检测方法，其特征在于，所述检测方法包含以下步骤：(1)配制对照品和供试品溶液；(2)检测：采用高效液相色谱法，流动相A为0.01％～1％的酸性缓冲液，流动相B为有机溶剂，洗脱梯度中流动相A以体积比计，0分钟：15％
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15％，0～12分钟：15％
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15％，12～35分钟：15％
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37％，35～50分钟：37％
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37％，50～60分钟：37％
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15％；(3)计算步骤(2)的检测图谱中苯磷硫胺的纯度。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述供试品溶液的浓度为1～2mg/ml。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述流动相A为磷酸水溶液，所述流动相B为乙腈。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中检测使用酰胺基硅胶键合色...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭辉，高永正，罗林，
申请(专利权)人：南京友杰医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：