一种检测膀胱癌的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测膀胱癌的试剂盒，属于癌症诊断试剂领域。本发明专利技术的试剂盒包括检测尿液脱落细胞中CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2等8个基因表达水平的试剂。本发明专利技术还公开了一种膀胱癌检测系统，该系统通过机器学习算法基于前述8个基因的表达量得到区分膀胱癌和非膀胱癌的二分类模型，可对膀胱癌实现高准确率的诊断。该系统与现有技术同等准确率的条件下，大幅度减少用于膀胱癌诊断的基因数量，显著降低了检测费用，缩短了检测所需时间，更加方便医疗机构开展，从而能够较好地满足临床对于无创膀胱癌检查的迫切需求。查的迫切需求。查的迫切需求。

【技术实现步骤摘要】
一种检测膀胱癌的试剂盒


[0001]本专利技术属于癌症诊断试剂领域。

技术介绍

[0002]膀胱癌是指起源于膀胱的恶性肿瘤，是泌尿系统常见癌症之一。膀胱癌患者中，男性是女性的3～4倍。膀胱癌可发生于任何年龄，多发生于50岁以上。膀胱癌的发生发展是多因素、多步骤复杂变化的过程，目前认为与遗传易感性、吸烟、职业暴露、饮食、长期使用某些药物等有关。
[0003]遗传易感性是膀胱癌发生发展的重要因素，目前已经报道了较多相关基因。例如：GSTM1缺失1拷贝和2拷贝患膀胱癌风险分别增加1.2、1.9倍；GSTP1基因第105位密码子若为缬氨酸则会增加膀胱癌的易感性，尤其是高级别或浸润性膀胱癌；GSTT1基因缺失会降低机体对致癌物质的解毒作用，增加患膀胱癌的风险。
[0004]CA9(carbonic anhydrase 9，Gene ID：768)是一种编码催化二氧化碳可逆水合的锌金属酶的基因，ERBB2(erb
‑
b2 receptor tyrosine kinase 2，Gene ID：2064)编码一种受体赖氨酸激酶的上皮生长因子受体。已有报道表明，CA9和ERBB2在包括膀胱癌在内的多种癌组织中表达。
[0005]CCL18(C
‑
C motif chemokine ligand 18，Gene ID：6362)编码一种免疫调节相关的分泌蛋白，其在膀胱癌细胞中高表达，参与膀胱癌细胞的转移与侵袭。IGF2(insulin like growth factor 2，Gene ID：3481)编码多肽生长因子胰岛素家族的一员，参与发育和生长，也被证明在膀胱癌组织高表达。MMP12(matrix metallopeptidase 12，Gene ID：4321)编码基质金属蛋白酶的肽酶M10家族的一个成员，与胚胎发育、生殖、组织重塑以及一些疾病相关，其多态性与膀胱癌相关，其高表达也可作为辅助性诊断膀胱癌的依据。SGK2(serum/glucocorticoid regulated kinase 2，Gene ID：10110)编码一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，研究表明膀胱癌细胞中SGK2表达量高于普通膀胱上皮细胞。
[0006]LINC00565(Gene ID：100861555)是一种长非编码RNA，与卵巢癌、胶质母细胞瘤、肠癌、胃癌有关，未见其与膀胱癌之间关系的报道。PPP1R14D(protein phosphatase 1regulatory inhibitor subunit 14D，Gene ID：54866)编码一种蛋白磷酸酶1的抑制蛋白，PPP1R14目前未见与膀胱癌之间的报道，在胰腺癌中，PPP1R14表达量越高，患者存活时间越长。
[0007]中国专利申请201810933616.2公开了种通过检测尿液样品中32个基因的表达模式来进行膀胱癌诊断的方法，所述基因为包括CA9、IGF2、ERBB2、MMP12、CCL18、SGK2、PPP1R14D、LINC00565在内的共32个基因，在106例临床样本(74例膀胱癌样本和32例对照样本)中验证发现，其准确率为93.4％。但检测的基因较多，成本较高。

技术实现思路

[0008]本专利技术要解决的问题是：提供一种简化待检基因数量的膀胱癌检测标记基因组
合、检测试剂盒以及检测系统。
[0009]本专利技术的技术方案如下：
[0010]一组用于膀胱癌检测的基因，具体为：CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2。
[0011]检测尿液脱落细胞中CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达的试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的用途，所述试剂盒由检测CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达的试剂组成。
[0012]进一步地，所述试剂为实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂、基因芯片试剂或核酸印迹检测试剂；
[0013]优选地，所述实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂包括PCR预混液；
[0014]术语“PCR预混液”，也叫PCR Premix，市面有多种商品，属于PCR反应体系的半成品，其中含有PCR所需要的Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTPs和缓冲盐，缓冲盐的存在使PCR反应体系的pH处在8.3
‑
8.8；
[0015]进一步优选地，所述预混液中包括双链DNA荧光染料或针对所述引物的扩增子的荧光探针；
[0016]术语“双链DNA荧光染料”是可结合双链DNA而发出荧光的染料，例如实时定量PCR常用的SYBR Green I。
[0017]进一步地，所述实时定量PCR检测试剂中包括序列如SEQ ID NO.1～16所述的引物。
[0018]进一步地，所述膀胱癌检测试剂盒为针对东亚人群的膀胱癌检测试剂盒；优选地，为针对中国人的膀胱癌检测试剂盒。
[0019]一种膀胱癌检测试剂盒，所述试剂盒由检测尿液脱落细胞中CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达水平的试剂组成。
[0020]进一步地，所述膀胱癌检测试剂盒为针对东亚人群的膀胱癌检测试剂盒；优选地，为针对中国人的膀胱癌检测试剂盒。
[0021]进一步地，所述试剂为实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂、基因芯片试剂或核酸印迹检测试剂；
[0022]优选地，所述实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂包括PCR预混液；
[0023]进一步优选地，所述预混液中包括双链DNA荧光染料或针对所述引物的扩增子的荧光探针。
[0024]进一步地，所述实时定量PCR检测试剂中包括序列如SEQ ID NO.1～16所述的引物。
[0025]一种膀胱癌检测系统，所述系统包括输入模块、计算模块和输出模块；
[0026]所述输入模块用于输入尿液脱落细胞CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2的表达量数据；
[0027]所述计算模块内置机器学习算法，可基于已知膀胱癌和非膀胱癌群体尿液脱落细胞的CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达数据，得到区分膀胱癌和非膀胱癌的二分类模型；
[0028]所述计算模块还能将待检者尿液脱落细胞CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、
MMP12、PPP1R14D和SGK2的表达量数据代入前述二分类模型，计算与已知膀胱癌和非膀胱癌群体的CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达数据的相似度分数，得出膀胱癌或非膀胱癌的检测结果；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测尿液脱落细胞中CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达的试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的用途，所述试剂盒由检测CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达的试剂组成。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述试剂为实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂、基因芯片试剂或核酸印迹检测试剂；优选地，所述实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂包括PCR预混液；进一步优选地，所述预混液中包括双链DNA荧光染料或针对所述引物的扩增子的荧光探针。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述实时定量PCR检测试剂中包括序列如SEQ ID NO.1～16所述的引物。4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述膀胱癌检测试剂盒为针对东亚人群的膀胱癌检测试剂盒；优选地，为针对中国人的膀胱癌检测试剂盒。5.一种膀胱癌检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由检测尿液脱落细胞中CA9、CCL18、ERBB2、IGF2、LINC00565、MMP12、PPP1R14D和SGK2表达水平的试剂组成。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述膀胱癌检测试剂盒为针对东亚人群的膀胱癌检测试剂盒；优选地，为针对中国人的膀胱癌检测试剂盒。7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂为实时定量PCR检测试剂、高通量测序试剂、基因芯片试剂或核酸印迹检测试剂；...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐清华，吴益旺，孙益丰，宋凯斌，任婉丽，陈金影，胡林义，
申请(专利权)人：杭州可帮基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：