一种内收蛋白的抗原肽及其抗体与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种内收蛋白的抗原肽及其抗体与应用，属于生物技术领域。本发明专利技术的抗原肽为内收蛋白(1

【技术实现步骤摘要】
Neuroscience,2003,23(7):2675
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2685.
[0011]6.
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Pielage J,Bulat V,Zuchero J B,et al.Hts/Adducin Controls Synaptic Elaboration and Elimination[J].Neuron,2011,69(6):1114
‑
1131.
[0012]7.Zhang Z,Song M,Liu X,Kang SS,Kwon IS,Duong DM,Seyfried NT,Hu WT,Liu Z,Wang JZ,Cheng L,Sun YE,Yu SP,Levey AI,Ye K.Cleavage of tau by asparagine endopeptidase mediates the neurofibrillary pathology in Alzheimer's disease.Nat Med.2014,20:1254
‑
1262.
[0013]8.Zhang Z,Song M,Liu X,Su Kang S,Duong DM,Seyfried NT,Cao X,Cheng L,Sun YE,Ping Yu S,Jia J,Levey AI,Ye K.Delta
‑
secretase cleaves amyloid precursor protein and regulates the pathogenesis in Alzheimer's disease.Nat Commun.2015,6:8762.

技术实现思路

[0014]本专利技术的目的是开发针对γ
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adducin(1
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357)片段的抗体，提供一种γ
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adducin(1
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357)片段的抗原肽及其抗体与应用，用于AD及衰老相关疾病的发病机制研究和疾病早期诊断。
[0015]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0016]一种γ
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adducin(1
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357)片段的抗原肽，其氨基酸序列为：CAASGGGGVN。
[0017]一种抗体，以上述抗原肽为抗原制备得到。进一步地，所述的抗体以Ac
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CAASGGGGVN与载体蛋白交联后得到的交联多肽为抗原制备得到，所述的载体蛋白优选为KLH。所述的抗体可以为单克隆抗体，也可以为多克隆抗体。
[0018]进一步地，所述的多克隆抗体为兔多克隆抗体。
[0019]进一步地，所述的兔多克隆抗体的制备方法包括以下步骤：以上述交联多肽为免疫原免疫家兔，收集家兔血液制备抗血清，将抗血清分离纯化得到兔多克隆抗体。所述的抗血清的分离纯化采用常规技术手段进行，即采用抗原亲和层析法对所述抗血清进行纯化，以得到纯化的兔多克隆抗体。
[0020]本专利技术γ
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adducin(1
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357)片段的抗原肽具有很好的免疫原性，以其为免疫原得到的兔多克隆抗体特异性好、效价高，只识别AEP剪切形成的γ
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adducin(1
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357)片段，而不识别全长的γ
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adducin；效价可以达到1∶512000。基于所述抗体的特异性，其可用于检测人脑标本及动物标本中γ
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adducin蛋白被剪切的程度，用于AD发病机制的研究，用于AD的早期诊断等。
[0021]一种检测γ
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adducin蛋白被剪切程度的试剂，包括上述抗体。
[0022]一种AD早期诊断试剂，包括上述抗体。
[0023]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0024](1)现有的γ
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adducin抗体都是无差异性地识别全长的γ
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adducin蛋白，而我们发现γ
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adducin被剪切后形成的γ
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adducin(1
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357)片段才是具有神经毒性作用的部分，因此检测该片段具有重要的意义。目前尚无特异性识别γ
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adducin(1
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357)片段的抗体，基于本专利技术抗原肽得到的特异性识别γ
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adducin(1
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357)片段的抗体解决了这一问题。
[0025](2)本专利技术的抗γ
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adducin(1
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357)片段的抗体能够用于AD的早期诊断。
附图说明
[0026]图1为酶联免疫吸附实验检测抗γ
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adducin N357抗体滴度的结果图。
[0027]图2为抗γ
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adducin N357抗体的特异性检测结果图。AEP剪切γ
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adducin形成γ
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adducin(1
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357)片段，抗γ
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adducin N357抗体能够识别AEP剪切形成的γ
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adducin(1
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357)片段，而不识别全长的γ
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adducin。
[0028]图3为使用抗γ
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adducin N357抗体进行免疫印迹实验的结果图。抗γ
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adducin N357抗体可检测到AD患者脑内和AD小鼠模型脑内的γ
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adducin(1
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357)片段。
[0029]图4为使用抗γ
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adducin N357抗体进行免疫组织化学实验的结果图。抗γ
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adducin N357抗体可检测到AD患者脑内的γ
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adducin(1
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357)片段。
具体实施方式
[0030]以下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0031]实施例1兔多克隆抗体(抗γ
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adducin N357抗体)的制备
[0032]本实施例所用抗原肽(Ac
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CAASGGGGVN)由人工化学合成得到(南京金斯瑞生物科技有限公司)。合成的抗原肽进行质谱鉴定，鉴定正确后利用HPLC进行纯化和纯度鉴定。
[0033]将上述抗原肽偶联到载体蛋白KLH上得到抗原肽
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KLH偶联物，以其作为免疫原免疫新西兰兔制备多克隆抗体。具体步骤如下：
[0034](1)实验前采集动物血液，并制备免疫前血清。采集的血液离心后收集上清即得到血清。
[0035](2)初次免疫：每只兔子皮下多点注射乳化的1mL抗原肽
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KLH偶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种内收蛋白1
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357片段的抗原肽，其特征在于：氨基酸序列为：CAASGGGGVN。2.一种抗体，其特征在于：以权利要求1中所述的抗原肽为抗原制备得到。3.一种抗体，其特征在于：以Ac
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CAASGGGGVN与载体蛋白交联后得到的交联多肽为抗原制备得到。4.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于：所述的载体蛋白为KLH。5.根据权利要求2
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4任一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于：所述的多克隆抗体为兔多克隆抗体。7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：张振涛，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：