脑源肽或融合肽在新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了脑源肽HIBDAP或所述的融合肽TAT

【技术实现步骤摘要】
脑源肽或融合肽在新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种脑源肽及其应用。

技术介绍

[0002]新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic ischemic brain damage，HIBD)是新生儿死亡最常见的原因之一，可能留有永久性脑损害如脑瘫、癫痫、智力低下等后遗症。然而，迄今为止，除了亚低温治疗外，新生儿HIBD仍缺乏特效的治疗方法，并不能完全阻止神经系统后遗症的发生。因此，寻找有效干预新生儿HIBD的方法迫在眉睫。
[0003]近年来，多肽类药物因其诸多优点得到了广泛的关注，已广泛运用在代谢性疾病、肿瘤、心血管系统疾病、神经系统疾病的治疗中。
[0004]天然多肽具有化学和物理稳定性差、半衰期短的缺点，随着一系列新技术的发展，如通过替换特定氨基酸以减少多肽的降解、与白蛋白结合延长多肽的半衰期、通过化学修饰优化多肽的药代动力学等，可以克服天然多肽的内在缺陷，使得多肽类药物更易在临床中大范围推广。迄今，已有60多种多肽类药物投入市场用于病人，150多种多肽处于临床研发阶段，多肽类药物作为一种新的治疗途径有着巨大的潜力。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术通过多肽组学筛选技术发现一条来源于热休克蛋白90α(Hsp90α) 210～226位氨基酸的多肽在HIBD患儿脑脊液中显著下调。在缺氧条件下，HSP90α与缺氧诱导因子1α(HIF
‑
1α)结合激活HIF
‑
1α而发挥重要作用。通过KEGG分析发现， Hsp90α参与调节NOD样受体(NLRs)信号通路中的NLRP3/Caspase
‑
1轴，而该轴是激活细胞焦亡的经典途径之一。本专利技术通过研究发现，该条多肽HIBDAP与细胞穿膜肽合成的融合肽能在缺氧条件下通过抑制NLRP3/Caspase
‑
1轴降低神经细胞焦亡，从而发挥神经保护作用。
[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种新型脑源肽，该条肽的氨基酸序列： HSQFIGYPITLFVEKER，专利技术人将之命名为HIBDAP(Hypoxic ischemic brain damage associated peptide)。考虑该条肽呈水溶性，且大于6个氨基酸的多肽一般不能穿过血脑屏障，本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种融合肽，包括了穿膜肽(TAT)和 HIBDAP，该融合肽的氨基酸序列为RKKRRQRRRAHSQFIGYPITLFVEKER，并证明该融合肽能穿透血脑屏障并穿透细胞膜进入神经细胞。
[0007]本专利技术还要解决的技术问题是提供了上述的融合多肽能降低焦亡通路中NLRP3、 ASC、Caspase
‑
1的表达，从而抑制神经细胞焦亡，为新生儿HIBD的治疗提供新的治疗方法。
[0008]本专利技术最后要解决的技术问题是提供了所述融合肽TAT
‑
HIBDAP在制备预防或治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的应用。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术提供了一种脑源肽 HIBDAP，所述脑源肽的氨基酸序列为HSQFIGYPITLFVEKER。
[0010]本
技术实现思路
还包括一种融合肽TAT
‑
HIBDAP，所述融合肽TAT
‑
HIBDAP包括穿膜肽和
所述的脑源肽HIBDAP。
[0011]其中，所述融合肽TAT
‑
HIBDAP的氨基酸序列为 RKKRRQRRRAHSQFIGYPITLFVEKER。
[0012]专利技术的多肽或融合肽可以委托公司合成，也可以自行合成。
[0013]本
技术实现思路
还包括所述的融合肽TAT
‑
HIBDAP在制备预防或治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的应用。
[0014]其中，所述应用通过检测融合肽TAT
‑
HIBDAP对NLRP3、ASC和/或Caspase
‑
1表达情况的影响。
[0015]其中，所述检测方法采用实时定量PCR和/或免疫印迹杂交方法。
[0016]其中，所述实时定量PCR中所采用的引物对序列分别为：
[0017]NLRP3：
[0018]F：5
’‑
TGA AGA GTG TGA TCT GCG GAA AC
‑3’
；
[0019]R：5
’‑
GAA AGT CAT GTG GCT GAA GCT GT
‑3’
；
[0020]ASC
[0021]F：5
’‑
AGT TGA TGG TTT GCT GGA TGC T
‑3’
；
[0022]R：5
’‑
GGT CTG TCA CCA AGT AGG GCT G
‑3’
；
[0023]Caspase
‑1[0024]F：5
’‑
AAC CTT GGG CTT GTC TTT
‑3’
；
[0025]R：5
’‑
CAG GAG GGA ATA TGT GGG
‑3’
；
[0026]GAPDH
[0027]F：5
’‑
AGA AGG CTG GGG CTC ATT TG
‑3’
；
[0028]R：5
’‑
AGG GGC CAT CCA CAG TCT TC
‑3’
。
[0029]其中，所述免疫印迹杂交方法中所用到的抗体分别为NLRP3、ASC、Caspase
‑
1或β
‑
actin。
[0030]本
技术实现思路
还包括一种多肽类药物，所述多肽类药物包括所述的脑源肽HIBDAP 或所述的融合肽TAT
‑
HIBDAP。
[0031]其中，所述多肽类药物的剂型为为静脉注射剂、栓剂、灌肠剂、凝胶剂、泡沫剂、肠溶片、汤剂、合剂、糖浆剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、冻干粉中的一种或几种。
[0032]有益效果：相对于现有技术，本专利技术具备以下优点：
[0033]与小分子药物相比，本专利技术多肽及其多肽类药物具有高选择性、高效性、耐受性好的优点，而相较于蛋白质药物，其生产更简单、成本更低。本专利技术通过实验证实，融合肽TAT
‑
HIBDAP能够进入细胞，在缺氧缺血条件下增加细胞存活率、降低焦亡率，有脑保护作用。
附图说明
[0034]图1、高效液相色谱检测TAT
‑
HIBDAP融合肽；
[0035]图2、多肽入胞图：荧光显微镜显示TAT
‑
HIBDAP能够进入细胞膜；
[0036]图3、CCK8和流式图显示：TAT
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脑源肽HIBDAP或融合肽TAT
‑
HIBDAP在制备预防或治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脑源肽的氨基酸序列为HSQFIGYPITLFVEKER。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述融合肽TAT
‑
HIBDAP由穿膜肽和权利要求1所述的脑源肽HIBDAP组成，所述融合肽TAT
‑
HIBDAP的氨基酸序列为RKKRRQRRRAHSQFIGYPITLFVEKER。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用通过检测融合肽TAT
‑
HIBDAP对NLRP3、ASC和/或Caspase
‑
1表达情况的影响。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测方法采用实时定量PCR和/或免疫印迹杂交方法。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述实时定量PCR中所采用的引物对序列分别为：NLRP3：F：5
’‑
TGA AGA GTG TGA TCT GCG GAA AC
‑3’
；R：5
’‑
GAA AGT CAT ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱洁，侯雪雯，袁子钧，
申请(专利权)人：南京市儿童医院，
类型：发明
国别省市：