一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法技术

本发明专利技术涉及分析检测技术领域，具体涉及一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法。本发明专利技术的目的在于提供一种同时提取小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分的方法，收集服用小金胶囊后的动物血液，离心分离得到血清，采用正己烷对上述血清中的两种挥发性成分麝香酮和肉桂酸龙脑酯进行提取。本发明专利技术的目的还在于提供一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，其包括采用上述提取方式进行提取和对提取后的样本采用气相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法


[0001]本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法。

技术介绍

[0002]小金胶囊是《中国药典》2015版一部收载的一种具有散结消肿，化瘀止痛之功效的中药，它由人工麝香、木鳖子、草乌、枫香脂、乳香、没药、五灵脂、当归、地龙、香墨等10味药材制备而成。为了阐明其治疗机理，申请人对该中药进行了大量物质基础和作用机理研究。其中，对中药经口服后，进入动物体内的化学成分及其代谢产物进行了系统研究，发现麝香酮和肉桂酸龙脑酯是小金胶囊代谢后进入到血液中的两个关键的原型代谢物，为了更好的研究小金胶囊的代谢情况，阐明其治疗机理，为后续用药等提供依据，如何进行麝香酮和肉桂酸龙脑酯的定量检测就显得尤为重要。

技术实现思路

[0003]基于此，本专利技术的目的之一在于提供一种同时提取小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分的方法，包括以下步骤：收集服用小金胶囊后的动物血液，离心分离得到血清，采用正己烷对上述血清中的两种挥发性成分麝香酮和肉桂酸龙脑酯进行提取。
[0004]优选的，提取步骤如下：在血清中加入正己烷，涡旋混合后离心，分离得到上清液，干燥，然后采用甲醇复溶，即得。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，采用上述的提取方式进行提取，对复溶后的液体采用气相色谱
‑
质谱联用分析仪检测分析。
[0006]优选地，检测分析时采用离子检测模式监测和不分流进样。
[0007]优选地，检测分析时的离子组为：麝香酮，85、97、125、209、238；肉桂酸龙脑酯，77、109、131、153、284。
[0008]优选地，检测分析时的升温程序为：初始温度200～240℃，维持1～3min，然后以25～35℃/min的速率升温至260～300℃，维持0.5～1.5min，溶剂延迟1～3min。
[0009]更优选地，检测分析时的升温程序为：初始温度220℃，维持2min，然后以30℃/min的速率升温至280℃，维持1min，溶剂延迟2min。
[0010]优选地，检测分析时的色谱柱为：HP
‑
5MS色谱柱。
[0011]优选地，检测分析的条件如下：色谱柱：30m
×
0.25mm
×
0.50μm的HP
‑
5MS色谱柱；载气：高纯氮气，恒流模式，流速为0.7mL/min；程序升温：220℃维持2min，然后以30℃/min的速率升温至280℃，维持1min，溶剂延迟,4min；不分流进样，进样口温度为250℃；传输线温度：270℃，电离方式：电喷雾电离源(ESI)，电离能量：70eV；离子源温度：250℃；四级杆温度：150℃。
[0012]优选地，检测分析时的升温程序为：初始温度70～90℃，然后以15～25℃/min的速率升温至260～300℃。
[0013]本专利技术采用正己烷对服用了小金胶囊后的动物血清进行提取，然后采用气相色谱
‑
质谱联用分析仪检测分析，能够同时对挥发性成分麝香酮和肉桂酸龙脑酯进行提取和检测，麝香酮的回收率可以达到96％～104％，检出限能达到0.06μg/mL，肉桂酸龙脑酯的回收率可以达到98％～104％，检出限能达到0.03μg/mL，操作简便、快速、准确、灵敏度高重复性好。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例2中检测分析图谱；其中a为空白血浆提取液中麝香酮的检测图谱，b为空白血浆提取液中肉桂酸龙脑酯的检测图谱；c为标准溶液中麝香酮的检测图谱，d为标准溶液中肉桂酸龙脑酯的检测图谱；e为灌胃批号1小金胶囊的某只大鼠血浆提取液中麝香酮的检测图谱，f为灌胃批号1小金胶囊的某只大鼠血浆提取液中肉桂酸龙脑酯的检测图谱。
[0015]图2为对比例1中采用不同提取溶剂时的检测结果。
具体实施方式
[0016]以下结合具体实施方式对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语均属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0017]材料：
[0018]液
‑
质联用级甲醇(美国Fisher Scientific)，三氯甲烷、正己烷、乙醇、乙酸乙酯，均为分析纯，购于上海Richjoint化学试剂公司，麝香酮内标(3
‑
甲基麝香酮)购于上海Sunny Biotec公司，肉桂酸龙脑酯为实验室合成(纯度98％以上)，其结构经1H NMR，13C NMR及气质联用鉴定。吐温
‑
80购于美国Sigma
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Aldrich，小金胶囊由健民药业集团股份有限公司提供。
[0019]实施例1
[0020]精密称取麝香酮与肉桂酸龙脑酯标准品，用甲醇定容于5mL容量瓶中，得到1mg/mL的标准母液，保存于4℃冰箱中。麝香酮母液经甲醇稀释为系列工作溶液，浓度分别为5.08、15.24、30.48、40.64、81.28、101.60μg/mL。肉桂酸龙脑酯母液经甲醇稀释为系列工作溶液，浓度分别为7.59、22.77、45.54、60.72、121.44、151.80μg/mL。所有溶液在进气相色谱
‑
质谱联用仪(气质联用仪)之前均需经0.22μm滤膜过滤。
[0021]在实验中，我们通过比较不同的色谱柱、采集方式、进样模式、程序升温等，对小金胶囊代谢物中两种挥发性成分的分离效果进行摸索，优化气质联用仪分析的色谱条件。为了达到快速准确定量分析目的，对气质联用分析系列条件摸索与优化如下：
[0022]1)色谱柱选择：
[0023]通过采用HP
‑
5MS(30m，0.25mm，0.50μm)和Rtx
‑
5MS(30m，0.25mm，0.25μm)两种不同粒径的色谱柱进行对比分析，结果显示，采用HP
‑
5MS色谱柱，两种成分的分离效果最好，故
选择HP
‑
5MS色谱柱。
[0024]2)质谱条件优化
[0025]因实验中需对小金胶囊代谢物中两种挥发性成分的定量分析，为了排除其他成分的干扰，最终采集方式是选择离子检测模式监测(SIM)。因两种成分相对含量均较低，故采用不分流进样方式。
[0026]在气质联用分析过程中，程序升温对化合物的分离至关重要。我们进行了以20℃/min的升温速率，从80℃一直升至280℃，结果发现两种成分的出峰时间均超过7min。为了缩短分析时间，我们选取了较快的升温速率(30℃/min)。最终确定升温程序为初始温度220℃，维持2min，然后以30℃/min的速率升本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时提取小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：收集服用小金胶囊后的动物血液，离心分离得到血清，采用正己烷对上述血清中的两种挥发性成分麝香酮和肉桂酸龙脑酯进行提取。2.根据权利要求1所述的同时提取小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分的方法，其特征在于，提取步骤如下：在血清中加入正己烷，涡旋混合后离心，分离得到上清液，干燥，然后采用甲醇复溶，即得。3.一种同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的提取方式进行提取，对复溶后的液体采用气相色谱
‑
质谱联用分析仪检测分析。4.根据权利要求3所述的同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，其特征在于，检测分析时采用离子检测模式监测和不分流进样。5.根据权利要求3～4任一项所述的同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，其特征在于，检测分析时的离子组为：麝香酮，85、97、125、209、238；肉桂酸龙脑酯，77、109、131、153、284。6.根据权利要求3～4任一项所述的同时检测小金胶囊原型代谢物中两种挥发性成分含量的方法，其特征在于，检测分析时的升温程序为：初始温度200～240℃，维持1～3min，然后以25～35℃/min的速率升温至260～300℃，维持0.5～1.5min，溶剂延迟1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵刚，任霞，吴雪英，余丽花，郭平，张梦婷，黄佩闻，
申请(专利权)人：健民药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：