H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供一种H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用。本发明专利技术通过截取H5、H7亚型禽流感病毒HA蛋白的胞外区，构建含有HA胞外区基因的穿梭载体，转染sf9昆虫细胞，拯救重组病毒，并通过hi5细胞进行分泌表达，通过亲和层析进行纯化，获得HA蛋白抗原，加入佐剂，乳化，制备得到H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗。本发明专利技术制备方法简单，克服了以鸡胚生产疫苗的缺点，耗时短，表达量高，可在反应器中实现细胞悬浮培养，有利于大规模生产，所制备的基因工程亚单位疫苗免疫效果良好，能有效预防H5、H7亚型禽流感病毒的感染，具有广阔的应用前景。有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于兽用生物制品领域，具体地说，涉及一种H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]禽流感是由禽流感病毒所引起的一种急性、热性、高度传染性的疾病，给我国养殖业造成巨大损失。其表面的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是两种主要的病毒囊膜糖蛋白，根据抗原属性的不同，A型流感病毒可分为18种HA亚型和11种NA亚型，其中H1
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H16和N1
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N9存在于野生水禽中。自1996年首次报道H5N1亚型禽流感以来，H5亚型禽流感病毒已传播至全世界，迄今为止，H7N9亚型禽流感也造成多波感染。
[0003]流感病毒会经常发生变异，1996年从家禽中分离到H5N1亚型病毒A/Goose/Guangdong/1/1996株，自2008年开始，含有GS/GD96骨架的HPAIV 2.3.4分支的病毒陆续出现，随后进化出2.3.4.4分支，已成为目前流行的最主要分支，同时流行2.3.2.1分支病毒。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1
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3任一所示。2.编码权利要求1所述多肽的核酸分子，其特征在于，核苷酸序列分别如SEQ ID NO:4
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6所示。3.含有权利要求2所述核酸分子的生物材料，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。4.权利要求1所述多肽、权利要求2所述核酸分子或权利要求3所述生物材料在制备H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗中的应用。5.一种免疫原性组合物，其特征在于，其包含权利要求1所述的多肽和药学上可接受的载体。6.一种疫苗组合物，其特征在于，其包含权利要求5所述的免疫原性组合物。7.一种重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒包含权利要求2所述的核酸分子。8.H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗，其特征在于，所述疫苗包含权利要求1所述的多肽和疫苗佐剂。9.H5、H7亚型禽流感病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括：(1)人工合成如SEQ ID NO:4
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6所示的基因序列，将基因序列分别构建到pFastBac1载体中，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性穿梭载体；然后将穿梭载体转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，筛选阳性重组Bacmid；(2)取无血清悬浮培养的sf9细胞，待细胞密度为2.0
×
106～3.0
×
106cells/mL，用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海鹰，丁向东，王增福，岳建新，李吉轩，张秀美，袁野，孙灵睿，史张艳，赵成全，李京京，
申请(专利权)人：乾元浩生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：