重组微生物、其代谢物、及其用于治疗或/及预防脂肪肝及心血管疾病的用途制造技术

本发明专利技术的主要目的在于提供一种新颖重组微生物，其具有高安全性而被用以作为医药组合物的有效成分，或是作为表达外源基因的平台，举例来说，该新颖重组微生物具有核苷酸序列编码为SEQ ID No.1的外源基因，而能够表达氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质。No.2的蛋白质。No.2的蛋白质。

【技术实现步骤摘要】
重组微生物、其代谢物、及其用于治疗或/及预防脂肪肝及心血管疾病的用途


[0001]本专利技术有关于重组微生物及其用途，特别指一种重组微生物、其代谢物、及其用于治疗或/及预防脂肪肝及心血管疾病的用途。

技术介绍

[0002]粥状动脉硬化为胆固醇沉积于血管内皮细胞下层，氧化造成的发炎性疾病；脂肪肝则是体内脂肪储存于肝细胞所造成的发炎性疾病。目前临上对于粥状动脉硬化的治疗方法多以投予他汀类药物作为降脂疗法(Lipid-lowering therapy)，意即通过投予药物降低低密度胆固醇或是提升高密度胆固醇，但是实际治疗效果都不彰；而目前临床上未有直接治疗脂肪肝的药物，仅能针对脂肪肝所造成的病征进行症状改善或控制；换言之，目前临床上对于粥状动脉硬化或脂肪肝仅有提供改善症状的治疗方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的在于提供一种新颖重组微生物，其具有高安全性而被用以作为医药组合物的有效成分，或是作为表达外源基因的平台，举例来说，该新颖重组微生物具有核苷酸序列编码为SEQ ID No.1的外源基因，而能够表达氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质。
[0004]更进一步来说，为能使该外源基因能够在乳酸菌表达为统产制出氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质，该外源基因经过人工设计并进行人工合成而得到。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供该新颖重组微生物或其代谢物的用途，其能够抑制脂肪堆积于血管壁或肝脏细胞，用以有效地达到改善或治疗脂肪肝、粥状动脉硬化的功效。r/>[0006]换言之，本专利技术所揭新颖重组微生物或其代谢物具有抑制发炎因子表达、抑制脂肪细胞生成、保护肝脏及血管组织等功效，故可应用于治疗或预防与脂肪代谢相关的疾病的医药组合物。
[0007]为能达成上述目的，在本专利技术的一实施例中，本专利技术揭露一种重组微生物，其具有一外源基因的乳酸菌，而能表达如氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质，其中，该外源基因的核苷酸序列编码为SEQ ID No.1。
[0008]在本专利技术的一实施例中，该重组微生物为一符合食品等级标准的乳酸菌所制备而成。
[0009]在本专利技术的另一实施例中，该重组微生物以下列步骤所制备而成：
[0010]步骤a：取得该外源基因；
[0011]步骤b：构筑一重组载体，其包含有该外源基因；
[0012]步骤c：将该重组载体导入一乳酸球菌内，使该乳酸球菌能够表达该外源基因。
[0013]为能使本专利技术所揭重组微生物或其代谢物能够供个体所利用，在本专利技术的实施例中提供一种医药组合物，其包含有一有效量的该重组微生物或其代谢物，及至少一药学上
可接受的载体，其中，该代谢物中包含有氨基酸序列编码为SEQID No.2的蛋白质。
[0014]更进一步来说，在本专利技术的一实施例中揭露该重组微生物或其代谢物的用途，其能够用于治疗或预防脂肪肝或是粥状动脉硬化，其中，该代谢物中包含有氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质。
[0015]本专利技术的有益效果在于：
[0016]本专利技术提供一种重组微生物其具有高安全性而被用以作为医药组合物的有效成分，或是作为表达外源基因的平台，举例来说，该新颖重组微生物具有核苷酸序列编码为SEQ ID No.1的外源基因，而能够表达氨基酸序列编码为SEQ IDNo.2的蛋白质。
附图说明
[0017]图1为检测LZ8重组乳酸球菌NZ3900的蛋白质表达的电泳图。
[0018]图2为LZ8重组乳酸球菌NZ3900经乳酸链球菌素诱导不同时间的LZ8蛋白片段的表达量。
[0019]图3为各组白兔的肝脏组织以H&E染色法进行染色的结果，其中，比例尺为 100μm，放大倍数为
×
400。
[0020]图4A为各组白兔的主动脉内表面以苏丹红进行染色的结果。
[0021]图4B为各组白兔的主动脉内表面以H&E染色法进行染色的结果，其中，比例尺为100μm。
[0022]图5A为检测各组白兔升主动脉内IL-1β表达量的结果。
[0023]图5B为量化图5A的结果。
具体实施方式
[0024]本专利技术所揭重组微生物为将能够含有SEQ ID No.1所示外源基因的重组乳酸菌，如重组乳酸球菌(Lactococcus lactis)，而为能使该外源基因能够顺利地在乳酸菌中表达，该外源基因经人为设计合成而得，并且通过该重组微生物表达该外源基因，可使该重组微生物的代谢物中含有氨基酸序列编码为SEQ IDNo.2的蛋白质。
[0025]更进一步来说，由于该重组微生物能够表达该外源基因，或该重组微生物的代谢物中含有氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质，能够抑制肝细胞的 IL-1β表达、减少脂肪堆积于肝细胞、降低发炎细胞浸润，并且能够使动脉内壁厚度下降、减少血管内皮细胞下层的泡沫细胞(foam cells)的数量，因而能够达到治疗或/及预防该生物体粥状动脉硬化、脂肪肝、心血管相关疾病的功效。换言之，该重组微生物或其代谢物能够被开发作为一医药组合物，如疫苗等，亦能够被开发成为一营养补充品。
[0026]所谓“重组微生物”，指将一外源基因导入一微生物的基因组中，并使该重组微生物能够表达该外源基因，一般来说，导入该外源基因的人为手段包含有基因工程(或称遗传工程)技术，例如利用载体携带该外源基因进入一微生物，而载体可为一分子量小的DNA片段，如质粒、病毒DNA等；而该微生物可为乳酸菌、酵母菌、大肠杆菌等细菌。
[0027]所谓“医药组合物”，指包含一有效量的要产生特定效果的所需化合物或活性成份，以及至少一药学上能接受的载体。如同本专利技术所属
中技术人员所了解者，医药组合物的型态可随着要引起特定效果的投予方式有所不同，如锭剂、粉剂、针剂等，并且，该
载体也随着医药组合物的型态而可为固态、半固态或液态。举例来说，载体包含，但不限于，明胶、乳化剂、烃类混合物、水、甘油、生理食盐水、缓冲生理盐水、羊毛脂、石蜡、蜂蜡、二甲基硅油、乙醇。
[0028]所谓“有效量”，指要产生所求特定效果所需化合物或活性成份的量，可以其在组合物中所占重量百分比表示。依据本专利技术所属
的公知常识，该有效量会因为要引起特定效果的投予方式而有所不同，举例来说，活性成分或化合物在组合物中的量可占该组合物重量的约1％至约100％，较佳者为约30％至约100％
[0029]所谓“人工合成方式”一词为以本专利技术所属
技术人员的公知技术，通过人工方式将氨基酸依序连接而成为一多肽，其中，人工合成方式包含化学合成法以及多肽合成仪。
[0030]以下，为能更为详细说明本专利技术的技术特征及其功效，将兹举若干实施例并搭配图表作更进一步说明如后。
[0031]在下列实施例中所使用的乳酸球菌NZ3900及质粒pNZ8149自MoBiTec (Goettingen,Germany)购入，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组微生物，其特征在于，为具有一外源基因的乳酸菌而能够表达如氨基酸序列编码为SEQ ID No.2的蛋白质，其中：该外源基因的核苷酸序列编码为SEQ ID No.1。2.如权利要求1所述重组微生物，其特征在于，以下列步骤制备而成：步骤a：取得该外源基因；步骤b：构筑一重组载体，其包含有该外源基因；步骤c：将该重组载体导入一乳酸球菌内，使该乳酸球菌能够表达该外源基因。3.一种医药组合物，其特征在于，包含一有效量的如权利要求1所述重组微生物或其代谢物，及至少一药学上可接受的载...

【专利技术属性】
技术研发人员：李美芳，林维文，宋沛澎，刘星君，
申请(专利权)人：台中荣民总医院，
类型：发明
国别省市：