一种利用反相色谱检测唾液酸的方法技术

本发明专利技术属于色谱分析技术领域，具体涉及一种利用反相色谱检测唾液酸的方法。该方法通过对待测的蛋白样品进行脱盐、真空浓缩干燥、酸水解、DMB标记、去除蛋白、反相超高效液相色谱检测，最终获得蛋白样品的唾液酸含量的测定结果。本发明专利技术通过改良传统液相系统中的流动相配方和流动相梯度，使得N

【技术实现步骤摘要】
一种利用反相色谱检测唾液酸的方法


[0001]本专利技术涉及色谱分析
，具体涉及一种利用反相色谱检测唾液酸的方法。

技术介绍

[0002]唾液酸是一类N
‑
乙酰神经氨酸或其酯、其醇羟基的衍生物，位于糖蛋白侧链末端。在治疗性蛋白药物中，由于唾液酸带有较强的负电荷，唾液酸含量直接影响药物的半衰期，无唾液酸或唾液酸含量低的蛋白在人体中更容易被降解，而蛋白的唾液酸含量也可能影响其生物学活性，高唾液酸水平的突变抗体的ADCC(antibody
‑
dependent cell
‑
mediated cytotoxicity)活性表现下降。唾液酸的类型对于药物免疫源性也有重要影响，蛋白药物中人源化的唾液酸类型为N
‑
乙酰神经氨酸(N
‑
Acetylneuraminic Acid,Neu5Ac)，无免疫源性；鼠源性细胞所表达的糖蛋白中含有一种非人源化的唾液酸类型N
‑
羟乙酰神经氨酸(N
‑
glycolylneuraminic aci本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用反相色谱检测唾液酸的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：S1.对待测的蛋白样品进行脱盐处理，真空浓缩干燥1
‑
2h；S2.将干燥后的蛋白样品进行酸水解，得到酸水解产物；S3.对步骤S2所得酸水解产物进行DMB标记，获得的产物用超纯水稀释，得到经标记的混合物；对不同浓度的唾液酸标准品进行DMB标记，绘制校准曲线；S4.将步骤S3所得经标记的混合物去除蛋白，得含有唾液酸的溶液；S5.对步骤S4所得含有唾液酸的溶液上样于色谱柱，进行反相超高效液相色谱检测，获得蛋白样品的唾液酸含量的测定结果；其中，所述反相超高效液相色谱包括下列条件：流动相A为乙腈的水溶液，乙腈与水的体积比为(8
‑
10)：(90
‑
92)；流动相B为乙腈；流动相梯度洗脱程序为：0
‑
7min，100％A；7
‑
7.1min，100％B；7.1
‑
11min，100％B；11
‑
11.1min，100％A；11.1
‑
20min，100％A；色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，所述色谱柱的粒径为1.7μm，规格为2.1
×
50mm；柱温为30℃；进样...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔爱艳，李杰，陶佳林，王永忠，
申请(专利权)人：苏桥生物苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：