一种检测Aβ寡聚体的荧光探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术中公开了一种检测Aβ寡聚体的荧光探针及其制备方法和应用。该荧光探针的结构通式如式(I)所示。其制备方法包括以下制备步骤：(1)将对羟基苯甲醛和N

【技术实现步骤摘要】
一种检测A
β
寡聚体的荧光探针及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于特异性分子识别材料领域，特别涉及一种检测Aβ寡聚体的荧光探针及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]到目前为止，阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)是一种无法治愈的神经退行性疾病，具有进行性认知障碍和行为障碍。细胞外错折叠的β淀粉样蛋白斑块和细胞内微管蛋白结合(tau)蛋白缠结是AD的主要病理特征。近年来，全球各大制药巨头投入巨资研发抗AD药物，由于其病理机制复杂，AD药物研发多以未到达主要疗效告终。同时AD患者确诊时已为晚期，因而大多数疗法均无效。所以，提高AD的诊断水平对于AD早期治疗和对其病理机制的了解都具有重要的意义。
[0003]荧光探针是检测复杂生物标志物的省时省力的方法。目前，AD上的荧光探针通常用于检测Aβ斑块和tau蛋白，例如花青衍生物，BODIPY衍生物，姜黄素衍生物和吲哚花青绿色衍生物。
[0004]Aβ寡聚体是阿尔茨海默症诊早期诊断和治疗的有效靶标，但是由于靶向Aβ寡聚体分子的策略不明确，如今能够有力检测Aβ的荧光探针寥寥可数。
[0005]因此，研发具有特异性结合Aβ寡聚体的分子探针引人关注。结合Aβ荧光探针和分子成像技术进行Aβ斑块的显像，可实现无创的、实时的Aβ斑块的体内示踪和检测，进而为AD等疾病患者进行早期诊断、疗效检测以及治疗药物的研究等提供极大便利。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种检测Aβ寡聚体的荧光探针。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供所述检测Aβ寡聚体的荧光探针的制备方法。
[0008]本专利技术的再一目的在于提供所述检测Aβ寡聚体的荧光探针的应用。
[0009]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0010]一种检测Aβ寡聚体的荧光探针，其结构通式如式(I)所示：
[0011][0012]所述的检测Aβ寡聚体的荧光探针的制备方法，包括以下制备步骤：
[0013](1)制备中间体1
[0014]①
将对羟基苯甲醛、N
‑
乙酰甘氨酸和乙酸钠(作为催化剂)加入到有机溶剂中混合均匀，然后加热至110
±
5℃进行回流反应，待反应结束后加入乙醇冷却至室温析出晶体，过滤，洗涤，得到黄色固体；
[0015]②
将黄色固体、甲胺水溶液和碳酸钾(作为催化剂)加入到有机溶剂中，加热至80
±
5℃进行回流反应，待反应结束后冷却至室温，并调节pH值至中性，再降温析出固体，过滤，干燥，得到中间体1；其结构式如式(II)所示：
[0016][0017](2)制备中间体2
[0018]将中间体1溶于有机溶剂中，加入三溴化硼二氯甲烷溶液，在保护性气体氛围下，加热至110
±
5℃进行回流反应，待反应结束后冷却、过滤、洗涤，然后加入氟化氢(HF)溶液搅拌均匀，再依次用乙酸乙酯、碳酸钾溶液和水萃取，浓缩、纯化，得到中间体2；其结构式如式(III)所示：
[0019][0020](3)制备荧光探针
[0021]将中间体2、对二甲氨基苯甲醛和哌啶(作为催化剂)加入到有机溶剂中，在100
±
5℃条件下进行反应，待反应结束后浓缩、洗涤、纯化，得到所述检测Aβ寡聚体的荧光探针。
[0022]步骤(1)
①
中所述的对羟基苯甲醛，N
‑
乙酰甘氨酸和乙酸钠的摩尔比为1：0.9～1.1:0.7～1.3；优选为1:1:0.9。
[0023]步骤(1)
①
中所述的有机溶剂优选为乙酸酐。
[0024]步骤(1)
①
中所述的有机溶剂的用为按每摩尔对羟基苯甲醛配比1L有机溶剂计算。
[0025]步骤(1)
①
中所述的回流反应的时间为3～5h；优选为4h。
[0026]步骤(1)
①
中所述的加入的乙醇的温度为50～60℃；优选为50℃。
[0027]步骤(1)
①
中所述的析出晶体的时间为3～5h；优选为4h。
[0028]步骤(1)
①
中所述的洗涤为依次用冰乙醇和热水进行洗涤。
[0029]步骤(1)
②
中所述的黄色固体、碳酸钾和甲胺的摩尔比为1：1.5：4。
[0030]步骤(1)
②
中所述的甲胺水溶液的浓度为体积百分比33％。
[0031]步骤(1)
②
中所述的有机溶剂优选为乙醇。
[0032]步骤(1)
②
中所述的甲胺水溶液与有机溶剂的体积比为1:1。
[0033]步骤(1)
②
中所述的回流反应的时间为2～3h；优选为2.5h。
[0034]步骤(1)
②
中所述的调节pH值为采用HCl乙醇溶液进行调节；优选为采用体积百分比10％的HCl乙醇溶液进行调节。
[0035]步骤(1)
②
中所述的降温为将至0℃。
[0036]步骤(2)中所述的中间体1和三溴化硼二氯甲烷的摩尔比为1:1.1～2；优选为1:2。
[0037]步骤(2)中所述的有机溶剂为二氯乙烷。
[0038]步骤(2)中所述的有机溶剂的用量为按每毫摩尔(mmol)中间体1配比1～2mL有机溶剂计算；优选为按每毫摩尔中间体1配比1.33mL有机溶剂计算。
[0039]步骤(2)中所述的保护性气体为氮气。
[0040]步骤(2)中所述的回流反应的时间为6～8h；优选为7h。
[0041]步骤(2)中所述的氟化氢(HF)溶液的浓度为质量百分比48％～55％。
[0042]步骤(2)中所述的氟化氢溶液的用量为按每毫摩尔(mmol)中间体1配比3～5mL氟化氢溶液计算；优选为按每毫摩尔中间体1配比3.33mL氟化氢溶液计算。
[0043]步骤(2)中所述的搅拌的时间为20～30min；优选为30min。
[0044]步骤(2)中所述的碳酸钾溶液的浓度为质量百分比5％。
[0045]步骤(2)和(3)中所述的纯化为采用柱层析进行纯化；其柱层析条件为：三氯甲烷与乙醇的体积比(CHCl3/EtOH)为50:1；硅胶200～300目。
[0046]步骤(3)中所述的中间体2、对二甲氨基苯甲醛和哌啶的摩尔比为1:5:1.2～1.5；优选为1:5:1.25。
[0047]步骤(3)中所述的有机溶剂为吡啶。
[0048]步骤(3)中所述的有机溶剂用为按每摩尔中间体2配比25mL有机溶剂计算。
[0049]步骤(3)中所述的反应的时间为2～5min；优选为3min。
[0050]步骤(3)中所述的洗涤为采用乙酸乙酯进行洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测Aβ寡聚体的荧光探针，其特征在于，结构通式如式(I)所示：2.权利要求1所述的检测Aβ寡聚体的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：(1)制备中间体1
①
将对羟基苯甲醛、N
‑
乙酰甘氨酸和乙酸钠加入到有机溶剂中混合均匀，然后加热至110
±
5℃进行回流反应，待反应结束后加入乙醇冷却至室温析出晶体，过滤，洗涤，得到黄色固体；
②
将黄色固体、甲胺水溶液和碳酸钾加入到有机溶剂中，加热至80
±
5℃进行回流反应，待反应结束后冷却至室温，并调节pH值至中性，再降温析出固体，过滤，干燥，得到中间体1；(2)制备中间体2将中间体1溶于有机溶剂中，加入三溴化硼二氯甲烷溶液，在保护性气体氛围下，加热至110
±
5℃进行回流反应，待反应结束后冷却、过滤、洗涤，然后加入氟化氢溶液搅拌均匀，再依次用乙酸乙酯、碳酸钾溶液和水萃取，浓缩、纯化，得到中间体2；(3)制备荧光探针将中间体2、对二甲氨基苯甲醛和哌啶加入到有机溶剂中，在100
±
5℃条件下进行反应，待反应结束后浓缩、洗涤、纯化，得到所述检测Aβ寡聚体的荧光探针。3.根据权利要求1所述的检测Aβ寡聚体的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)
①
中所述的对羟基苯甲醛，N
‑
乙酰甘氨酸和乙酸钠的摩尔比为1：0.9～1.1:0.7～1.3；步骤(1)
②
中所述的黄色固体、碳酸钾和甲胺的摩尔比为1：1.5：4；步骤(2)中所述的中间体1和三溴化硼二氯甲烷的摩尔比为1:1.1～2；步骤(3)中所述的中间体2、对二甲氨基苯甲醛和哌啶的摩尔比为1:5:1.2～1.5。4.根据权利要求1所述的检测Aβ寡聚体的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)
①
中所述的有机溶剂为乙酸酐；步骤(1)
②
中所述的有机溶剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜金武，王宇轩，张雷，李晶，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：