反向肽疫苗制造技术

本发明专利技术涉及疫苗组合物和此类组合物用于治疗和预防病毒感染的用途，所述疫苗组合物包含肽，所述肽由开放阅读框（ORF）编码，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。翻译的正义RNA相反的方向编码。翻译的正义RNA相反的方向编码。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】反向肽疫苗
专利

[0001]本专利技术涉及疫苗组合物和此类组合物用于治疗和预防病毒感染的用途，所述疫苗组合物包含肽，所述肽由开放阅读框(ORF)编码，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。
[0002]专利技术背景
[0003]流感是一个严重的全球健康问题，每年感染世界人口的多达20％，导致全球多达500万例严重疾病和超过30万人死亡。仅在美国，每年估计有超过30,000人死亡以及近30万人住院治疗是由于流感感染。随着最近新的、严重的和可能复发的季节性疾病的出现，世界卫生组织正在鼓励开展广泛的疫苗接种运动，以降低流感引起的肺炎的发病率。有效地降低流感的发病率将需要持续的密集的监测、增加目前可用的流感疫苗的使用、以及能够提供更广泛的保护以防止流感的毒株移位和漂变(shift
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and
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drift)的替代的疫苗和抗病毒药物的可用性。成功的流感疫苗接种运动能够产生巨大的社会和经济影响。
[0004]对流感的免疫反应是由先天免疫和适应性免疫共同控制的。对流感的先天免疫反应限制了最初的病毒复制，但相对来说是非特异性的。流感病毒的有效清除需要强大的适应性免疫反应。常规的流感疫苗旨在通过诱导针对流感病毒的体液免疫来引起这种适应性免疫反应。分泌性IgA和IgM抗体介导的体液免疫提供了对初始感染建立的保护，而IgG抗体在已建立的感染中中和新复制的病毒。CD4+T细胞反应可能有助于体液免疫的发展，并在同型转换为IgG中以及更高亲和力抗体和CTL记忆的产生中发挥作用。这由以下发现得到强调，即在人类中血凝素(HA)特异性CD4+T细胞在流感疫苗接种后增殖，并有助于异型流感抗体反应的发展。
[0005]尽管它们具有诱导体液免疫的能力，但常规的流感疫苗并非完全具有保护作用。这至少部分是由于抗原变异的发生。此外，人们认为细胞介导的免疫可能在预防流感中起着关键作用。CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导病毒清除，并且已显示出对不同亚型的甲型流感病毒具有交叉反应性反应。这可能有助于解释在年龄较大和接种过流感疫苗或以前多次接触过流感病毒的个体中疾病相对较少的原因。
[0006]目前市场上的流感疫苗每年更新一次。它们的设计是基于世界卫生组织每年的菌株建议，并且它们是在流感季节或大流行开始之前制造的。目前的流感疫苗诱导针对病毒表面上HA和神经氨酸酶(NA)糖蛋白的保护性体液免疫反应。然而，病毒HA和NA糖蛋白极易受到频繁和不可预测的抗原漂变以及导致抗体识别丧失的较不频繁但更严重的移位突变的影响。这就需要经常开发新的疫苗，以匹配感染人群的目前的病毒血清型。因此，现有流感疫苗的生产成本很高，并且不太可能对季节中期出现的新菌株(例如2009年H1N1猪流感、H5N1、H7N9)起到保护作用。此外，这些疫苗被设计来提供基于抗体的保护，很少考虑对于从体内消除病毒感染的细胞而言重要的细胞介导的免疫的诱导。
[0007]FDA已经批准了几种四价疫苗(预防两种甲型流感和两种乙型流感病毒)。虽然这些疫苗提供了比常规的流感疫苗更广泛的保护，但它们仍然不太可能对季节中出现的新菌株或新兴的大流行菌株起到保护作用，并且生产成本高昂。此外，与常规的流感疫苗一样，
四价疫苗不是被设计来引起对于从体内清除病毒感染的细胞很重要的细胞介导的免疫。
[0008]因此，需要一种针对所有季节性流感毒株和大流行毒株提供多年(如果不是整个寿命)的广泛保护的“通用”流感疫苗。开发有效的通用的流感疫苗可以减少对未来流感大流行的担忧，并且比按照目前的做法开发、制造和施用年度的季节性流感疫苗更具成本效益。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术涉及一种疫苗组合物，其包含所述免疫原性肽由开放阅读框(ORF)编码的免疫原性肽，所述ORF由ssRNA病毒(例如流感病毒)的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。免疫原性肽包含能够被CD8+T细胞识别的表位。
[0011]本申请的专利技术人令人惊讶地鉴定出多种肽，所述肽由感染了流感病毒的细胞上的MHC I类分子递呈和由ORF编码，所述ORF由流感病毒节段(segment)8的基因组负链的一部分编码。该ORF在人流感病毒中普遍保守，并且因此被认为赋予此类病毒选择性的优势。疫苗组合物中包括由该保守的ORF编码的一种或多种肽可以赋予针对多种人流感病毒毒株的保护能力，克服由它们的抗原移位和漂变趋势引起的问题。疫苗组合物中包括多种这样的肽(每种肽能够结合不同的HLA超型)可以提供对具有不同HLA类型的个体有效的广谱疫苗。
[0012]本申请的专利技术人认为，感染了其他ssRNA病毒(如丝状病毒(filovirus)或黄病毒(flavivirus))的细胞也可以在它们的MHC I类分子上递呈由保守的ORF编码的肽，所述ORF由基因组的一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。疫苗组合物中包括这些肽中的一种或多种可以赋予针对多种病毒种类、菌株或血清型的保护能力，在病毒家族中提供交叉保护。
[0013]因此，本专利技术提供了一种疫苗组合物，其包含免疫原性肽，所述免疫原性肽包含来自多肽的CD8+T细胞表位，所述多肽由开放阅读框(ORF)编码，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。
[0014]本专利技术进一步提供：
[0015]‑
一种预防或治疗病毒感染的方法，包含将本专利技术的疫苗组合物施用于感染了或有风险感染ssRNA病毒的个体；
[0016]‑
一种鉴定免疫原性肽的方法，所述免疫原性肽包含来自ORF的CD8+T细胞表位，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码，所述方法通过以下步骤进行：
[0017](a)鉴定ORF，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码；
[0018](b)预测由ORF编码的多肽的序列；以及
[0019](c)评估结合MHC I类分子的肽是否包含存在于预测序列中的序列，
[0020]从而鉴定免疫原性肽，所述免疫原性肽包含能够被CD8+T细胞识别的表位；
[0021]‑
一种免疫原性肽，其包含来自多肽的CD4+T细胞表位，所述多肽由ORF编码，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码；以及
[0022]‑
一种确定甲型流感病毒的大流行潜力的方法，所述方法包括以下步骤：(i)鉴定第一ORF，所述第一ORF由甲型流感病毒的基因组的节段8的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码；(ii)确定第一ORF中包含的密码子数量；以及(iii)将第一ORF中
包含的密码子数量与第二ORF中包含的密码子数量进行比较，所述第二ORF由已知的大流行甲型流感病毒的基因组的节段8的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种疫苗组合物，其包含免疫原性肽，所述免疫原性肽包含来自多肽的CD8+ T细胞表位，所述多肽由开放阅读框（ORF）编码，所述ORF由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其包含两种或更多种免疫原性肽。3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其包含两种或更多种免疫原性肽，每种免疫原性肽包含来自多肽的不同的CD8+ T细胞表位，所述多肽由开放阅读框（ORF）编码，所述开放阅读框由ssRNA病毒的基因组的至少一部分按照与能够翻译的正义RNA相反的方向编码。4.根据前述权利要求的任一项所述的疫苗组合物，其包含至少一种与至少两种不同的HLA超型相互作用的免疫原性肽。5.根据前述权利要求的任一项所述的疫苗组合物，其中所述多肽增强ssRNA病毒在人类中的适应性。6.根据前述权利要求的任一项所述的疫苗组合物，其中所述ssRNA病毒是反义ssRNA病毒，并且所述ORF是反义的。7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述反义ssRNA病毒是正粘病毒。8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中所述正粘病毒是流感病毒。9.根据权利要求8所述的疫苗组合物，其中所述流感病毒是甲型流感病毒。10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其中所述ORF由甲型流感病毒的基因组的节段8的至少一部分编码。11.根据权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述ORF的长度为至少85个密码子。12.根据权利要求10或11所述的疫苗组合物，其中所述ORF的长度为至少167个密码子。13.根据权利要求10至12的任一项所述的疫苗组合物，其中所述ORF的长度为至少216个密码子。14.根据权利要求12或13所述的疫苗组合物，其中所述甲型流感病毒是西班牙流感病毒或重组的西班牙流感病毒。15.根据权利要求14所述的疫苗组合物，其中所述ORF包含SEQ ID NO. 56的序列或其变体，或者SEQ ID NO: 57的序列或其变体。16.根据权利要求9至15的任一项所述的疫苗组合物，其中所述CD8+ T细胞表位在人甲型流感病毒之间是保守的。17.根据权利要求9至16的任一项所述的疫苗组合物，其中所述CD8+ T细胞表位在人甲型流感病毒和猪、马和/或禽甲型流感病毒之间是保守的。18.根据权利要求9至17的任一项所述的疫苗组合物，其中所述CD8+ T细胞表位存在于猪、马和/或禽甲型流感病毒中的长度为至少85个、至少167个或至少216个密码子的预测的ORF中。19.根据权利要求17或18所述的疫苗组合物，其中猪甲型流感病毒是H1N1血清型。20.根据前述权利要求的任一项所述的疫苗组合物，其包含一种或多种在SEQ ID NO: 16至53中列出的肽。21.根据权利要求1至6的任一项所述的疫苗组合物，其中所述ssRNA病毒是丝状病毒。22.根据权利要求21所述的疫苗组合物，其中所述丝状病毒是埃博拉病毒或马尔堡病毒。
23.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉米拉，
申请(专利权)人：埃默杰克斯疫苗控股有限公司，
类型：发明
国别省市：