疫苗组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，其包含具有一个或多个CD8+T细胞表位的丝状病毒肽，其中所述肽连接至纳米颗粒。所述肽连接至纳米颗粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疫苗组合物
专利

[0001]本专利技术涉及包含黄病毒肽的疫苗组合物，以及这种组合物在治疗和预防黄病毒感染中的用途。
[0002]专利技术背景黄病毒是一类阳性单链包膜RNA病毒，可能感染人类并严重威胁公共健康。尤其是，黄病毒是寨卡热（Zika fever）、登革热、黄热病和西尼罗河热的病原体。这些疾病通常以包括发热、呕吐、头痛、关节痛和肌肉痛的症状为特征，尽管每种疾病也可能伴有更严重的症状。例如，寨卡病毒在怀孕期间的母婴传播可能导致脑畸形，并且寨卡病毒感染也与格林-巴雷综合征（Guillain-Barr
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syndrome）有关。 登革热可能发展成威胁生命的登革出血热综合症或登革热休克综合症。黄热病可能会引起肝脏损害，从而导致出血和肾脏问题。 西尼罗河热可能扩散到神经系统，引起脑炎或脑膜炎。
[0003]黄病毒是虫媒病毒，这意味着它们是通过受感染的节肢动物媒介（例如蚊子和壁虱）传播的。 黄病毒的地理分布主要由节肢动物媒介决定。 在大多数情况下，这些媒介仅限于热带和亚热带地区，例如东南亚和南美。 但是，气候变化似乎正在扩大某些病媒的分布，从而增加处于感染黄病毒感染风险的人群。 此外，已经证明引起传播寨卡病毒和黄热病病毒的蚊子能够适应高密度城市地区的生存。 因此，重要的是找到有效的方法来遏制黄病毒感染。
[0004]尽管某些黄病毒（例如西尼罗河病毒）仅偶然感染人类，但其他黄病毒（例如黄热病病毒、登革热病毒和寨卡病毒）主要存在于节肢动物-人生命周期中。 这种黄病毒在人宿主中生长良好，病毒滴度高，使感染可以循环回节肢动物媒介并转移到新的人宿主上。 在这两种情况下，媒介引起的传播以及感染其他物种（如猴子和鸟类）的能力都意味着黄病毒感染倾向于迅速而轻松地传播。 因此，控制黄病毒感染的传播具有挑战性。
[0005]黄病毒基因组的结构也使得控制扩散更具挑战。 存在很少的用于单链RNA复制的校对和校正机制。 因此，在复制过程中产生的突变经常保留在基因组中，并传递给下一代。因此，黄病毒进化迅速。
[0006]尽管存在一种安全有效的黄热病疫苗，但寨卡病毒、登革热病毒或西尼罗河病毒并非如此。存在一种登革热病毒疫苗，但仅建议用于以前感染过登革热病毒的人，因为以前未感染过这种病毒的人的结局可能会恶化。 暴露于一种血清型的登革热病毒（例如DENV-1、DENV-2、DENV-3或DENV-4）可能会恶化随后对另一种登革热血清型的感染，因此目前正在临床试验的登革热疫苗在其制剂中包括登革热血清型。 由于寨卡病毒与登革热病毒密切相关，因此任何寨卡病毒疫苗也都需要将抗体依赖的登革热病毒感染增强的可能性降至最低。因此，需要针对寨卡病毒、登革热病毒和西尼罗河病毒感染的有效疫苗。
[0007]专利技术概述本专利技术涉及黄病毒疫苗组合物，其刺激免疫反应，同时避免通常与含病毒的疫苗相关的不良临床作用。该疫苗组合物可提供针对多种黄病毒（例如寨卡病毒、登革热病毒和/或西尼罗河病毒）和/或特定物种的多种谱系或血清型（例如非洲寨卡病毒、亚洲寨卡病毒、
DENV-1、 DENV-2、DENV-3和/或DENV-4）的保护。
[0008]本申请的专利技术人惊奇地发现，纳米颗粒（例如金纳米颗粒）可以用于诱导对设计成刺激针对黄病毒的T细胞应答的疫苗组合物的有效应答。纳米颗粒的使用消除了在疫苗组合物中使用病毒的需要。 还避免了可能在临床中与不良反应相关的传统佐剂的使用。因此，降低了个体在施用疫苗组合物后发生不良反应的可能性。
[0009]本专利技术人还鉴定了在不同黄病毒之间保守的并且由MHC分子呈递到被那些病毒感染的细胞上的多个肽。 在疫苗组合物中包含这种保守的肽可以赋予针对多种黄病毒和/或特定物种的多种谱系或血清型的保护能力。 在疫苗组合物中包含与不同的HLA超型结合的多个保守肽可产生对具有不同HLA类型的个体有效的疫苗。
[0010]因此，本专利技术提供了一种疫苗组合物，其包含黄病毒肽，所述黄病毒肽包含一个或多个SEQ ID NO：1至10所示的CD8 + T细胞表位。在一些方面，所述黄病毒肽可以连接至纳米颗粒。
[0011]本专利技术还提供：
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预防或治疗黄病毒感染的方法，包括将前述权利要求中任一项的疫苗组合物施用至感染黄病毒或有感染黄病毒风险的个体； 和
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用于预防或治疗个体中黄病毒感染的方法的本专利技术的疫苗组合物。
[0012]附图简述图1：分析活化的PBMC的CD8水平，以确定该细胞群的扩增。 所有5种肽均导致（P1-5）细胞扩增。 无负载的T2细胞（T2）充当对照。 误差线代表重复实验的标准偏差。
[0013]图2：用肽负载的T2激活后，PBMC的CD8 +群体的CD107a表达。 所有5个肽（P1-5）表位均激活了CD8 + T细胞，以黄病毒肽特有的方式对载有肽的T2细胞作出反应。 误差线代表重复实验的标准偏差。 无负载的T2细胞（T2）充当对照。
[0014]图3：用肽负载的T2s激活后，PBMC CD8 +群体中的IFNγ表达。 所有5个肽（P1-5）表位均激活了CD8 + T细胞，以黄病毒肽特有的方式对载有肽的T2细胞作出反应。 未加载的T2细胞（T2）充当对照。 误差线代表重复样品的标准偏差。
[0015]图4：研究了用合并的寨卡肽（P1-P5）刺激的PMBC杀死寨卡病毒感染的细胞的能力。 用载有肽的T2激活PBMC。 测量了被刺激的PBMC对未感染的HepG2细胞（HepG2；对照）或被寨卡病毒（ZIKV）感染的HepG2细胞的响应（CD8 + T细胞扩增，CD107a表达，IFNγ表达）。 暴露于健康HepG2细胞的Zika肽刺激的PMBC显示约3％的CD8 +细胞扩增，而暴露于寨卡感染的HepG2细胞的Zika肽刺激的PMBC显示约16％的CD8 +细胞扩增。 暴露于寨卡病毒感染的HepG2细胞的寨卡肽刺激的PMBC的CD107a表达和IFNγ表达明显高于暴露于未感染HepG2细胞的寨卡肽刺激的PMBC。 这表明PMBC可“识别”寨卡病毒感染的细胞。
[0016]图5：用200ng NP-登革热肽免疫转基因A2小鼠。 分离脾细胞，然后暴露于寨卡或登革热感染的细胞。 图5显示HepG2靶细胞含有能够模拟来自转基因A2小鼠的脾细胞的I类肽靶。 肽的酸剥离使细胞无反应。
[0017]图6：用200ng NP-登革热肽免疫转基因A2小鼠。 分离脾细胞，然后暴露于寨卡或登革热感染的细胞。 用黄病毒感染HepG2细胞会置换自身肽，并导致病毒衍生肽暴露于细胞表面，如图6所示。图6显示未免疫小鼠的脾细胞对登革热或寨卡病毒感染的细胞无反应。 相反，用NP-登革热或NP-Zika肽免疫的A2小鼠能够杀死登革热或Zika感染的HepG2细胞。
[0018]专利技术详述疫苗组合物本专利技术提供了包含黄病毒肽的疫苗组合物，所述黄病毒肽包含一个或多个SEQ ID NO：1至10所示的CD8 + T细胞表位。该疫苗组合物具有许多益处，这些益处将从下面的讨论中变得显而易见。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种疫苗组合物，其包含黄病毒肽，所述黄病毒肽包含一个或多个在SEQ ID NO：1至10中列出的CD8 + T细胞表位。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述黄病毒肽附着于纳米颗粒。3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中所述纳米颗粒是金纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒或硅纳米颗粒。4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中所述金纳米颗粒被α-半乳糖和/或β-GlcNHAc包被。5.根据权利要求2至4中任一项所述的疫苗组合物，其中所述黄病毒肽通过接头附着于所述纳米颗粒。6.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含两种或更多种黄病毒肽，每种包含不同的CD8 + T细胞表位。7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述两种或更多种黄病毒肽是SEQ ID NO：1至10中列出的两种或更多种肽。8.根据权利要求6或7所述的疫苗组合物，其中两种或更多种黄病毒肽中的每一种都附着于纳米颗粒。9.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含至少两种包含CD8 + T细胞表位的黄病毒肽，每种与不同的HLA超型相互作用。10.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含至少一种黄病毒肽，所述黄病毒肽包含与至少两种不同的HLA超型相互作用的CD8 + T细胞表位。11.根据权利要求9或10所述的疫苗组合物，其中所述至少两种不同的HLA超型选自HLA-A1、HLA-A2、HLA-A3、HLA-A24、HLA-B7、HLA-B8、HLA-B27、 HLA-B...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳伦斯，
申请(专利权)人：埃默杰克斯疫苗控股有限公司，
类型：发明
国别省市：