NK细胞类外泌体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开的是NK细胞类外泌体(NKEM)的制备方法及其应用。该方法包括：NK细胞培养‑‑制备NK细胞外泌体(NKE)‑‑制备NKEM。本发明专利技术制备的NKEM和NKE不仅具有抗病毒、抗癌的作用，而且还有美肤的功效。和NKE相比，NKEM产量更高；把培养的同一份NK细胞平分为2半，分别制备NKE和NKEM，后者的产量是前者的15倍左右。这不但克服了NKE不能大量生产的瓶颈，而且也对其它细胞外泌体产品的产业化具有一定的参考价值。

【技术实现步骤摘要】
NK细胞类外泌体的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及NK细胞类外泌体的制备方法及其应用。
技术介绍
NK细胞是机体免疫系统的一个重要成员。NK细胞不但具有直接杀灭并清除衰老、死亡、癌变、感染细胞的杀伤作用，而且还可通过其分泌的多种活性因子发挥重要的免疫调节功能。在临床研究及临床应用中已经充分证明，高活性NK(HANK)细胞不但可以有效地预防早早癌发生及癌症治疗后复发，而且对白血病及多种实体瘤的有效率高达80％以上；不但可以消减癌症负荷，使原发癌及转移癌缩小或消失，而且还能解除癌症疼痛，缓解癌症疲劳；不但可增强机体免疫力，提升T细胞及NK细胞活性及含量，而且还能抑制自身免疫反应，缓解糖尿病、结肠炎及类风湿等多种自身免疫性疾病；不但能治疗亚健康，改善睡眠、提升精力、增强性功能，而且还有显著的美容及美体效果，大多数患者皮肤变得白里透红、面部拉提紧致、容光焕发；增加食欲，减小腰围。NK细胞不但能够抑制病毒(比如西尼罗病毒，WNV)在感染细胞(Vero)中增殖，而且用NK细胞预处理Vero细胞可以使Vero细胞获得抵抗WNV感染的功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.NK细胞类外泌体(NKEM)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS101：分离：把NK细胞培养物转入500ml离心管，2000rpm离心20分钟；上清为NK细胞培养上清液，沉淀为NK细胞；/nS102：收集：把NK细胞培养上清液分装在50ml锥底离心管中，2000X g离心30分钟去除细胞碎片；把去除碎片后的NK细胞培养上清液(NKS)收集在新的容器中，约1000ml，含有大量的NK细胞外泌体(NKE)；/nS103：悬浮：用生理盐水悬浮S101沉淀中的NK细胞，离心洗涤一次，再悬浮在生理盐水中，调整NK细胞浓度为2*10

【技术特征摘要】
1.NK细胞类外泌体(NKEM)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S101：分离：把NK细胞培养物转入500ml离心管，2000rpm离心20分钟；上清为NK细胞培养上清液，沉淀为NK细胞；
S102：收集：把NK细胞培养上清液分装在50ml锥底离心管中，2000Xg离心30分钟去除细胞碎片；把去除碎片后的NK细胞培养上清液(NKS)收集在新的容器中，约1000ml，含有大量的NK细胞外泌体(NKE)；
S103：悬浮：用生理盐水悬浮S101沉淀中的NK细胞，离心洗涤一次，再悬浮在生理盐水中，调整NK细胞浓度为2*107/ml，约500ml；
S104：冻融：把S103的NK细胞悬浮液放液氮中快速冷冻，然后37℃水浴充分融解；重复冻融5次，形成NK细胞裂解液；
S105：挤压：将S104的NK细胞裂解液用LiposofastLF-50，经10um、1um、200nm3个不同孔径的聚碳酸酯滤膜依次挤压5次，形成约150nm的NK细胞脂质体样纳米颗粒(NKL)；
S106：合并：把S105的NKL与S101收集的NKS合并形成NKLS，共约1500ml；
S107：浓缩纯化：用切向流过滤(TFF)系统，300K中空纤维去除NKLS中的细胞代谢小分子产物及NK细胞挤压过程中产生的除脂质体之外的细胞碎片，截留NKE及NKL，并浓缩至300ml，获得80-150nm的NKE及NKL混合物，即NK细胞类外泌体(NKEM)。


2.根据权利要求1所述的NK细胞类外泌体(NKEM)的制备方法，其特征在于，在所述的S101之前，还包括：
S100：制备NK细胞外泌体(NKE)。


...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明杰，马云坤，
申请(专利权)人：深圳市汉科生命工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44