一种NK细胞的培养方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种NK细胞的培养方法及其应用，属于细胞培养技术领域。所述的NK细胞的培养方法，包括如下步骤：(1)抗体包被；(2)脐血单核细胞的分离及血清制备；(3)NK细胞活化培养；(4)NK细胞的扩增培养。本发明专利技术提供的分离培养方法解决了淋巴细胞难获得的问题，培养初始阶段排除了红细胞的污染，后期收获的NK细胞纯度均可达到90％以上，弥补了肿瘤病人NK细胞培养纯度低的不足，在同种异体NK细胞应用方面具有巨大的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种NK细胞的培养方法及其应用
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种NK细胞的培养方法及其应用。
技术介绍
NK细胞又称自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK细胞)，是机体内重要的免疫细胞，负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞，这种天然杀伤活性无需抗原致敏，并且无MHC限制性。它能自己识别和攻击外来病毒、癌细胞和异常细胞，一旦被激活，通过释放颗粒酶和穿孔素等杀伤性介质及分泌大量细胞因子直接攻击靶细胞，或通过抗体依赖的细胞毒作用(ADCC效应)杀伤肿瘤细胞，或通过诱导Fas/Fasl和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Trail)分子使靶细胞凋亡。过继免疫疗法是取对肿瘤有免疫力的供者淋巴细胞，或患者自体淋巴细胞在体外活化、扩增后，再回输入患者体内发挥抗肿瘤作用。NK细胞由于独特的抗肿瘤特点，在肿瘤免疫中的作用越来越受到重视。目前，NK细胞不仅广泛用于肿瘤病人的免疫治疗，还可应用于预防肿瘤发生，提高免疫能力的作用。近年来，由于NK细胞扩增方法的进展，使得NK细胞在过继细胞治疗中的应用变为可能，现在可以将NK细胞从仅几本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NK细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)抗体包被/n用生理盐水稀释NK细胞激活用单抗，并用稀释好的单抗包被T175培养瓶，抗体包被浓度为20～50μg/mL，然后孵育；/n(2)脐血单核细胞的分离及血清制备/n羟乙基淀粉与人血按体积比4:1混合，离心，去除血浆和红细胞，得到浓缩后的细胞悬液；向浓缩后的细胞悬液中加入Ficoll淋巴细胞分离液，离心分离得到单个核细胞，并使用X-VIVO15培养基将上述单个核细胞的浓度调整至约1～2×10

【技术特征摘要】
1.一种NK细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)抗体包被
用生理盐水稀释NK细胞激活用单抗，并用稀释好的单抗包被T175培养瓶，抗体包被浓度为20～50μg/mL，然后孵育；
(2)脐血单核细胞的分离及血清制备
羟乙基淀粉与人血按体积比4:1混合，离心，去除血浆和红细胞，得到浓缩后的细胞悬液；向浓缩后的细胞悬液中加入Ficoll淋巴细胞分离液，离心分离得到单个核细胞，并使用X-VIVO15培养基将上述单个核细胞的浓度调整至约1～2×106个/mL；同时将分离得到的血浆灭活，然后离心取上清备用；
(3)NK细胞活化培养
将分离后的细胞转移至包被并用生理盐水清洗过的培养瓶中，然后加入柴胡皂苷、IL-2和IL-15，它们的终浓度约为10μg/mL、500IU/mL和25ng/mL，最后加入AB型脐血浆；
(4)NK细胞的扩增培养
观察细胞状态，当观察到细胞的克隆团较多且较大时，将其转入新的培养瓶中，并补加已经添加IL-2的X-VIVO15培养基，IL-2的终浓度为500IU/mL，随后进行隔天补液，使细胞浓度维持在1×106～2×106个/mL，在培养第18～21天后，收集的细胞即为NK细胞。


2.根据权利要求1所述的NK细胞的培养方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：嵐山芮，魏伟，许超，
申请(专利权)人：广州瑞铂茵健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44