一种间充质干细胞培养方法技术

本发明专利技术提供一种间充质干细胞培养方法，A：放置细胞袋，先将无血清无外源蛋白成份明确间充质干细胞培养基放置入细胞的细胞袋中，随后通过微载体Cytodex 1贴壁式干细胞培养方式，将细胞袋放置在培养装置内；B：培养细胞，将细胞袋放置在培养装置的内部进行4‑5天的周期性培养，期间，每隔一天需要从细胞袋无菌取样口用无菌注射器抽取5 ml‑10 ml培养液进行镜检及支原体、内毒素等安全性质量检测，此外，细胞袋需要放置在防沉机构上，按照预设的程序开始进行间歇性的摇晃，此间充质干细胞培养方法的结构简单、操作便捷，可以通过送料机构将细胞袋自行送入到培养装置内，而防沉机构的存在便于更好的对细胞进行培养，此培养装置的实用性较高。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞培养方法
本专利技术涉及间充质干细胞培养
，尤其涉及一种间充质干细胞培养方法。
技术介绍
间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且安全无不良反应，间充质干细胞不仅存在于骨髓中，也存在于骨骼肌、骨外膜和骨小梁中。由于它分化的组织类型十分广泛，因此临床应用价值不菲。但是在现在的细胞培养中，多为人为式放置细胞袋，同时，细胞袋在长时间的培养中会产生聚集沉降的现象，不利于使用者对细胞进行培养。因此，有必要提供一种新的间充质干细胞培养方法解决上述技术问题。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术是提供一种可以进行自动式上料和间歇式晃动的间充质干细胞培养方法。本专利技术提供的间充质干细胞培养方法包括：包括如下步骤：A：放置细胞袋，先将无血清无外源蛋白成份明确间充质干细胞培养基放置入细胞的细胞袋中，随后通过微载体Cytodex1贴壁式干细胞培养方式，将细胞袋放置在培养培养装置内；B：培养细胞，将细胞袋放置在培养装置的内部进行4-5天的周期性培养，期间，每隔一天需要从细胞袋无菌取样口用无菌注射器抽取5ml-10ml培养液进行镜检及支原体、内毒素等安全性质量检测，此外，细胞袋需要放置在防沉机构上，按照预设的程序开始进行间歇性的摇晃，防止细胞在细胞袋内产生聚集沉降现象即可；C：提取细胞，培养4-5天后将细胞微载体悬浮液从细胞袋出液管道输出至细胞收集瓶，弃上清，DPBS洗涤一遍，加入Tryple消化酶，温和摇匀消化10min-15min。静置，待微载体沉降后，吸取细胞悬浮液。DPBS再洗涤2遍，吸取细胞悬浮液，离心400*g，5min，收集细胞，计数。所述步骤A-B中的培养装置包括箱体、送料机构、闭合机构、防沉机构、支撑垫和恒温机构，所述箱体的底部四角均固定安装有支撑垫，所述箱体的底端固定安装有送料机构，所述箱体的一侧固定安装有闭合机构，所述送料机构的顶部固定安装有防沉机构，所述箱体的内部顶端固定安装有恒温机构，所述箱体的一端固定安装有安装座，所述安装座的顶部固定安装有连接管，所述连接管通过导管与换风装置的输出端固定连接，所述导管的一端与连接管的一端固定连接，且导管的另一端与换风机装置的输出端固定连接。所述送料机构包括电机、送料架、送料板、安装架、丝杆、移动块、滑动架和滑轮，所述箱体的内部固定安装有安装架，所述安装架的一端固定安装有电机，所述安装架内通过转轴转动连接有丝杆，所述电机的输出端穿过安装架与丝杆的一端固定连接，所述安装架的两侧均设有送料架，且送料架均固定安装在箱体的内部底端，两个所述送料架均通过滑轮滑动连接有滑动架，且滑轮均通过转轴转动连接在滑动架的一侧，两个所述滑动架分别固定安装在送料板的底部两端，所述送料板的底部中央固定安装有移动块，所述移动块与丝杆啮合传动连接。所述闭合机构包括安装架、闭合门、观察窗、通风网、密封条和把手，所述箱体的一侧固定安装有安装架，所述安装架通过转轴转动连接有闭合门，所述闭合门的一侧固定安装有密封条，所述闭合门的中央固定安装有观察窗，所述观察窗的底部设有通风网，且通风网固定安装闭合门的底端，所述闭合门远离密封条的一侧固定安装有把手。所述防沉机构包括承载板、转动电机、凸轮、限位柱、弹簧、安装柱和转动轮，所述送料板的顶部固定安装有转动电机，所述转动电机的输出端固定安装有凸轮，所述送料板的顶部设有承载板，所述承载板的底部四角均固定安装有限位柱，所述限位柱的底端均滑动连接在承载板上，且承载板的底部均套接有弹簧，所述弹簧安装在送料板的顶部，且送料板的顶部开设有与弹簧相互配合的凹槽，所述承载板的底部中央固定安装有安装柱，所述安装柱的底端通过转轴转动连接有转动轮，且转动轮与凸轮之间传动配合。所述恒温机构包括温度传感器、基架、电热器、温度调节器和显示器，所述箱体的内部顶端固定安装有基架，所述基架的底部固定安装有电热器，所述基架的一侧固定安装有温度传感器，所述箱体的顶部固定安装有温度调节器，所述温度调节器的一侧设有显示器，且显示器固定安装在箱体的顶部，所述温度传感器、电热器、温度调节器和显示器之间均电性连接。所述送料架的一侧均开设有与滑轮相互配合的滑槽。所述承载板的顶部固定安装有橡胶垫。所述电热器的底部固定安装有防护网。与相关技术相比较，本专利技术提供的间充质干细胞培养方法具有如下有益效果：本专利技术提供间充质干细胞培养方法：使用者可以将组好的细胞袋放置在送料机构上，随后通过送料机构将细胞袋自行送入到培养装置的内部，随后通过闭合机构实现对箱体的封闭，实现对箱体内细胞袋的保护，此外，为了防止细胞袋在箱体内长时间的培养使细胞在细胞袋的内部产生聚集沉降的现象，培养装置上设有防沉机构可以间歇性的对细胞袋进行摇晃，使细胞可以更好的进行培养，此外，可以通过恒温机构对箱体内的温度进行调节，此间充质干细胞培养方法的结构简单、操作便捷，可以通过送料机构将细胞袋自行送入到培养装置内，而防沉机构的存在便于更好的对细胞进行培养，此培养装置的实用性较高。附图说明图1为本专利技术提供的间充质干细胞培养方法流程示意图；图2为本专利技术提供的培养装置整体内部的结构示意图；图3为本专利技术提供的培养装置整体外观的结构示意图；图4为本专利技术提供的送料机构的爆炸结构示意图；图5为本专利技术提供的闭合机构的结构示意图；图6为本专利技术提供的防沉机构的爆炸结构示意图；图7为本专利技术提供的恒温机构的结构示意图。图中标号：1、箱体；2、送料机构；21、电机；22、送料架；23、送料板；24、安装架；25、丝杆；26、移动块；27、滑动架；28、滑轮；3、闭合机构；31、安装架；32、闭合门；33、观察窗；34、通风网；35、密封条；36、把手；4、防沉机构；41、承载板；42、转动电机；43、凸轮；44、限位柱；45、弹簧；46、安装柱；47、转动轮；5、支撑垫；6、恒温机构；61、温度传感器；62、基架；63、电热器；64、温度调节器；65、显示器；7、防护网；8、安装座；9、连接管；10、导管；11、换风装置。具体实施方式下面结合附图和实施方式对本专利技术作进一步说明。请结合参阅图1、图2、图3、图4、图5、图6和图7，其中，图1为本专利技术提供的间充质干细胞培养方法流程示意图；图2为本专利技术提供的整体内部的结构示意图；图3为本专利技术提供的整体外观的结构示意图；图4为本专利技术提供的送料机构的爆炸结构示意图；图5为本专利技术提供的闭合机构的结构示意图；图6为本专利技术提供的防沉机构的爆炸结构示意图；图7为本专利技术提供的恒温机构的结构示意图。本专利技术提供一种技术方案：一种间充质干细胞培养方法，包括如下步骤，A：放置细胞袋，先将无血清无外源蛋白成份明确间充质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA：放置细胞袋，先将无血清无外源蛋白成份明确间充质干细胞培养基放置入细胞的细胞袋中，随后通过微载体贴壁式干细胞培养方式，将细胞袋放置在培养装置内；/nB：培养细胞，将细胞袋放置在培养装置的内部进行4-5天的周期性培养，期间，每隔一天需要从细胞袋无菌取样口用无菌注射器抽取 5 ml-10 ml 培养液进行镜检及支原体、内毒素等安全性质量检测，此外，细胞袋需要放置在防沉机构上，按照预设的程序开始进行间歇性的摇晃，防止细胞在细胞袋内产生聚集沉降现象即可；/nC：提取细胞，培养 4-5 天后将细胞微载体悬浮液从细胞袋出液管道输出至细胞收集瓶，弃上清，DPBS 洗涤一遍，加入Tryple消化酶，温和摇匀消化 10 min-15 min；/n静置，待微载体沉降后，吸取细胞悬浮液；/nDPBS 再洗涤 2 遍，吸取细胞悬浮液，离心400*g，5 min，收集细胞，计数；/n所述步骤A-B中的培养装置包括箱体（1）、送料机构（2）、闭合机构（3）、防沉机构（4）、支撑垫（5）和恒温机构（6），所述箱体（1）的底部四角均固定安装有支撑垫（5），所述箱体（1）的底端固定安装有送料机构（2），所述箱体（1）的一侧固定安装有闭合机构（3），所述送料机构（2）的顶部固定安装有防沉机构（4），所述箱体（1）的内部顶端固定安装有恒温机构（6），所述箱体（1）的一端固定安装有安装座（8），所述安装座（8）的顶部固定安装有连接管（9），所述连接管（9）通过导管（10）与换风装置（10）的输出端固定连接，所述导管（10）的一端与连接管（9）的一端固定连接，且导管（10）的另一端与换风装置（11）的输出端固定连接。/n...

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
A：放置细胞袋，先将无血清无外源蛋白成份明确间充质干细胞培养基放置入细胞的细胞袋中，随后通过微载体贴壁式干细胞培养方式，将细胞袋放置在培养装置内；
B：培养细胞，将细胞袋放置在培养装置的内部进行4-5天的周期性培养，期间，每隔一天需要从细胞袋无菌取样口用无菌注射器抽取5ml-10ml培养液进行镜检及支原体、内毒素等安全性质量检测，此外，细胞袋需要放置在防沉机构上，按照预设的程序开始进行间歇性的摇晃，防止细胞在细胞袋内产生聚集沉降现象即可；
C：提取细胞，培养4-5天后将细胞微载体悬浮液从细胞袋出液管道输出至细胞收集瓶，弃上清，DPBS洗涤一遍，加入Tryple消化酶，温和摇匀消化10min-15min；
静置，待微载体沉降后，吸取细胞悬浮液；
DPBS再洗涤2遍，吸取细胞悬浮液，离心400*g，5min，收集细胞，计数；
所述步骤A-B中的培养装置包括箱体（1）、送料机构（2）、闭合机构（3）、防沉机构（4）、支撑垫（5）和恒温机构（6），所述箱体（1）的底部四角均固定安装有支撑垫（5），所述箱体（1）的底端固定安装有送料机构（2），所述箱体（1）的一侧固定安装有闭合机构（3），所述送料机构（2）的顶部固定安装有防沉机构（4），所述箱体（1）的内部顶端固定安装有恒温机构（6），所述箱体（1）的一端固定安装有安装座（8），所述安装座（8）的顶部固定安装有连接管（9），所述连接管（9）通过导管（10）与换风装置（10）的输出端固定连接，所述导管（10）的一端与连接管（9）的一端固定连接，且导管（10）的另一端与换风装置（11）的输出端固定连接。


2.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述送料机构（2）包括电机（21）、送料架（22）、送料板（23）、安装架（24）、丝杆（25）、移动块（26）、滑动架（27）和滑轮（28），所述箱体（1）的内部固定安装有安装架（24），所述安装架（24）的一端固定安装有电机（21），所述安装架（24）内通过转轴转动连接有丝杆（25），所述电机（21）的输出端穿过安装架（24）与丝杆（25）的一端固定连接，所述安装架（24）的两侧均设有送料架（22），且送料架（22）均固定安装在箱体（1）的内部底端，两个所述送料架（22）均通过滑轮（28）滑动连接有滑动架（27），且滑轮（28）均通过转轴转动连接在滑动架（27）的一侧，两个所述滑动架（27）分别固定安装在送料板（23）的底部两端，所述送料板（23）的底部中央固定安装有移动块（26），所述移动块（26）与丝杆（25）啮合传动连接。

【专利技术属性】
技术研发人员：梅建勋，欧阳建华，汪凯，何伟贤，付引梅，谭慕华，梁键全，
申请(专利权)人：广东美赛尔细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44