新月弯孢霉甾体11β-羟化酶CYP5103B6突变体构建及其应用制造技术

本发明专利技术专利提供了新月弯孢霉甾体C11β‑羟化酶突变体L6、L7，DNA序列如DNA SEQ ID NO：14、DNA SEQ ID NO：16所示。同C11β‑羟化酶CYP5103B6相比，突变体L6、L7转化甾体底物11‑脱氧皮质醇特异性明显提高，副产物明显减少。本发明专利技术专利还提供了基于突变体L6、L7异源过表达的表达载体及其甾体转化工艺，为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵材料(基因和菌种)和基础数据支撑。

【技术实现步骤摘要】
新月弯孢霉甾体11β-羟化酶CYP5103B6突变体构建及其应用摘要本专利技术涉及利用定向进化、定点突变以及利用酿酒酵母表达平台筛选高甾体羟化特异性的C11β-羟化酶CYP5103B6突变体。
：本专利技术应用基因工程和酶工程技术，具体涉及C11β-羟化酶突变体及其应用。
技术介绍
：甾体化合物又称类固醇，是一类以环戊烷多氢菲为母核的化合物。甾体激素类药物具有抗炎、抗感染、抗过敏等药理活性，广泛应用于风湿病、器官移植、内分泌失调等疾病。甾体激素类药物的生理和药理活性取决于甾体骨架特定位点引入的官能基团。目前对甾体结构的改造方法包括通过化学合成法和微生物转化法，或结合两种方法的应用。全化学合成法由于合成过程复杂、副产物不容易分离等，且难以完成关键合成步骤，工业上通常利用微生物转化反应在甾体基本骨架上引入关键的官能团，如在骨架的特定位点引入羟基。氢化可的松(11β，17α，21-三羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮)是人工合成也是天然存在的糖皮质激素，具有抗炎、抗毒、抗休克及免疫抑制作用等。新月弯孢霉(Curvularialu本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.C11β-羟化酶基因突变体L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是在如SEQ ID NO：1所示的序列基础上进行突变，即突变体L1的291位氨基酸由原来的苏氨酸(ACC)突变成亮氨酸密码(TAC)；突变体L2的365位氨基酸由原来的甲硫氨酸(ATG)突变成丙氨酸密码(GCG)；突变体L3的372位氨基酸由原来的丙氨酸(GCC)突变成苯丙氨酸密码(TTC)；突变体L4的291位、365位氨基酸共同突变，即T291Y/M365A；突变体L5的291位、372位氨基酸共同突变，即T291Y/A372F；突变体L6的365位、372位氨基酸共同突变，即M365A...

【技术特征摘要】
1.C11β-羟化酶基因突变体L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是在如SEQIDNO：1所示的序列基础上进行突变，即突变体L1的291位氨基酸由原来的苏氨酸(ACC)突变成亮氨酸密码(TAC)；突变体L2的365位氨基酸由原来的甲硫氨酸(ATG)突变成丙氨酸密码(GCG)；突变体L3的372位氨基酸由原来的丙氨酸(GCC)突变成苯丙氨酸密码(TTC)；突变体L4的291位、365位氨基酸共同突变，即T291Y/M365A；突变体L5的291位、372位氨基酸共同突变，即T291Y/A372F；突变体L6的365位、372位氨基酸共同突变，即M365A/A372F；突变体L7的291位、365位、372位氨基酸共同...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓光，李金红，路福平，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12