抗CD47抗体及其应用制造技术

涉及抗体药物技术领域，尤其涉及一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，包含抗CD47抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用。本发明专利技术的抗CD47抗体或其抗原结合片段具有显著的抗肿瘤活性，与人CD47蛋白的亲和力较高，可阻断SIRPa结合到细胞表面CD47的能力，且不具有显著的红细胞凝集活性，可在制备抗肿瘤的药物中应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD47抗体及其应用
本专利技术涉及抗体药物
，尤其涉及一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，包含抗CD47抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用
技术介绍
CD47蛋白又称整合素相关蛋白(IAP)，属于IgG超家族的一个五次跨膜糖蛋白，广泛表达于不同组织细胞。CD47可与配体TSP-1或SIRPα结合，调控不同的细胞功能，包括细胞迁移、粘附、凋亡，轴突延伸，细胞因子产生及T细胞激活。SIRPα是一个含有典型免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)跨膜蛋白，主要表达于髓系造血细胞膜表面，如巨噬细胞，树突状细胞等。CD47与SIRPα结合后，导致ITIMs的磷酸化，从而招募SHP-1/SHP-2，进而抑制肌球蛋白IIA在吞噬突触的积累，最终抑制吞噬细胞的吞噬功能。肿瘤细胞的“免疫逃逸”被认为是肿瘤发生、发展和抗药的主要机制。肿瘤细胞通过高表达CD47分子，与巨噬细胞表面的SIRPα相互作用，可显著抑制巨噬细胞的吞噬活性，避免被巨噬细胞吞噬掉。当阻断CD47与SIRPα的结合时，可消除因肿瘤导致的免疫抑制或免疫耐受，有效杀伤肿瘤细胞。这为CD47的肿瘤免疫靶向治疗提供了极为有力的理论依据。近年来，国内外针对CD47/SIRPα信号通路的各种治疗方式进行了大量研究，例如抗CD47抗体、抗SIRPα抗体、重组SIRPα蛋白、双特异性抗体。其中，CD47阻断性抗体被认为是其中最有希望的肿瘤治疗方案。人CD47阻断型单抗的有效性已经在多种临床前模型中证实，比如淋巴瘤、膀胱癌、结肠癌、成胶质细胞瘤、乳腺癌、急性淋巴细胞性白血病和急性骨髓性白血病等。此外，由于红细胞、血小板也表达CD47分子，当抗体阻断CD47与SIRPα的相互作用时，可能导致这些细胞失去“别吃我”信号的保护，进而被巨噬细胞吞噬。因此要避免抗CD47抗体的副作用，比如血小板降解，红细胞凝集，红细胞耗竭，贫血等也是应用抗CD47抗体需要考虑的一个重点。因此，需要提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有优异的抗肿瘤活性且不具有显著的红细胞凝集活性。
技术实现思路
本专利技术一方面提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中所述重链可变区包含重链可变区的互补决定区1(HCDR1)、重链可变区的互补决定区2(HCDR2)和/或重链可变区的互补决定区3(HCDR3)，所述轻链可变区包含轻链可变区的互补决定区1(LCDR1)、轻链可变区的互补决定区2(LCDR2)和/或轻链可变区的互补决定区3(LCDR3)。在一些实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：(a1)如SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列；(a2)如SEQIDNO:10、2和11所示的氨基酸序列；(a3)如SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列；和(a4)如SEQIDNO:7、8和9所示的氨基酸序列；(a5)与(a1)、(a2)、(a3)或(a4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR；和(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：(a6)如SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列；(a7)如SEQIDNO:15、16和17所示的氨基酸序列；和(a8)如SEQIDNO:18、19和20所示的氨基酸序列；(a9)与(a6)、(a7)或(a8)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR。在一个具体的实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:1、2和3或与SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:12、13和14或与SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。在一个具体的实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:10、2和11或与SEQIDNO:10、2和11所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:12、13和14或与SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。在一个具体的实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:4、5和6或与SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:15、16和17或与SEQIDNO:15、16和17所示的氨基酸序列具有至少85％，序列同一性的CDR的轻链可变区。在一个具体的实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:7、8和9或与SEQIDNO:7、8和9所示的氨基酸序列具有至少85％，序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:18、19和20或与SEQIDNO:18、19和20所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。在一些具体的实施方案中，根据本专利技术的抗CD47抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些具体的实施方案中，根据本专利技术的抗CD47抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段或人源化抗体或其抗原结合片段。在一些具体的实施方案中，本专利技术提供一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：(b1)如SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:27所示的氨基酸序列；(b2)(b1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和(b3)与(b1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：(b4)如SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28所示的氨基酸序列；(b5)(b4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和(b6)与(b4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些具体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：/n(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：/n(a1)如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；/n(a2)如SEQ ID NO:10、2和11所示的氨基酸序列；/n(a3)如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列；和/n(a4)如SEQ ID NO:7、8和9所示的氨基酸序列；/n(a5)与(a1)、(a2)、(a3)或(a4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR；和/n(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：/n(a6)如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列；/n(a7)如SEQ ID NO:15、16和17所示的氨基酸序列；和/n(a8)如SEQ ID NO:18、19和20所示的氨基酸序列；/n(a9)与(a6)、(a7)或(a8)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180831 CN 2018110091768一种抗CD47抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
(a1)如SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列；
(a2)如SEQIDNO:10、2和11所示的氨基酸序列；
(a3)如SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列；和
(a4)如SEQIDNO:7、8和9所示的氨基酸序列；
(a5)与(a1)、(a2)、(a3)或(a4)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR；和
(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(a6)如SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列；
(a7)如SEQIDNO:15、16和17所示的氨基酸序列；和
(a8)如SEQIDNO:18、19和20所示的氨基酸序列；
(a9)与(a6)、(a7)或(a8)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR。


如权利要求1所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段，其具有：
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:1、2和3或与SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:12、13和14或与SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:10、2和11或与SEQIDNO:10、2和11所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:12、13和14或与SEQIDNO:12、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:4、5和6或与SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:15、16和17或与SEQIDNO:15、16和17所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQIDNO:7、8和9或与SEQIDNO:7、8和9所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的重链可变区，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQIDNO:18、19和20或与SEQIDNO:18、19和20所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的CDR的轻链可变区。


如权利要求1或2所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。


如权利要求1-3之任一项所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段，其中：
(1)所述重链可变区的氨基酸序列选自：
(b1)如SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:27所示的氨基酸序列；
(b2)(b1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b3)与(b1)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区的氨基酸序列选自：
(b4)如SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28所示的氨基酸序列；
(b5)(b4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的、且与(b4)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；和
(b6)与(b4)所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。


如权利要求4所述的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体还含有鼠源的IgG1、IgG2或其变体的重链恒定区，鼠源的k链或其变体的轻链恒定区。


如权利要求1-3之任一项所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段，其中
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:21，SEQIDNO:21经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQIDNO:21功能相同的氨基酸序列或与SEQIDNO:21具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:24，SEQIDNO:24经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQIDNO:24功能相同的氨基酸序列或与SEQIDNO:24具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:22，SEQIDNO:22经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQIDNO:22功能相同的氨基酸序列或与SEQIDNO:22具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:25，SEQIDNO:25经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQIDNO:25功能相同的氨基酸序列或与SEQIDNO:25具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:23，SEQIDNO:23经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，赵立文，宋其峰，朱永强，张亚楠，韩璐薇，金亮，吴文明，
申请(专利权)人：南京圣和药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32