一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程领域，具体涉及一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用，由带有定点活性半胱氨酸的嵌合抗体TG7和一氧化氮供体二乙胺偶氮鎓二醇盐分子通过马来酰亚胺‑双硫键Linker偶联而成。其利用TG7抗体的CD24抗原靶向作用将二乙胺偶氮鎓二醇盐分子富集到CD24阳性肿瘤细胞表面并以抗原抗体复合物的形式内化到细胞内部，提高了该一氧化氮供体分子的治疗指数，避免了其单独使用时的非靶向性所造成的对正常组织细胞的毒副作用，解决了一氧化氮供体的靶向递释问题，为结直肠癌的治疗提供了新的选择，同时也可推广到其他CD24分子过表达的恶性肿瘤治疗中。

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用
技术介绍
目前在世界范围内，恶性肿瘤的发病率与死亡率都呈现显著的上升趋势。具体到结直肠癌，按照世界卫生组织2018年的统计数据，其发病率位居第三位，死亡率位居第二位。临床在用的结直肠癌治疗药物，主要分为化疗药物和生物靶向药物。化疗药物直接依靠具有高毒性的化药小分子杀伤结直肠癌细胞，如5-FU/LV、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨等。而生物靶向药物是通过特异性靶向于结直肠癌细胞表面膜受体而阻断肿瘤相关信号通路。这两类药物是都是单方面发挥作用，即使将两者联合给药也很难发挥互补的效果，如贝伐单抗和西妥昔单抗。因此，开发出一种可以将这两类药物的优点结合起来的抗体小分子药物偶联物(Antibodydrugconjugate,ADC)或许可以产生增效减毒的双重效果。抗体-药物偶联物(ADC)介绍抗体-药物偶联物(ADC)是一类极具开发前景的大分子抗体蛋白与小分子化药的偶联形式。在肿瘤化学治疗进展缓慢的20年，抗体的广泛应用带来了一场肿瘤精准治疗的革命。理论上，但凡对肿瘤细胞表面抗原有特异性结合能力的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于：利用含有马来酰亚胺环和双硫键的Linker将一氧化氮供体分子和突变的抗CD24嵌合抗体定点连接起来，形成抗体一氧化氮偶联物；所述的一氧化氮供体分子包括二甲胺偶氮鎓二醇盐、二乙胺偶氮鎓二醇盐、N-甲基乙醇胺偶氮鎓二醇盐、二乙醇胺偶氮鎓二醇盐、吡咯偶氮鎓二醇盐、哌啶偶氮鎓二醇盐和哌嗪偶氮鎓二醇盐；突变的抗CD24嵌合抗体的轻链氨基酸序列表为SEQ ID NO.1，其重链氨基酸序列表为SEQ ID NO.2。/n

【技术特征摘要】
1.一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于：利用含有马来酰亚胺环和双硫键的Linker将一氧化氮供体分子和突变的抗CD24嵌合抗体定点连接起来，形成抗体一氧化氮偶联物；所述的一氧化氮供体分子包括二甲胺偶氮鎓二醇盐、二乙胺偶氮鎓二醇盐、N-甲基乙醇胺偶氮鎓二醇盐、二乙醇胺偶氮鎓二醇盐、吡咯偶氮鎓二醇盐、哌啶偶氮鎓二醇盐和哌嗪偶氮鎓二醇盐；突变的抗CD24嵌合抗体的轻链氨基酸序列表为SEQIDNO.1，其重链氨基酸序列表为SEQIDNO.2。


2.根据权利要求1所述的一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于化合物HL-2与突变的抗CD24嵌合抗体连接形成偶联物HN-02，其中HL-2结构如下：





3.根据权利要求2所述的一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于：所述的化合物HL-2按如下步骤制备获得：



步骤a：将0.1M的碳酸氢钠水溶液缓慢加入到浓度为0.55mol/L的化合物1水溶液中，室温反应20min；干燥得到化合物2；
步骤b：将12.4g化合物3加入苯搅拌，缓慢加入26.6gNBS，室温下反应,得到化合物4；
步骤c：在化合物4中加入0.82g偶氮二异丁腈，并补加26.6gNBS，80℃下回流反应20h；旋除溶剂，然后用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥,浓缩并柱层析，得到白...

【专利技术属性】
技术研发人员：张娟，黄张建，郭敏姬，黄林华，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32