牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒，包括由SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.5所示核苷酸序列组成的牛副流感病毒RPA检测引物组，以及由SEQ.ID.NO.8和SEQ.ID.NO.10所示核苷酸序列组成的牛呼吸道合胞体病毒RPA检测引物组。所述试剂盒基于重组酶聚合酶扩增法，以利用RNA反转录形成的cDNA为模板并在优化的反应温度和时间下进行扩增反应，利用核酸凝胶电泳获得检测结果。本发明专利技术可用于同时对牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒进行检测，操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为牛病原体的现场筛查提供了快速检测试剂。

【技术实现步骤摘要】
牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒
本专利技术涉及病毒核酸检测领域，具体涉及一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重RPA检测引物组、试剂盒及检测方法。
技术介绍
牛副流行性感冒是由牛副流感病毒3型(Bovineparainfluenza-3virus，BPIV-3)感染引起的一种以高热、呼吸困难和咳嗽为特征并以呼吸道症状为主的疾病，常与其他呼吸道病毒出现混合感染。BPIV-3感染可引起牛呼吸功能损伤以及免疫抑制，并导致牛死亡，对舍饲育肥牛的危害极大，被认为是全球集约化养殖中造成重大经济损失的肺炎的主要病原体。牛呼吸道合胞体病毒(Bovinerespiratorysyncytialvirus，BRSV)是一种有囊膜的单股负链RNA病毒，感染后可导致流产和永久性肺损伤，促进机会性继发性病原体侵袭，对动物生产性能造成长期损失。养殖场多位于偏远的农村，条件简陋、交通不便，这就要求病原体的检测方法应具有较高的稳定性和便捷性。目前，常用于检测牛呼吸道病毒的方法包括病原体的分离鉴定、间接免疫荧光反应、聚合酶链式扩增(PCR)法、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重RPA检测引物组，其特征在于：该RPA检测引物组包括牛副流感病毒反转录本扩增引物对P1以及牛呼吸道合胞体病毒反转录本扩增引物对P2；/n所述引物对P1的核苷酸序列为：/n上游引物F2：5'-GAGTATGATCAAGACAATATGTTGCAAAATGG-3'/n下游引物R3：5'-CTGATTGTGTTGAAAAATGAAGCAAGACCTG-3'；/n所述引物对P2的核苷酸序列为：/n上游引物F'3：5'-GGAGGTAGTAGGGTAGAAGGAATCTTTGCAGGG-3'/n下游引物R'2：5'-CTCCACCTAACTTTTGTGCAT...

【技术特征摘要】
1.一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重RPA检测引物组，其特征在于：该RPA检测引物组包括牛副流感病毒反转录本扩增引物对P1以及牛呼吸道合胞体病毒反转录本扩增引物对P2；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物F2：5'-GAGTATGATCAAGACAATATGTTGCAAAATGG-3'
下游引物R3：5'-CTGATTGTGTTGAAAAATGAAGCAAGACCTG-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物F'3：5'-GGAGGTAGTAGGGTAGAAGGAATCTTTGCAGGG-3'
下游引物R'2：5'-CTCCACCTAACTTTTGTGCATATTCATAGACTTC-3'。


2.一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重RPA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括RPA检测引物组；所述RPA检测引物组包括牛副流感病毒反转录本扩增引物对P1以及牛呼吸道合胞体病毒反转录本扩增引物对P2；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物F2：5'-GAGTATGATCAAGACAATATGTTGCAAAATGG-3'
下游引物R3：5'-CTGATTGTGTTGAAAAATGAAGCAAGACCTG-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物F'3：5'-GGAGGTAGTAGGGTAGAAGGAATCTTTGCAGGG-3'
下游引物R'2：5'-CTCCACCTAACTTTTGTGCATATTCATAGACTTC-3'。


3.根据权利要求2所述的双重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，引物的工作浓度为5～20μM。


4.根据权利要求3所述的双重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，根据扩增片段的大小差异，扩增片段较小的引物对P2在建立的RPA扩增反应体系中的含量大于扩增片段较大的引物对P1在该反应体系中的含量。


5.根据权利要求3所述的双重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，F2:R3:F'3:R'2的用量体积比为(1.1～1.2):(1.1～1.2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓民，童德文，王凯丽，刘丹，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61