用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法，基于液相芯片技术，可同时进行17种呼吸道病原微生物检测，具有高通量、操作简单快速、灵敏度高、特异性强、准确度高、费用低等优点。

【技术实现步骤摘要】
用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法
本专利技术涉及分子诊断领域，主要涉及用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法。
技术介绍
呼吸道病毒感染不仅可以引起多重严重的并发症，还具有潜在引发局部范围甚至世界大流行的可能。近年来，新发呼吸道传染病如新型冠状肺炎、SARS等的爆发，为人类社会和国民经济带来巨大的冲击。及时快速与准确地鉴别病原微生物，对预防疾病的传播与患者的诊断治疗至关重要。目前传统实验室诊断技术多数操作繁琐、耗时费力，不利于早期快速诊断与疫情的应急处理，因此建立快速有效的检测多种常见呼吸道病原微生物的鉴别诊断平台，实现多种呼吸道病原微生物基因的同时快速检测，可为及时应对突发呼吸道传染病以及疫情监测提供技术手段。由于病原种类很多，而病毒的分离培养周期长，技术难，用免疫学检测方法很难快速确定病原体。自1988年首次提出多重PCR这个概念，经过多年的发展，多重PCR技术逐渐成熟。基于多重PCR的检测方法也逐渐成熟，如CN112176109A一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法；CN112176112A一种禽流感病毒H5，H7，H9亚型三重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及其应用等。检测手段主要有毛细管电泳（或凝胶电泳）、实时荧光定量PCR检测、质谱、液相芯片等方式，其中，毛细管电泳操作繁琐，凝胶电压检测灵敏度有限；实时荧光定量PCR检测通量低；质谱仪器昂贵且检测耗时较长。液相芯片技术是一种被用于高通量临床诊断的新型生物芯片技术，具有高通量、灵敏度高、重复性好、灵活性大等特点。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法，针对呼吸道病原微生物检测的高通量多重检测需求，开发基于液相芯片技术的呼吸道传染病检测系统，重点解决编码微球制备技术、多重扩增技术、高通量检测技术等关键技术，为呼吸道病原微生物快速检测提供有力的工具。本专利技术的技术方案如下：用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其中，包括以下18种引物对中的至少一种引物对：用于扩增甲型H1N1流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.1-2所示；用于扩增甲型H3N2流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.3-4所示；用于扩增甲型H7N9流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.5-6所示；用于扩增乙型流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.7-8所示；用于扩增人呼吸道合胞体病毒A基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.9-10所示；用于扩增人呼吸道合胞体病毒B基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.11-12所示；用于扩增人副流感病毒Ⅰ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.13-14所示；用于扩增人副流感病毒Ⅱ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.15-16所示；用于扩增人副流感病毒Ⅲ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.17-18所示；用于扩增人偏肺病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.19-20所示；用于扩增人博卡病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.21-22所示；用于扩增人腺病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.23-24所示；用于扩增人冠状病毒OC43基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.25-26所示；用于扩增人冠状病毒NL63基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.27-28所示；用于扩增人冠状病毒229E基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.29-30所示；用于扩增人冠状病毒HKU1基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.31-32所示；用于扩增2019新型冠状病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.33-36所示。所述的用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其中，所述引物组包括18种引物对。所述的用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其中，引物的修饰物为5’Biotin或5’NH2C12。用于检测呼吸道病原微生物的探针微球组，其中，包括以下18种探针微球中的至少一种探针微球：用于检测甲型H1N1流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.37所示；用于检测甲型H3N2流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.38所示；用于检测甲型H7N9流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.39所示；用于检测乙型流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.40所示；用于检测人呼吸道合胞体病毒A的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.41所示；用于检测人呼吸道合胞体病毒B的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.42所示；用于检测人副流感病毒Ⅰ型的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.43所示；用于检测人副流感病毒Ⅱ型的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.44所示；用于检测人副流感病毒Ⅲ型的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.45所示；用于检测人偏肺病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.46所示；用于检测人博卡病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.47所示；用于检测人腺病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.48所示；用于检测人冠状病毒OC43的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.49所示；用于检测人冠状病毒NL63的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.50所示；用于检测人冠状病毒229E的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.51所示；用于检测人冠状病毒HKU1的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.52所示；用于检测2019新型冠状病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.53-54所示。所述的用于检测呼吸道病原微生物的探针微球组，其中，所述探针微球组包括18种探针微球。所述的用于检测呼吸道病原微生物的探针微球组，其中，特异性核酸探针的修饰物为5’NH2C12或5’Biotin。用于检测呼吸道病原微生物的试剂盒，其中，所述试剂盒包括如上所述的引物组和如上所述的探针微球组。所述的用于检测呼吸道病原微生物的试剂盒，其中，所述试剂盒分为PCR扩增试剂和杂交染色试剂；所述PCR扩增试剂包括所述引物组、PCRMix混合液、逆转录酶；所述杂交染色试剂包括所述探针微球组、杂交缓冲液、TE缓冲溶液、染料。用于检测呼吸道病原微生物的方法，其中，包括以下步骤：（1）将待检测样品的基因，用如上所述的引物组进行PCR扩增；（2）将PCR扩增产物与如上所述的探针本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其特征在于，包括以下18种引物对中的至少一种引物对：/n用于扩增甲型H1N1流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.1-2所示；/n用于扩增甲型H3N2流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.3-4所示；/n用于扩增甲型H7N9流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.5-6所示；/n用于扩增乙型流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.7-8所示；/n用于扩增人呼吸道合胞体病毒A基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.9-10所示；/n用于扩增人呼吸道合胞体病毒B基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.11-12所示；/n用于扩增人副流感病毒Ⅰ型基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.13-14所示；/n用于扩增人副流感病毒Ⅱ型基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.15-16所示；/n用于扩增人副流感病毒Ⅲ型基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.17-18所示；/n用于扩增人偏肺病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.19-20所示；/n用于扩增人博卡病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.21-22所示；/n用于扩增人腺病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO. 23-24所示；/n用于扩增人冠状病毒OC43基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO. 25-26所示；/n用于扩增人冠状病毒NL63基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO. 27-28所示；/n用于扩增人冠状病毒229E基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO. 29-30所示；/n用于扩增人冠状病毒HKU1基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.31-32所示；/n用于扩增2019新型冠状病毒基因的引物对，引物序列如SEQ ID NO.33-36所示。/n...

【技术特征摘要】
1.用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其特征在于，包括以下18种引物对中的至少一种引物对：
用于扩增甲型H1N1流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.1-2所示；
用于扩增甲型H3N2流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.3-4所示；
用于扩增甲型H7N9流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.5-6所示；
用于扩增乙型流感病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.7-8所示；
用于扩增人呼吸道合胞体病毒A基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.9-10所示；
用于扩增人呼吸道合胞体病毒B基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.11-12所示；
用于扩增人副流感病毒Ⅰ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.13-14所示；
用于扩增人副流感病毒Ⅱ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.15-16所示；
用于扩增人副流感病毒Ⅲ型基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.17-18所示；
用于扩增人偏肺病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.19-20所示；
用于扩增人博卡病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.21-22所示；
用于扩增人腺病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.23-24所示；
用于扩增人冠状病毒OC43基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.25-26所示；
用于扩增人冠状病毒NL63基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.27-28所示；
用于扩增人冠状病毒229E基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.29-30所示；
用于扩增人冠状病毒HKU1基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.31-32所示；
用于扩增2019新型冠状病毒基因的引物对，引物序列如SEQIDNO.33-36所示。


2.根据权利要求1所述的用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其特征在于，所述引物组包括18种引物对。


3.根据权利要求1所述的用于检测呼吸道病原微生物的引物组，其特征在于，引物的修饰物为5’Biotin或5’NH2C12。


4.用于检测呼吸道病原微生物的探针微球组，其特征在于，包括以下18种探针微球中的至少一种探针微球：
用于检测甲型H1N1流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.37所示；
用于检测甲型H3N2流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.38所示；
用于检测甲型H7N9流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.39所示；
用于检测乙型流感病毒的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.40所示；
用于检测人呼吸道合胞体病毒A的探针微球，连接的特异性核酸探针序列如SEQIDNO.41所示；
用于检测人呼吸道合胞体病毒B的探...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚春旭，顾桐旭，钟嘉俊，白鹏利，
申请(专利权)人：季华实验室，
类型：发明
国别省市：广东;44