一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用技术方案

本发明专利技术涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。本发明专利技术提供了一种2A肽(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3)，提供了含有所述2A肽编码基因的双顺反子表达载体及其构建方法，并通过构建含有所述2A肽的重组蛋白表达系统，将其应用于重组蛋白的表达，可以实现2个目的基因在哺乳动物细胞的高效表达。试验证明，在同等条件下，与其他2A肽比较，本发明专利技术提供的基于E2A和F2A的重组蛋白表达系统能够显著提高哺乳动物细胞重组蛋白的稳定表达水平，可广泛应用于制备各种目的蛋白，特别是抗体的制备。为改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。
技术介绍
重组蛋白是应用基因工程技术产生的蛋白质，近年来，重组蛋白已经成为生物制品的重要组成部分，在生物制药、临床诊断、科学研究中发挥着重要作用。重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，酵母蛋白表达、昆虫细胞蛋白表达及哺乳动物细胞蛋白表达。哺乳动物细胞生产的重组蛋白质能够进行正确折叠、装配和翻译后修饰，具有与人源蛋白分子结构更为接近的优势，因此哺乳动物细胞已经成为蛋白药物的主要表达宿主。目前近80％批准上市的重组蛋白药物均来自于哺乳动物细胞，其中应用最广泛的是人胚胎肾细胞293(humanembryonickidneycells293)细胞和中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovarycells，CHO)。但与大肠杆菌等表达系统相比，哺乳动物细胞的表达水平仍较低、获得高表达工程细胞株所需的时间长、细胞大规模培养的成本高等导致哺乳动物细胞生产蛋白质类药物的成本较高。这就需要改善哺乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种2A肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种2A肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO:1或SEQIDNO:3所示。


2.根据权利要求1所述的2A肽，其特征在于，所述2A肽的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2或SEQIDNO:4所示。


3.一种双顺反子表达载体，其特征在于，包含如权利要求1或2所述的2A肽的编码基因。


4.如权利要求1或2所述的2A肽、如权利要求3所述的双顺反子表达载体在提高重组蛋白表达水平方面的应用，其特征在于，所述重组蛋白通过哺乳动物重组蛋白表达系统制备而成。


5.构建如权利要求3所述的双顺反子表达载体的方法，其特征在于，包括将SEQIDNO:2或SEQIDNO:4所示基因序列插入出发载体的多克隆位点，获得重组表达载体。

【专利技术属性】
技术研发人员：王天云，林艳，张俊河，张继红，樊振林，米春柳，杨献军，
申请(专利权)人：河南普诺易生物制品研究院有限公司，新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41