本发明专利技术涉及兽用生物制品领域，更具体地，公开了三种O型口蹄疫病毒样颗粒以及抗O型口蹄疫的疫苗组合物及其制备方法。本发明专利技术筛选的毒株序列制备的病毒样颗粒对于我国流行的O型口蹄疫SEA型、CATHAY型及其变异株有着较好的免疫应答能力，以此制备的疫苗组合物能有效防治三种亚型口蹄疫的感染，是一种新型疫苗。
【技术实现步骤摘要】
一种抗O型口蹄疫的疫苗组合物及其制备方法和应用本申请是申请日为2014年11月7日、申请号为201410624645.2、专利技术名称为“一种抗O型口蹄疫的疫苗组合物及其制备方法和应用”的中国专利申请的分案申请。
本专利技术涉及兽用生物制品领域。更具体地，本专利技术涉及一种抗O型口蹄疫的疫苗组合物。
技术介绍
口蹄疫(FMD)为一种急性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病，是哺乳类动物中感染性最强的疾病，其中偶蹄类动物染病更会造成全球重大的经济损失。遭受口蹄疫危害的动物包括牛、羊、山羊和猪。致病因子，口蹄疫病毒(FMDV)，是小核糖核酸病毒属家族的一种口疮病毒。该病毒分为7个血清型(A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、和SAT3型)，其中O型口蹄疫病毒流行最为广泛。疫苗免疫是控制此病、保护家畜免受危害的有效措施。传统的疫苗包括灭活疫苗和减毒疫苗，他们虽然具有较好的免疫原性，也确实在FMD的预防和控制中起到了非常重要的作用。但是也存在以下几个缺点：1.病毒必须在高度密封的设备中生产，以防止污染周围环境；生产过程中，病毒有可能没有完全杀死或充分减毒，会导致疫苗中含有高毒性致病物质，进而导致被免疫动物发病而使疾病大规模流行。2.有效期很短，而且常常需要冷冻保存，这增大了疫苗在农村推广使用的难度。3.灭活苗免疫与感染FMD的动物区分不开，限制了动物出口。4.生产依赖于FMDV，故而不能彻底消灭FMDV。目前使用的灭活疫苗和减毒疫苗防控已不能适应当前畜牧业的健康发展。基因工程疫苗相比来说安全稳定性比较好，同时能给被免疫的动物提供有效的保护效果。但是仅仅是用抗原决定簇的表达蛋白来做疫苗，由于其分子小，结构简单，往往并不能起到很好的免疫效果；只有将抗原决定簇与大分子物质(如脂质体或者蛋白等)一起免疫才能诱导机体产生有效的免疫反应。病毒样颗粒(VLPs)是一种在体外和/或体内表达时能够自主包装成病毒外壳结构的类病毒粒子，它们是具有病毒的相似外壳结构但不具有病毒复制能力的假病毒。VLPs疫苗能有效地激发机体产生抗感染，抗肿瘤免疫，基于病毒样颗粒设计的疫苗是一种较为理想的疫苗形式。然而，O型口蹄疫病毒抗原性很弱，尤其是我国流行的CATHAY型变异株，其抗原发生较大变异，原有疫苗对其保护力明显下降，加之自身免疫原性较弱，不能诱导动物机体产生足够的免疫力。因此，筛选理想的毒株序列制备病毒样颗粒是当务之急，也符合国家提出的有效防控重大动物疫病，保障畜牧业健康可持续发展的需要。此外，O型口蹄疫各亚型之间的抗原性不同，彼此之间不能交互免疫，在我国，O型口蹄疫CATHAY型及其变异株长期流行，加上近年SEA型的流行，使得O型口蹄疫的流行更趋复杂化，迫切需要能同时防治三种亚型感染的新型疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，要解决的第一个技术问题是提供一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其中，病毒样颗粒由结构蛋白VP0、VP3和VP1构成。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.2，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.4，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.6。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.8，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.10，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.12。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.14，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.16，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.18。本专利技术要解决的第二个技术问题是提供一种预防和/或治疗O型FMDV感染的疫苗组合物，包含O型口蹄疫病毒氨基酸序列为SEQIDNO.2所示的VP0、SEQIDNO.4所示的VP3、SEQIDNO.6所示的VP1组成的病毒样颗粒和/或氨基酸序列为SEQIDNO.8所示的VP0、SEQIDNO.10所示的VP3、SEQIDNO.12所示的VP1组成的病毒样颗粒和/或氨基酸序列为SEQIDNO.14所示的VP0、SEQIDNO.16所示的VP3、SEQIDNO.18所示的VP1组成的病毒样颗粒及佐剂。优选地，本专利技术提供的预防和/或治疗O型FMDV感染的疫苗组合物，所述编码O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0的核苷酸序列为SEQIDNO.1，VP3的核苷酸序列为SEQIDNO.3，VP1的核苷酸序列为SEQIDNO.5。优选地，本专利技术提供的预防和/或治疗O型FMDV感染的疫苗组合物，所述编码O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0的核苷酸序列为SEQIDNO.7，VP3的核苷酸序列为SEQIDNO.9，VP1的核苷酸序列为SEQIDNO.11。优选地，本专利技术提供的预防和/或治疗O型FMDV感染的疫苗组合物，所述编码O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0的核苷酸序列为SEQIDNO.13，VP3的核苷酸序列为SEQIDNO.15，VP1的核苷酸序列为SEQIDNO.17。作为本专利技术的另外一种实施方式，本专利技术提供的预防和/或治疗O型FMDV感染的疫苗组合物包含氨基酸序列为SEQIDNO.2,4,6,8,10,12,14,16,18及核苷酸序列为SEQIDNO.1,3,5,7,9,11,13,15,17所示的变体。“变体”旨在表示基本上类似序列。对于多核苷酸，变体包含在天然多核苷酸之内的一个或更多位点的一个或更多核苷酸的缺失和/或添加，和/或在天然多核苷酸中一个或更多位点的一个或更多核苷酸的取代。如本文所用，“天然”多核苷酸或多肽分别包含天然存在的核苷酸序列或氨基酸序列。本专利技术的特定多核苷酸(即,参照多核苷酸)的变体也可通过比较由变体多核苷酸编码的多肽和由参照多核苷酸编码的多肽之间的百分率序列同一性来评价。“变体”蛋白旨在表示通过在天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的缺失或添加，和/或天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的取代而源于天然蛋白的蛋白。本专利技术包括的变体蛋白有生物学活性，即，它们有引发免疫应答的能力，能对O型FMDV攻击具有保护性反应的能力。变体包括等位基因变体。术语"等位基因变体"指称含有导致蛋白的氨基酸序列变化及在天然的群(例如，病毒物种或变种)之内存在的多态性的多核苷酸或多肽。该天然的等位基因变异可一般导致多核苷酸或多肽的1％～5％变异。等位基因变体可通过在许多不同物种中测序目的核酸序列来鉴定，其可通过使用鉴定那些物种中的相同的遗传座位的杂交探针来容易进行。任何和全部该核酸变异及得到的氨基酸多态性或是天然的等位基因变异的结果且不改变目的基因的功能活性的变异旨在本专利技术的范围之内。术语“预防”指通过其与O型FMDV相关的感染或疾病的症状被阻断或延迟；术语“治疗”指通过与O型FMDV相关的感染或疾病的症状被缓和或完全消除的过程。术语“保护性反应”意为在动物中预防O型FMDV相关疾病或由O型FMDV导致的感染的发作或减轻存在的这样的疾病的严重性。本专利技术涉及的O型FMDV蛋白，其有利地激发动物中的保护性反应。具体地，本专利技术实施本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP3和VP1构成，其中，所述的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQ ID NO.8，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.10，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.12。/n
【技术特征摘要】
1.一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP3和VP1构成，其中，所述的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.8，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.10，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.12。
2.一种抗O型口蹄疫的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求权利要求1所述的O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物还包含一种由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP3和VP1构成的O型口蹄疫病毒样颗粒，其中，所述结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.2，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.4，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.6。
4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含一种由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP3和VP1构成的O型口蹄疫病毒样颗粒，其中，所述的结构蛋白VP0氨基酸序列为SEQIDNO.14，VP3氨基酸序列为SEQIDNO.16，VP1氨基酸序列为SEQIDNO.18。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物中每种病毒样颗粒含量为50-150μg/ml。
6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物中每种病毒样颗粒含量为100μg/ml。
7.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒和/或A...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，肖燕，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，斯澳生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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