SIRPα-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法技术

本发明专利技术公开一种SIRPα‑4‑1BBL变体融合蛋白。本发明专利技术亦提供一种包括SIRPα变体的经分离的多肽。本发明专利技术亦提供一种编码SIRPα‑4‑1BBL融合蛋白或经分离的多肽的多核苷酸及核酸构建体、表达所述多核苷酸及所述核酸构建体的宿主细胞，及其使用的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】SIRPα-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法相关申请本申请基于35USC§119(e)要求于2018年7月11日提交美国临时专利申请案第62/696,362号的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。序列表声明建立于2019年7月11日且标题为77794序列表.txt的包括192,512个字节的ASCII文件与本申请同时提交，其通过引用结合在本申请中。
及
技术介绍
在本发行的一些实施例中，本专利技术涉及一SIRPα-4-1BBL变体融合蛋白及其使用方法。双信号蛋白(DSP)，亦称为信号转换蛋白(SCP)，目前在本领域中称为双功能融合蛋白，其将第I型膜蛋白的胞外部分(胞外氨基端)连接至第II型膜蛋白的胞外部分(胞外羧基端)，形成具有两个活性侧的融合蛋白(参见例如美国专利第7,569,663号及第8,039,437号)。SIRPα(信号调节蛋白α)是免疫球蛋白超家族的细胞表面受体。SIRPα主要在来自诸如巨噬细胞及树突状细胞(DC)的吞噬细胞谱系的免疫细胞的表面表达。CD47是SIRPα的配体。CD47是免疫球蛋白超家族中的细胞表面分子。CD47通过在吞噬细胞上所表达的SIRPα的连接作为吞噬作用的抑制剂。CD47在大多数的正常组织中广泛地表达。以此方式，由于CD47的失去会导致衰老或受损细胞的稳态的吞噬作用，因此，CD47作为“不要吃我的信号”及自我的标记。已发现CD47在多种人类肿瘤类型中表达。肿瘤通过表达抗吞噬信号，包括CD47，以逃避巨噬细胞的吞噬作用。尽管CD47在正常细胞上普遍地低表达，然而相较于正常细胞，多种肿瘤所表达的CD47水平会增加，且过度表达CD47会使肿瘤能够通过逃避吞噬作用而逃脱先天免疫系统的监视。4-1BBL是4-1BB受体(CD137)的活化配体，是TNF受体超家族的成员及有效的经诱导激活的T细胞共刺激分子。4-1BBL自然地形成同源三聚体，但通过4-1BB进行信号传导需要显着的4-1BBL的寡聚合。4-1BBL存在于多种抗原呈现细胞(APC)上，包括树突细胞(DC)、B细胞及巨噬细胞。在静止的T细胞或T细胞株中并未检测到4-1BB受体(<3％)，然而，当T细胞被激活时，4-1BB被稳定地上调。4-1BB的激活会上调生存的基因、增强细胞分裂、诱导细胞激素产生，以及在T细胞中防止经激活诱导的细胞的死亡。其他
技术介绍
包括：维斯科普夫K.等人，Science，(2013)；341(6141)：88-91；国际专利申请公开第WO2017027422号；国际专利申请公开第WO2001086003号；国际专利申请公开第WO2001075067号；国际专利申请公开第WO2017194641号；国际专利申请公开第WO2014180288号；国际专利申请公开第WO2017059168号；国际专利申请公开第WO2001/049318号；国际专利申请公开第WO2016/139668号；国际专利申请公开第WO2014/106839号；国际专利申请公开第WO2012/042480号；美国专利申请公开第20150183881号；美国专利申请公开第20070110746号；美国专利申请公开第20070036783号；以及美国专利第9562087号。
技术实现思路
根据本专利技术的一些实施例的一方面，提供一种SIRPα-4-1BBL融合蛋白，包括一SIRPα氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24及26所组成的群组，及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列：(a)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：22、23、27及28所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：74及76所组成的群组，且不包括对应于SEQIDNO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQIDNO：72具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQIDNO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQIDNO：70具有至少80％的同一性；及/或(b)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：(i)结合CD47及4-1BB；(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞；及/或(iv)相较于缺乏所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白，增强通过吞噬细胞表达所述CD47的病理细胞的吞噬作用。根据本专利技术的一些实施例的一方面，所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括：一SIRPα氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24及26所组成的群组；及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：22、23、27及28所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：(i)结合CD47及4-1BB；(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞；及/或(iv)相较于缺乏所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白，增强通过吞噬细胞表达所述CD47的病理细胞的吞噬作用。根据本专利技术的一些实施例的一方面，所述经分离的多肽包括：一SIRPα氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24至26所组成的群组；且其中所述多肽具有结合CD47的能力。根据本专利技术的一些实施例的一方面，提供一种经分离的多肽，包括一4-1BBL氨基酸序列，其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：22、23、27及28所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：(i)结合4-1BB；(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；及/或(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞。根据本专利技术的一些实施例，所述SIRPα氨基酸序列的长度为至少115个氨基酸。根据本专利技术的一些实施例，所述SIRPα氨基酸序列的长度为至少116个氨基酸。根据本专利技术的一些实施例，所述SI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括：一SIRPα氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：24及26所组成的群组，及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列：/n(a)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：22、23、27及28所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQ ID NO：74及76所组成的群组，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQ ID NO：72具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQ ID NO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQ ID NO：70具有至少80％的同一性；及/或/n(b)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；/n且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：/n(i)结合CD47及4-1BB；/n(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；/n(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞；及/或/n(iv)相较于缺乏所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白，增强通过吞噬细胞表达所述CD47的病理细胞的吞噬作用。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180711 US 62/696,3621.一种SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括：一SIRPα氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24及26所组成的群组，及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列：
(a)长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：22、23、27及28所组成的群组；长度为170至197个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少80％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：74及76所组成的群组，且不包括对应于SEQIDNO：3的氨基酸片段G198至E205；长度为170至182个氨基酸且与SEQIDNO：72具有至少80％的同一性，且不包括对应于SEQIDNO：3的氨基酸片段A1至E23；或长度为184个氨基酸且与SEQIDNO：70具有至少80％的同一性；及/或
(b)包括4-1BBL氨基酸序列的三个重复；
且其中所述融合蛋白具有至少以下的能力之一：
(i)结合CD47及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞；及/或
(iv)相较于缺乏所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白，增强通过吞噬细胞表达所述CD47的病理细胞的吞噬作用。


2.一种SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括：一SIRPα氨基酸序列及一4-1BBL氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24及26所组成的群组；及/或其中所述4-1BBL氨基酸序列的长度为185至202个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：22、23、27及28所组成的群组；且其中所述多肽具有至少以下的能力之一：
(i)结合CD47及4-1BB；
(ii)在表达所述4-1BB的细胞中激活所述4-1BB的信号传导途径；
(iii)共刺激表达所述4-1BB的免疫细胞；及/或
(iv)相较于缺乏所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白，增强通过吞噬细胞表达所述CD47的病理细胞的吞噬作用。


3.一种经分离的多肽，其特征在于：所述经分离的多肽包括：一SIRPα氨基酸序列，其中所述SIRPα氨基酸序列的长度为100至119个氨基酸且与一氨基酸序列具有至少95％的同一性，所述氨基酸序列是选自由SEQIDNO：24至26所组成的群组；且其中所述多肽具有结合CD47的能力。


4.如权利要求1至2中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或如权利要求3所述的经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列的长度为至少115个氨基酸。


5.如权利要求1至3及4中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列的长度为至少116个氨基酸。


6.如权利要求3及4至5中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列包括在一氨基酸残基处的一突变，所述氨基酸残基是选自由对应于SEQIDNO：2的L4、A27、E47及V92所组成的群组。


7.如权利要求6所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列包括在一氨基酸残基处的一突体，所述突变是选自由对应于SEQIDNO：2的L4I、A27I、E47V及V92I所组成的群组。


8.如权利要求1至3及4至7中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列不包括对应于SEQIDNO：2的氨基酸残基K117至Y343中的任一者。


9.如权利要求1至3、4及8中任一项所述的SIRPα-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列包括所述SEQIDNO：24或26。


10.如权利要求1至3、4至5及8中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白或经分离的多肽，其特征在于：所述SIRPα氨基酸序列是由所述SEQIDNO：24或26所组成。


11.如权利要求1至2及4至10中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列不包括对应于SEQIDNO：3的氨基酸残基A1至V6或A1至G14中的任一者。


12.如权利要求1至2、4至10及11中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列包括所述SEQIDNO：22、23、27或28。


13.如权利要求1至2及4至10及11中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：所述4-1BBL氨基酸序列是由所述SEQIDNO：22、23、27或28所组成。


14.如权利要求1至2中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：
(i)在所述SIRPα氨基酸序列是如SEQIDNO：2或25所示，以及所述4-1BBL的氨基酸序列是如SEQIDNO：22、23、27或28所示；或
(ii)在所述SIRPα氨基酸序列是如SEQIDNO：24或26所示，以及所述4-1BBL的氨基酸序列是如SEQIDNO：3、22、23、27或28所示。


15.如权利要求1至2中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：
(i)在所述SIRPα氨基酸序列是如SEQIDNO：2所示，以及所述4-1BBL的氨基酸序列是如SEQIDNO：22或23所示；或
(ii)在所述SIRPα氨基酸序列是如SEQIDNO：24所示，以及所述4-1BBL的氨基酸序列是如SEQIDNO：22所示。


16.如权利要求1至2及4至15中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在所述SIRPα与所述4-1BBL之间，所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括一连接子。


17.如权利要求1及4至15中任一项所述的SIRPα-4-1BBL融合蛋白，其特征在于：在所述4-1BBL氨基酸序列的各个所述三个重复之间，所述SIRPα-4-1BBL融合蛋白包括一连接子。


18.如权利要求16至17...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾莉丝·佩克，伊泰·布洛奇，
申请(专利权)人：卡尔医学有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL